一种黄精的组培快繁方法技术

本发明专利技术公开了一种黄精的组培快繁方法，包括外植体的选择与消毒、接种培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等步骤，并对各步骤中的具体培养基和培养条件进行了筛选，建立了黄精的快速繁殖体系，是生产黄精优质种苗和栽培推广的有效途径。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于组织培养快速繁殖
，具体涉及。
技术介绍
黄精为百合科植物黄精（POlygonatumsibircum Red ·)、多花黄精（P. Cyrtonema Hua)或滇黄精（P. KingianumColl. etHemsl.)的干燥根茎。按药材形状不同，习称"鸡头黄 精"，"姜形黄精"。黄精性平，味甘。具补脾润肺、益气养阴之功效。黄精主产于河北、内蒙 古、陕西省等省区。多花黄精主产于贵州、湖南、云南、安徽、浙江等省。滇黄精主产于贵州、 广西、云南等省区。 黄精为药食两用药材，市场前景广阔，加之新药研制和保健品开发，人们对黄精的 需求量也与日倶增，野生资源不能满足生产需要。近年来很多地方开始规范化人工栽培研 究，但主要是用块茎进行无性繁殖，繁殖系数低，种子繁殖周期也较长，限制了黄精的生产 规模。利用植物组织培养方法建立黄精的快速繁殖体系是生产黄精优质种苗和栽培推广的 有效途径。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供，可以加快黄精的繁殖速度，建 立起黄精的快速繁殖体系，是生产黄精优质种苗和栽培推广的有效途径。 为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案： -种黄精的组培快繁方法，包括如下步骤： (1)外植体的选择与消毒：选取带芽根茎作为外植体，去掉根系，剥离叶包片，切 取顶芽用流水冲洗lh，将顶芽晾干后在超净工作台上用75%酒精浸泡15~20s，用无菌水 冲洗3~5次后，放入0. 2 %的HgCl2溶液中，轻摇5~8min后取出，再用无菌水冲洗5~ 7次； (2)接种培养：将经过消毒的外植体的顶芽接种到诱导培养基上进行培养，培养 30~35d诱导出带芽组织； (3)增殖培养：将诱导成功的带芽组织每个切成5~8份，然后转接到增殖培养基 上进行35~40d的增殖培养，由带不定芽的团块增殖同时分化出芽； (4)生根培养：待增殖培养分化得到的小芽苗长到2~4cm时，转到生根培养基上 诱导分化生根，经过45d后长出3~6条根，根长达1~2cm ; (5)炼苗移栽：当90%以上芽苗的根长到3根以上、长度彡Icm时，即可进行炼苗， 具体为炼苗开始的最初1~2d培养瓶瓶口先敞开一半，然后瓶口全敞开2~3d，选择具有 3条以上健壮根的小苗，用镊子小心取出，然后用清水洗掉琼脂，将小苗移栽到炼苗大棚中 育苗盘的育苗基质中，用土覆盖轻压，栽好后用喷雾器喷水润湿，最后进行驯化，通风，遮阴 管理，炼苗时间为20-30d，即可移栽。 前述黄精的组培快繁方法中，进行步骤（4)所述生根培养之前，换瓶重复步骤（3) 所述增殖培养，以获取更多芽块。 前述黄精的组培快繁方法中，步骤⑵所述的诱导培养基为MS+6-BA2. 5mg/ 1+NAA0. 2mg/l+KTl. Omg/1+ 蔗糖 25g/l+ 琼脂 5g/l，其 pH 值为 5. 8 ~6. 0 ;培养条件为：温 度26°C，光照强度1800~22001x，光照时间为14h/d ;优选地，所述诱导培养基的pH值为 6. 0 ;培养条件中的光照强度为20001x。 前述黄精的组培快繁方法中，步骤（3)所述的增殖培养基为MS+6-BA2. Omg/ 1+NAA0. 2mg/l+KTl. Omg/1+蔗糖 25g/l+琼脂 5g/l，其 pH 值为 6. 0 ;培养条件为：温度 26°C， 光照强度20001x，光照时间为14h/d。 前述黄精的组培快繁方法中，步骤（4)所述的生根培养基为MS+NAA1. Omg/ 1+IBA0. 5mg/l+蔗糖25g/l+琼脂5g/l，其pH值为6. 0 ;培养条件为：温度26°C，光照强度 20001x，光照时间为14h/d。 前述黄精的组培快繁方法中，步骤（5)所述炼苗大棚内温度控制在20~30°C，相 对湿度控制在75%~85%之间。 前述黄精的组培快繁方法中，步骤（5)所述的育苗基质为：河沙、草木灰和泥炭土 按照1:1:1的体积比进行混合的混合物。 为了确保本专利技术的有益效果，申请人进行了一系列的实验，具体如下： 一、外植体的选择 选择黄精的顶芽和新发的幼嫩块茎作为外植体进行培养，培养条件一致为温 度26°C，光照强度为20001x，光照时间为14h/d ;培养基为MS+6-BA2. 5mg/l+NAA0. 2mg/ 1+KT1. Omg/1+蔗糖25g/l+琼脂5g/l，其pH值为5. 8 ;就其增殖率和不定芽首现日进行对 比，结果见表1。从对比结果可见，选择顶芽作为外植体，与幼嫩块茎作为外植体相比，其增 殖率较高，不定芽首现日较早。 表1不同外植体对比 二、HgCl2浓度的选择 将取(：12除菌液三种浓度0. 1%，0. 2%，0. 3%以及不同除菌时间进行对比，我们发 现选择〇. 2 %浓度5min时最佳，杂菌污染最低，浓度过高和时间过长同时也会杀死黄精组 织，降低成活率。 三、激素种类及浓度的选择 (1)诱导培养基：采取诱导增殖分化出不定芽，培养时设计了 MS培养基中添加蔗 糖25g/l和琼脂5g/l，然后就不同激素及其配比进行对比试验，具体分别为： Al, ΝΑΑ0. 1+KT1. 0 ； A2, ΝΑΑ0. 2+KT1. 0 ； A3, NAAO. 3+KT1. 0 ; A4,6-BA2. O+NAAO. 2+KT1. O ; A5,6-BA2. 5+NAAO. 2+KT1. O ; A6,6-BA2. 5+NAAO. 2+KT2. O ; A7,6-BA2. 5+NAAO. I ; A8,6-BA2. 5+NAAO. 2 ; A9，6-BA2. 5+NAAO. 3。 以上单位均为mg/1，通过试验我们发现，KT和6-BA对于组织的增殖作用明显，A2 不定芽首现日早但是分化率和增殖倍数相对低，A5和A6分化增殖较高，但A6分化低于A5， 其中A5分化增殖最佳，芽的分化率达10. 8。说明相对浓度为2. 5mg/l的6-BA有利于组织 增殖和芽的快速分化。 (2)增殖培养基：丛芽的增殖分化培养选择MS培养基添加蔗糖25g/l和琼脂5g/ 1，对不同激素浓度进行对比试验，具体为： BL6-BA1. O+NAAO. 2+KT1. 0 ； B2,6-BA2. O+NAAO. 2+KT1. 0 ; B3,6-BA3. O+NAAO. 2+KT1. 0 ； B4,6-BA2. 0+ΝΑΑ0. 2+KT2. 0 ; B5,6-BA2. 5+NAAO. 2+KT2. 5 ; B6,6-BA3. 0+ΝΑΑ0. 2+KT2. 0 ; 我们发现，6-BA浓度越高增殖倍数越高，但当达到3. 0mg/l时，增殖倍数反而降 低，B2和B6的发生周期相对较短，分别为35. 8d和35. 6d，以B2增殖倍数为5. 58,发生周 期35. 8d为最佳。 (3)生根培养基：MS培养基添加蔗糖25g/l和琼脂5g/l，然后分别添加（0· 1，0· 3， 0.5,0.8)mg/l IBA和（0.6,0.8，1.0，1.2)mg/l NAA进行对比，通过试验发现，在一定范围 内IBA和NAA的浓度对其根的发生率和根条数有显著影响，分别以0. 5mg/L IBA和1.0 mg/ L NAA最佳，生根率达95%，而两者对根长数影响均不显本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种黄精的组培快繁方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）外植体的选择与消毒：选取带芽根茎作为外植体，去掉根系，剥离叶包片，切取顶芽用流水冲洗1h，将顶芽晾干后在超净工作台上用75%酒精浸泡15～20s，用无菌水冲洗3～5次后，放入0.2%的HgCl2溶液中，轻摇5～8min后取出，再用无菌水冲洗5～7次；（2）接种培养：将经过消毒的外植体的顶芽接种到诱导培养基上进行培养，培养30～35d诱导出带芽组织；（3）增殖培养：将诱导成功的带芽组织每个切成5～8份，然后转接到增殖培养基上进行35～40d的增殖培养，由带不定芽的团块增殖同时分化出芽；（4）生根培养：待增殖培养分化得到的小芽苗长到2～4cm时，转到生根培养基上诱导分化生根，经过45d后长出3～6条根，根长达1～2cm；（5）炼苗移栽：当90%以上芽苗的根长到3根以上、长度≥1cm时，即可进行炼苗，具体为炼苗开始的最初1～2d培养瓶瓶口先敞开一半，然后瓶口全敞开2～3d，选择具有3条以上健壮根的小苗，用镊子小心取出，然后用清水洗掉琼脂，将小苗移栽到炼苗大棚中育苗盘的育苗基质中，用土覆盖轻压，栽好后用喷雾器喷水润湿，最后进行驯化，通风，遮阴管理，炼苗时间为20‑30d，即可移栽。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵君，
申请(专利权)人：贵州信邦中药材发展有限公司，
类型：发明
国别省市：贵州;52