本发明专利技术涉及生物医药技术领域。具体的说，本发明专利技术涉及一种沙苑子提取物的制备方法及用途。制备方法如下：沙苑子药材，粉碎，然后用石油醚脱脂。脱脂后的沙苑子粗粉，用80％的乙醇在70℃提取，合并提取液并减压浓缩至无醇后用石油醚萃取，水层减压浓缩后加蒸馏水稀释，AB-8大孔树脂纯化，聚酰胺纯化，30％甲醇洗脱。浓缩液过LH-20色谱柱，乙酸乙酯洗脱，洗脱液再过LH-20色谱柱，石油醚洗脱，收集石油醚洗脱液，合并后减压浓缩，干燥，即得。该提取物对无义突变有显著的抑制作用，可用于开发治疗杜兴型肌营养不良症，囊性纤维变性疾病以及血友病的药物。
【技术实现步骤摘要】
【专利说明】1
本专利技术涉及生物医药
具体的说，本专利技术涉及一种沙苑子提取物及其制备方法与用途，该提取物对无义突变具有显著的抑制作用。2
技术介绍
遗传性疾病是指遗传因素占主要发病原因的某些疾病。依据造成遗传性疾病的原因又可以将其分为单一基因缺陷的遗传疾病、染色体变异所引起的遗传疾病、由多重基因共同影向所造成的遗传疾病及粒线体基因的变异所引起的疾病。据统计，人群中大约1/3的人受遗传病所累，且有逐年增加的趋势。因此，遗传病是威胁人类健康的一类重要疾病，要引起足够重视。基因内一个氨基酸特定的密码子由于碱基取代或移码突变转换为多肽链合成的终止密码子，使多肽链合成中断；或相反地，基因内的终止密码子转换成一个氨基酸特定的密码子，使多肽链的合成不能在原定位点结束，而是继续延伸至下一个终止密码子为止，这种突变称为无义突变。无义突变导致正常的蛋白质合成不完整。从现有的研究资料来看，在大多数遗传性疾病中，都有相当大部分的病例是由无义突变引起的，如杜兴型肌营养不良症，囊性纤维变性疾病以及血友病等。因此筛选抗无义突变的药物对治疗相关遗传性疾病具有重要的意义。我们拥有庞大的由中药单体化合物和提取物组成的可溯源的天然产物库，并已经建立起抗无义突变的体外筛选系统，将天然产物库的化合物和提取物在体外筛选系统上进行初筛，挑选出有效的化合物和提取物。针对有效的提取物，将进一步分离纯化直到找到有效化合物。初步筛选的有效化合物将在无义突变的细胞株或小鼠上做进一步的试验鉴定，并对其作用方式及机理进行同步研究。3
技术实现思路
旨在提供一种对无义突变具有显著抑制作用的沙苑子提取物及其制备方法。该提取物在体外显示较强的抗无义突变作用，提示其可能对杜兴型肌营养不良症，囊性纤维变性疾病以及血友病有一定的预防或治疗作用。本专利技术涉及一种沙苑子提取物及其制备方法与用途，所述沙苑子指豆科一年生草本植物扁茎黄芪的成熟种子。本专利技术制备沙苑子提取物的方法和步骤如下:沙苑子粉碎，然后用石油醚脱脂2-3次。脱脂后的沙苑子粗粉，用70% -90%的乙醇在60-70°C提取2_3次，合并提取液并减压浓缩至无醇，用蒸馏水混悬，用石油醚萃取2-3次，取水层减压浓缩后加蒸馏水稀释2-3倍，AB-8大孔树脂纯化。上样后静置2h，用50%乙醇洗脱，收集洗脱液，合并后减压浓缩。浓缩液用聚酰胺纯化，30%甲醇洗脱，收集洗脱液，合并后减压浓缩。浓缩液过LH-20色谱柱，乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液,合并后浓缩,过LH-20色谱柱，石油醚洗脱，收集石油醚洗脱液，合并后减压浓缩，冷冻干燥，即得。4【具体实施方式】以下结合具体实施例，进一步阐明本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件。实施例1沙苑子提取物的制备取一定量沙苑子药材，粉碎，然后用10倍量石油醚脱脂3次。脱脂后的沙苑子粗粉，用80%的乙醇在70°C提取3次，合并提取液并减压浓缩至无醇。用少量蒸馏水混悬，用石油醚萃取3次，水层减压浓缩后加蒸馏水稀释3倍，AB-8大孔树脂纯化。上样后静置2h，用50%乙醇洗脱，收集洗脱液，合并后减压浓缩。浓缩液聚酰胺纯化，30%甲醇洗脱，收集洗脱液，合并后减压浓缩。浓缩液过LH-20色谱柱，乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液，合并后浓缩，过LH-20色谱柱，石油醚洗脱，收集石油醚洗脱液，合并后减压浓缩，冷冻干燥，即得。 实施例2沙苑子提取物对无义突变的抑制作用在荧光素酶基因中制造点突变，形成一个终止密码，转入细胞的DNA中。在正常不干预条件下，荧光素酶基因表达后的翻译过程由于终止密码的插入而提前终止，不能翻译形成正常的荧光素酶，加入荧光索酶底物，无荧光出现。药物干预细胞，如果药物可抑制无义突变则细胞可产生正常的荧光索酶，加入荧光素酶底物后，发出可检测的荧光信号，我们进一步研究发现沙苑子提取物能够抑制无义突变，使细胞产生荧光信号。【主权项】1.一种沙苑子提取物及其制备方法与用途。2.权利要求1中沙苑子指豆科一年生草本植物扁茎黄芪的成熟种子。3.权利要求1中的沙苑子提取物为沙苑子有效部位，非单体成分。4.权利要求1中的制备方法如下:沙苑子粉碎，然后用石油醚脱脂2-3次。脱脂后的沙苑子粗粉，用70% -90%的乙醇在60-70°C提取2-3次，合并提取液并减压浓缩至无醇，用蒸馏水混悬，用石油醚萃取2-3次，水层减压浓缩后加蒸馏水稀释2-3倍，AB-8大孔树脂纯化。上样后静置2h，用50%乙醇洗脱，收集洗脱液，合并后减压浓缩。浓缩液聚酰胺纯化，30%甲醇洗脱，收集洗脱液，合并后减压浓缩。浓缩液过LH-20色谱柱，乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液，合并后浓缩，过LH-20色谱柱，石油醚洗脱，收集石油醚洗脱液，合并后减压浓缩，冷冻干燥，即得。5.权利要求1中的用途指对无义突变有抑制作用，用于开发治疗杜兴型肌营养不良症，囊性纤维变性疾病以及血友病的药物。【专利摘要】本专利技术涉及生物医药
具体的说，本专利技术涉及一种沙苑子提取物的制备方法及用途。制备方法如下：沙苑子药材，粉碎，然后用石油醚脱脂。脱脂后的沙苑子粗粉，用80％的乙醇在70℃提取，合并提取液并减压浓缩至无醇后用石油醚萃取，水层减压浓缩后加蒸馏水稀释，AB-8大孔树脂纯化，聚酰胺纯化，30％甲醇洗脱。浓缩液过LH-20色谱柱，乙酸乙酯洗脱，洗脱液再过LH-20色谱柱，石油醚洗脱，收集石油醚洗脱液，合并后减压浓缩，干燥，即得。该提取物对无义突变有显著的抑制作用，可用于开发治疗杜兴型肌营养不良症，囊性纤维变性疾病以及血友病的药物。【IPC分类】A61K9/19, A61K36/481, A61P7/04, A61P21/00, A61P11/00【公开号】CN105012375【申请号】CN201410165911【专利技术人】何晓义, 冯宝军, 辛振强, 钱勇, 谢天培 【申请人】上海泉程生物技术有限公司【公开日】2015年11月4日【申请日】2014年4月23日本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种沙苑子提取物及其制备方法与用途。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：何晓义，冯宝军，辛振强，钱勇，谢天培，
申请(专利权)人：上海泉程生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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