本发明专利技术涉及一种肺癌易感基因无创检测试剂盒，所述试剂盒包括多个肺癌易感基因的特异性扩增引物混合液、测序引物和PCR扩增试剂预混物。本发明专利技术可以同时检测肺癌易感基因的多个区域，准确得出这些区域的序列信息，根据各基因位点突变的综合信息，结合易感风险度评估方法计算出肺癌的风险，检测灵敏度高，并能进一步同时对大量样品检测。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于肺癌易感基因领域，特别涉及一种肺癌易感基因无创检测试剂盒。
技术介绍
肺癌目前是全世界最主要的癌症死亡原因。2003年世界卫生组织（WHO)公布的死 亡率是110万/年，发病率是120万/年。多发生在40岁以上，发病年龄高峰在60-79岁 之间。男女患病率为2. 3:1。肺癌的危害因素主要包括吸烟、大气污染、电离辐射及遗传因 素等。 所谓疾病易感性是指由遗传决定的易于患某种或某类疾病的倾向性。具有疾病易 感性的人一定具有特定的遗传特征，简单地说就是带有某种疾病的易感基因组型。 目前针对肺癌单个易感基因检测的研究成果已经很多，但是不同研究的具体基因 位点与肺癌易感的关联度强弱不一，并且个别基因位点尚不能较为准确地评价肺癌易感程 度。 CN200610116093. X公开了一种通过PARPl基因、CYPlAl基因和XRCCl基因检测肺 癌易感性的试剂盒，通过三个基因的检测尚不能全面准确地评价肺癌易感程度。 因此需要一种能更为全面、准确评估肺癌易感程度的基因检测方法，对与肺癌易 感关联度高的一些基因位点进行检测。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种肺癌易感基因无创检测试剂盒，该试剂盒 可以同时检测肺癌易感基因的多个区域，准确得出这些区域的序列信息，根据各基因位点 突变的综合信息，结合易感风险度评估方法计算出肺癌的风险，检测灵敏度高，并能进一步 同时对大量样品检测。 本专利技术的一种肺癌易感基因无创检测试剂盒，所述试剂盒包括多个肺癌易感基因 的特异性扩增引物混合液、测序引物和PCR扩增试剂预混物；其中，特异性扩增引物为（方 向为5 ' -3 '端）： 所述多个肺癌易感基因的检测位点分别为：CYPlAlrsl048943 ;CYP2Elrs3813867 和 rs2031920 ;NAT2rsl799929、rsl799930 和 rsl799931 ;ERCC2rsl3181 ;XRCClrs25487 ; GSTPlrsl695。 所述测序引物的序列如下（方向为5' -3'端）： CYPlAl ：CTGTCTCCCTCTGGTTACAGGAAG ； CYP2E1 ：TGGTTCAGGAGAGGTGCAGTG ； NAT2 ：GATGTGGCAGCCTCTAGAAT ； ERCC2 ：TCAAACATCCTGTCCCTACTG ； XRCCl ：ACCAGCTGTGCCTTTGCCAAC ； GSTPl ：AGTGACTGTGTGTTGATCAG ； GSTMl与GSTTl基因多态性为大片段插入/缺失多态性，若缺失，其PCR扩增产物 凝胶电泳无条带。 所述PCR扩增试剂预混物包括DNA聚合酶和PCR扩增buffer。 所述试剂盒还包括PCR产物凝胶回收试剂。 有益效果 本专利技术可以同时检测肺癌易感基因的多个区域，准确得出这些区域的序列信息， 根据各基因位点突变的综合信息，结合易感风险度评估方法计算出肺癌的风险，检测灵敏 度高，并能进一步同时对大量样品检测。【具体实施方式】 下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术 而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术讲授的内容之后，本领域技术人 员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定 的范围。 实施例1 (1)基因位点信息 为了解决准确评估肺癌易感性的问题，所检测的基因位点全部选择自大量临床样 本的研究成果，并且样本来源均为中国汉族人群。研究表明其基因位点为与肺癌易感性高 度相关。 (2)特异性扩增引物及测序引物 (3)试剂盒成分 ①扩增引物混合液，每个基因各1管，浓度为2uM。 ②测序引物1管，浓度为2uM。 ③PCR扩增试剂预混物1管（包括DNA聚合酶，PCR扩增buffer) (4) PCR扩增方法 ①扩增体系配置 将6uL的扩增引物混合液、22uL的PCR扩增试剂预混物及2uL自备的DNA模板添 加至PCR扩增管，混合均匀，并短暂离心。 ② PCR 扩增程序：95 cC 3min ;95 cC lmin，63 cC - 58 cC 30sec (0· 5 cC / 循环）， 72°C 30sec，10 个循环；95°C lmin，58°C 30sec，72°C 30sec，30 个循环；72°C IOmin0 (5) PCR产物纯化 本专利技术试剂盒提供了 PCR产物凝胶回收试剂，PCR产物经凝胶电泳鉴定后，利用此 回收试剂盒纯化并回收PCR扩增片段。 (6) PCR扩增片段测序 将上述回收到的PCR产物，连同本专利技术特异设计的测序引物进行上机测序，获取 基因位点突变信息。 (7)肺癌易感性的评估 根据各基因位点突变的综合信息，结合易感风险度评估方法计算出肺癌的风险。【主权项】1. 一种肺癌易感基因无创检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括多个肺癌易感基 因的特异性扩增引物混合液、测序引物和PCR扩增试剂预混物；其中，特异性扩增引物为： CYPlAl :AGCTCCACTCACTTGACAC 和 AGGCTGAACCTTAGACCACA ; CYP2E1 :ACATTGTCAGTTCTCACCTCG 和 ACACAATAGAGCTCCACATTGACT ; NAT2 :ATTTTTACATCCCTCCAGTT 和 CTGATAGCACATAAGTTGAT ; ERCC2 :CCCGCTCTGGATTATACGGA 和 TTCATAAGACCTTCTAGCACCA ; XRCCl :AGATCACACCTAACTGGCAT 和 CCGCTCCTCTCAGTAGTCT ; GSTPl :CTCATCCTTCCACGCACATCC 和 CCCCATGACCCGTTACTTGGC ; GSTMl :GAACTCCCTGAAAAGCTAAAGC 和 GTTGGGCTCAAATATACGGTGG ; GSTTl :TTCCTTACTGGTCCTCACATCTC 和 TCACCGGATCATGGCCAGCA。2. 根据权利要求1所述的一种肺癌易感基因无创检测试剂盒，其特征在于：所述多 个肺癌易感基因的检测位点分别为：CYPlAlrsl048943 ;CYP2Elrs3813867和rs2031920 ; NAT2rsl799929、rsl799930 和 rsl799931 ;ERCC2rsl3181 ;XRCClrs25487 ;GSTPlrsl695。3. 根据权利要求1所述的一种肺癌易感基因无创检测试剂盒，其特征在于：所述测序 引物的序列为： CYPlAl ：CTGTCTCCCTCTGGTTACAGGAAG ； CYP2E1 ：TGGTTCAGGAGAGGTGCAGTG ； NAT2 ：GATGTGGCAGCCTCTAGAAT ； ERCC2 ：TCAAACATCCTGTCCCTACTG ； XRCCl ：ACCAGCTGTGCCTTTGCCAAC ； GSTPl :AGTGACTGTGTGTTGATCAG〇4. 根据权利要求1所述的一种肺癌易感基因无创检测试剂盒，其特征在于：所述PCR 扩增试剂预混物包括DNA聚合酶本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种肺癌易感基因无创检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括多个肺癌易感基因的特异性扩增引物混合液、测序引物和PCR扩增试剂预混物；其中，特异性扩增引物为：CYP1A1：AGCTCCACTCACTTGACAC和AGGCTGAACCTTAGACCACA；CYP2E1：ACATTGTCAGTTCTCACCTCG和ACACAATAGAGCTCCACATTGACT；NAT2：ATTTTTACATCCCTCCAGTT和CTGATAGCACATAAGTTGAT；ERCC2：CCCGCTCTGGATTATACGGA和TTCATAAGACCTTCTAGCACCA；XRCC1：AGATCACACCTAACTGGCAT和CCGCTCCTCTCAGTAGTCT；GSTP1：CTCATCCTTCCACGCACATCC和CCCCATGACCCGTTACTTGGC；GSTM1：GAACTCCCTGAAAAGCTAAAGC和GTTGGGCTCAAATATACGGTGG；GSTT1：TTCCTTACTGGTCCTCACATCTC和TCACCGGATCATGGCCAGCA。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张晓晶，沈挺，宋毅，费云舟，
申请(专利权)人：宁波美晶医疗技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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