本发明专利技术提供了一种猪伪狂犬病毒弱毒株，其中，该猪伪狂犬病毒弱毒株为不能表达RR蛋白的猪伪狂犬病毒变异株。本发明专利技术还提供了包含该猪伪狂犬病毒弱毒株抗原的疫苗组合物，及其制备方法和应用。经活疫苗免疫原性实验和致病性免疫原性试验证明，该猪伪狂犬活疫苗具有很好的保护力，基本没有临床症状，显示出很好的免疫保护。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种猪伪狂犬病病毒基因缺失株、及其制备的疫苗组合物，以及制备 方法和应用，属于动物病毒学领域。
技术介绍
伪狂犬病，又称Aujeszky氏病，是由疱疹病毒科（Herpesviridae) α亚科中的猪 疱瘆病毒I型（Suid herpesviruslstrain)所引起的猪、牛、羊等多种家畜、家禽和野生动 物的一种以发热、奇痒（除猪外）及脑脊髓炎为主症的急性传染病。猪的伪狂犬病在我国 广泛存在，危害严重，是制约规模化猪场生产的主要疫病之一。它能引起妊娠母猪流产、死 胎或木乃伊胎和仔猪出现神经症状、麻痹，死亡率高。PRV具有较强的泛嗜性、神经嗜性及潜 伏感染特性，在外周神经系统可以长期潜伏感染，当潜伏病毒被激活变成有感染力的病毒， 被潜伏感染的宿主就会发病。 现在技术普遍使用gE缺失的伪狂犬弱毒疫苗防治猪伪狂犬病，使用采用自然缺 失或者人工缺失某些毒性基因的毒株来预防猪伪狂犬病，例如BUK株是Bucharest株经过 鸡胚和鸡胚成纤维细胞800次传代获得的弱毒疫苗株，其缺失了大部分gE基因。还有人工 缺失的伪狂犬SA215毒株HB-98株等用于预防猪伪狂犬病。 最近的研究报道称猪伪狂犬病发生了新的特点，突出表现为任何年龄的猪都会 感染，可在猪群水平传播，潜伏期短（1~2天)，发病率在10%~100%之间，发病猪死亡 率在10%~100%之间（仔猪死亡率可高达100%)，感染后可引起猪只高热（40~42 °C， 持续3日以上)，呼吸困难，腹泻，喘，咳嗽，打喷嚏，后肢麻痹，犬坐，突然倒地，抽搐，侧卧 不起，角弓反张，泳状划水，最后衰竭而死，并可引起种公猪精液质量下降，怀孕母猪流产 (高达35%)，早产，死胎，弱仔(弱仔14日龄前全部死亡）等繁殖障碍症状。现有技术的疫 苗免疫猪只后不能完全抵抗野毒攻击，依然会出现高热，精神沉郁，食欲下降或废绝等症 状，感染率超过80%，发病率超过30%，死亡率在10%~20%之间。例如彭金美等.猪伪 狂犬病病毒新流行株的分离鉴定及抗原差异性分析.中国预防兽医学报，2013,35(1): 1-4;童武等.免疫后发病仔猪中伪狂犬病毒的分离和鉴定.中国动物传染病学报， 2013, 21(3):1-7;Yu et al. , Pathogenic Pseudorabies Virus, China, 2012. Emerging infectious Diseases. 2014, 20(I):102_104;An et al. , Pseudorabies virus variant in Bartha-K61-vaccinated pigs, China, Emerging infectious Diseases. 2013. 19(11)： 1749-1755)，现有技术还没有疫苗能够解决针对猪伪狂犬变异株引起的伪狂犬病。
技术实现思路
为解决现有技术的不足，本专利技术提供了一种活的减毒猪伪狂犬病毒株，用于防治 变异伪狂犬病毒引起的猪狂犬病。其中，所述猪伪狂犬病病毒株不能表达功能性RR蛋白 质。 本专利技术的主要目的在于提供一种猪伪狂犬病毒弱毒株，其中，所述猪伪狂犬病毒 弱毒株为不能表达RR蛋白的猪伪狂犬病毒株，优选地，所述伪狂犬病毒株为伪狂犬变异 株。 术语"不能表达功能性RR蛋白质"是指猪伪狂犬病毒RR基因中的任何突变，如插 入、替代或者缺失突变而导致其与野生型猪伪狂犬相比毒力降低时。通常，突变是一个或多 个核苷酸的插入、替换或者缺失。特别地，由于核苷酸插入导致的编码氨基酸移码。结果，将 合成截短的或氨基酸发生变化的RR蛋白，其具有降低的功能性或者甚至根本没有功能性。 术语"RR蛋白"是指猪伪狂犬病毒的核糖核苷酸还原酶，伪狂犬的RR基因由大亚 基（RR1，UL39编码）和小亚基（RR2, UL40编码）构成，形成二价复合体。它将核糖核苷二磷 酸还原成脱氧核糖核苷二磷酸，是脱氧核糖核苷从头合成途径的一个必需酶。 作为本专利技术的一种实施方式，本专利技术提供一种缺失RR基因的伪狂犬病毒基因工 程弱毒株。 本专利技术的另一目的在于一种猪伪狂犬病毒弱毒株，其中，所述猪伪狂犬病毒弱毒 株为不能表达TK、gE、gl蛋白的猪伪狂犬病毒变异株。 作为本专利技术的另一种实施方式，本专利技术提供一种缺失gE、TK、gl基因的伪狂犬病 毒基因工程弱毒株。 优选地，所述伪狂犬变异株为gE蛋白序列为SEQ ID N0.0 7或与其序列同源性为 95%以上的的毒株；更优选地，所述的猪伪狂犬变异株为经分离的所述猪伪狂犬病毒变异 株当重现所述猪伪狂犬病毒变异株感染时，免疫了现有技术中基因缺失伪狂犬弱毒疫苗后 依然会造成猪出现高热，精神沉郁，食欲下降或废绝症状的毒株；最优选地，所述的猪伪狂 犬变异株为当重现所述猪伪狂犬病毒变异株感染时，免疫了现有技术中缺失gE、TK和gl基 因中的一个及一个以上基因的伪狂犬弱毒疫苗后依然感染猪伪狂犬病并具备具有使9-10 日龄仔猪精神沉郁和食欲下降的毒株。 术语"猪伪狂犬变异株"也称为高致病性猪伪狂犬毒株，是指：表现为任何年龄的 猪都会感染，可在猪群水平传播，潜伏期短（1~2天)，发病率在10%~100%之间，发病猪 死亡率在10%~100%之间(仔猪死亡率可高达100%)，感染后可引起猪只高热（40~42°C， 持续3日以上)，呼吸困难，腹泻，喘，咳嗽，打喷嚏，后肢麻痹，犬坐，突然倒地，抽搐，侧卧不 起，角弓反张，泳状划水，最后衰竭而死，并可引起种公猪精液质量下降，怀孕母猪流产（高 达35%)，早产，死胎，弱仔(弱仔14日龄前全部死亡)等繁殖障碍症状。优选地，所述的伪狂 犬变异株为经分离的所述猪伪狂犬病毒变异株当重现所述猪伪狂犬病毒变异株感染时，免 疫了现有技术中基因缺失伪狂犬弱毒疫苗后依然会造成猪出现高热，精神沉郁，食欲下降 或废绝等症状的毒株，优选地所述伪狂犬变异株为gE蛋白序列为SEQ ID N0.0 7或与其序 列同源性为95%以上的蛋白序列的毒株。更优选地，所述的猪伪狂犬变异株为当重现所述 猪伪狂犬病毒变异株感染时，免疫了现有技术中缺失gE、TK和gl基因中的一个及一个以上 基因的伪狂犬弱毒疫苗后依然感染猪伪狂犬病并具备具有使9-10日龄仔猪精神沉郁和食 欲下降的毒株。 最优选的是伪狂犬变异株包括但不限于猪伪狂犬病毒HN1201株（Pseudorabies virus, strain HN1201)(保藏号为CCTCC NO. V201311;保藏于中国典型培养物保藏中 心；保藏地址为中国武汉?武汉大学，保藏日期为2013年5月20日），JS-2012株(童武， 张青占，郑浩等，免疫后发病仔猪中伪狂犬病毒的分离和鉴定.中国动物传染病学报 2013, 21 (3) : 1-7);猪伪狂犬HeNl株保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物 中心,其菌种保藏编号为CGMCCNO. 6656,公开于专利申请CN102994458A ;NVDC-PRV-BJ株、 NVDCPRV-HEB 株和 NVDC-PRV-SD 株（Xiuling Yu，Zhi Zhou，Dongmei Hu, et al. Pathogenic PseudorabiesVirus, 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种猪伪狂犬病毒弱毒株，其中，所述猪伪狂犬病毒弱毒株为不能表达RR蛋白的猪伪狂犬病毒株，优选地，所述伪狂犬病毒株为伪狂犬变异株。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张许科，孙进忠，谭菲菲，肖燕，田克恭，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41
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