用CD37-特异性和CD20-特异性结合分子减少B-细胞制造技术

本申请涉及用CD37-特异性和CD20-特异性结合分子减少B-细胞。本申请总体来说提供了用CD37-特异性结合分子在个体中减少B-细胞的方法。具体地，本发明专利技术提供了用单独CD37-特异性结合分子，或CD37-特异性结合分子和CD20-特异性结合分子的组合，在某些情况下协同组合，减少B-细胞的方法。本申请进一步提供了用于治疗涉及异常B-细胞活性的疾病的材料和方法。此外，本申请提供了人源化的CD37-特异性结合分子。

【技术实现步骤摘要】
用CD37-特异性和CD20-特异性结合分子减少B-细胞本申请是国际申请日为2006年7月25日的国际申请PCT/US2006/029038进入中国、中请号为200680027227.9的题为“用CD37-特异性和CD20-特异性结合分子减少B-细胞”的专利技术专利申请的分案申请。本申请根据35U.S.C.§119要求美国专利申请No.60/702,499(申请日2005年07月25日)和美国专利申请No.60/798,344(申请日2006年05月16日)的利益，该各项专利申请在此整体并入作为参考。
总体来说，本专利技术提供了在个体中用CD37-特异性结合分子减少B-细胞的方法。具体地，本专利技术提供了用单独CD37-特异性结合分子，或者CD37-特异性结合分子和CD20-特异性结合分子的组合，在某些情况下协同组合，减少B-细胞的方法。本专利技术还提供了治疗涉及异常B-细胞活性的疾病的材料和方法。
技术介绍
在其通常作用中，人免疫系统保护身体免受外来物质和病原体的损伤。免疫系统保护身体的方式之一，是产生称为B淋巴细胞或B-细胞的特化细胞。B-细胞产生结合并在某些情况下介导外来物质或病原体破坏的抗体。尽管在某些情况下，人免疫系统，且特别是人免疫系统B淋巴细胞产生差错而导致疾病。有许多癌症涉及不受控制的B-细胞增殖。也有许多自身免疫疾病涉及B-细胞抗体产生，所述抗体不结合外来物质和病原体而是结合身体部分。这样的抗体有时称为自身抗体。此外，还有多种自身免疫和炎症疾病在其病理学中涉及B-细胞，例如，通过不适当的B-细胞抗原呈递到T-细胞，或者通过其它涉及B-细胞的途径。例如，B-细胞缺陷的有自身免疫倾向的小鼠，不发展自身免疫性肾病、脉管炎或自身抗体。参见Shlomchik等，JExp.Med.，180：1295-306(1994)。有意思的是，这些具有B-细胞但免疫球蛋白产生缺陷的相同有自身免疫倾向的小鼠，在如Chan等，JExp.Med.，189：1639-48(1999)记载实验诱导时的确发展自身免疫疾病，这表明B-细胞在自身免疫疾病发展中起主要作用。B-细胞可通过其细胞表面分子鉴定。CD20是由单克隆抗体鉴定的第一个人B-细胞谱系特异表面分子。它是非糖基化的疏水35kDaB-细胞跨膜磷蛋白，其氨基和羧基末端都位于细胞内。参见，Einfeld等，EMBOJ.，7：711-17(1998)。CD20由所有正常成熟B-细胞表达，但不被前体B-细胞或浆细胞表达。还没有鉴定出CD20的天然配体，且CD20在B-细胞生物学中的功能仍未完全了解。另一B-细胞谱系特异细胞表面分子是CD37。CD37为高度糖基化的40-52kDa蛋白，其属于细胞表面抗原四穿膜区蛋白跨膜家族的成员。该蛋白横越细胞膜四次，从而形成了两个胞外环，并在胞质暴露其氨基和羧基末端。CD37高度表达于产正常抗体(sIg+)的B细胞，但在前B-细胞或浆细胞中不表达。CD37在静息和激活的T细胞、单核细胞和粒细胞上表达低，且在NK细胞、血小板或红细胞中没有可检测的CD37表达。参见，Belov等，CancerRes.，61(11)：4483-4489(2001)；Schwartz-Albiez等，J.Immunol.，140(3)：905-914(1988)；和Link等，J.Immunol.，137(9)：3013-3018(1988)。除正常B-细胞外，几乎所有B-细胞起源的恶性肿瘤的CD37表达都为阳性，包括CLL、NHL和毛细胞性白血病[Moore等，JournalofPathology，152：13-21(1987)；Merson和Brochier，ImmunologyLetters，19：269-272(1988)；和Faure等，AmericanJournalofDermatopathology，12(3)：122-133(1990)]。CD37参与了B-细胞功能调节，因为发现缺乏CD37的小鼠的血清IgG1水平低并在其对病毒抗原和模式抗原的体液应答中有所损害。它似乎作为非典型共刺激分子，或者经由与MHCII类分子的复合物形成通过直接影响抗原呈递，而起作用。参见Knobeloch等，Mol.Cell.Biol.，20(15)：5363-5369(2000).CD37也似乎在TCR信号传导中起作用。参见VanSpriel等，J.Immunol.，172：2953-2961(2004)。基于如下设想已进行了研究和药物开发，B-细胞谱系特异性细胞表面分子，例如CD37或CD20，自身可作为抗体靶，所述抗体将结合并介导破坏，在其表面上具有CD37或CD20的导致癌症和自身免疫疾病的B-细胞。术语“免疫治疗”是指，将结合CD37或CD20的非人类动物制备的抗体(或基于该制备抗体的抗体)，给予患者以耗尽导致癌症或自身免疫疾病的B-细胞。一种CD37抗体已经用131I标记，并在用于治疗NHL的临床实验中对其进行测试。参见Press等，J.Clin.Oncol.，7(3)：1027-1038(1989)；Bernstein等，CancerRes.(Suppl.)，50：1017-1021(1990)；Press等，Front.Radiat.Ther.Oncol.，24：204-213(1990)；Press等，Adv.Exp.Med.Biol.，303：91-96(1991)以及Brown等，Nucl.Med.Biol.，24：657-663(1997)。抗体MB-1，为缺乏Fc效应子功能例如抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的鼠IgG1单克隆抗体，且MB-1在体内异种移植模型中并不抑制肿瘤生长，除非它已用同位素标记(Buchsbaum等，CancerRes.，52(83)：6476-6481(1992)。131I-MB-1的有益生物分布在低肿瘤负荷(＜1kg)的淋巴瘤患者中可见，且对这些患者治疗导致持续4-11个月的完全肿瘤缓解(Press等，1989和Bernstein等1990)。此外，由与G28-1(另一抗-CD37抗体)连接的药物阿霉素组成的免疫缀合物，也在小鼠中进行了评估并显示出通过药物内化和胞内释放的作用。参见Braslawsky等，CancerImmunol.Immunother.，33(6)：367-374(1991)。各研究小组已经研究了抗-CD20抗体在治疗B-细胞相关疾病中的应用。一种治疗由以放射性核素形式制备的用于治疗B-细胞淋巴瘤的抗-CD20抗体(例如131I-标记的抗-CD20抗体)，以及用于缓解前列腺和乳癌转移所致骨痛的89Sr-标记形式组成[Endo，GanToKagakuRyoho，26：744-748(1999)]。另一研究小组开发出了对CD20特异性的嵌合单克隆抗体，其由与人IgG1重链和人κ轻链恒定区融合的鼠源重链和轻链可变区组成。嵌合抗体，据报道，保留了结合CD20的能力和介导ADCC及结合补体的能力。参见，Liu等，J.Immunol.139：3521-26(1987)。然而，另一嵌合抗-CD20抗体由IDEC杂交瘤C2B8组成，且命名为利妥希玛(rituximab)。利妥希玛抗肿瘤活性机理，据认为是几种活性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种减少B‑细胞的方法，其包括将B‑细胞暴露于一种或多种CD37‑特异性结合分子和一种或多种CD20‑特异性结合分子的协同组合。

【技术特征摘要】
2005.07.25 US 60/702499;2006.05.16 US 60/8005951.一种人源化或嵌合CD37-特异性免疫球蛋白结合蛋白，其包括：（a）轻链可变区，其从氨基末端到羧基末端包含第一构架区、包含SEQIDNO：61所示氨基酸序列的轻链CDR1、第二构架区、包含SEQIDNO：64所示氨基酸序列的轻链CDR2、第三构架区、包含SEQIDNO：66所示氨基酸序列的轻链CDR3和第四构架区；和（b）重链可变区，其从氨基末端到羧基末端包含第一构架区、包含SEQIDNO：63所示氨基酸序列的重链CDR1、第二构架区、包含SEQIDNO：65所示氨基酸序列的重链CDR2、第三构架区、包含SEQIDNO：69所示氨基酸序列的重链CDR3和第四构架区；其中所述结合蛋白结合人CD37。2.一种人源化或嵌合CD37-特异性免疫球蛋白结合蛋白，其包括：（a）轻链可变区，其从氨基末端到羧基末端包含第一构架区、包含SEQIDNO：61所示氨基酸序列的轻链CDR1、第二构架区、包含SEQIDNO：64所示氨基酸序列的轻链CDR2、第三构架区、包含SEQIDNO：66所示氨基酸序列的轻链CDR3和第四构架区；和（b）重链可变区，其从氨基末端到羧基末端包含第一构架区、包含SEQIDNO：63所示氨基酸序列的重链CDR1、第二构架区、包含SEQIDNO：65所示氨基酸序列的重链CDR2、第三构架区、包含SEQIDNO：67所示氨基酸序列的重链CDR3和第四构架区；其中所述结合蛋白结合人CD37。3.一种人源化或嵌合CD37-特异性免疫球蛋白结合蛋白，其包括：（a）轻链可变区，其从氨基末端到羧基末端包含第一构架区、包含SEQIDNO：61所示氨基酸序列的轻链CDR1、第二构架区、包含SEQIDNO：64所示氨基酸序列的轻链CDR2、第三构架区、包含SEQIDNO：66所示氨基酸序列的轻链CDR3；和（b）重链可变区，其从氨基末端到羧基末端包含第一构架区、包含SEQIDNO：63所示氨基酸序列的重链CDR1、第二构架区、包含SEQIDNO：65所示氨基酸序列的重链CDR2、第三构架区、包含SEQIDNO：68所示氨基酸序列的重链CDR3；其中所述结合蛋白结合人CD37。4.根据权利要求1-3任一项的人源化或嵌合CD37-特异性结合蛋白，其中所述CD37-特异性结合蛋白包含单链Fv（scFv）多肽、或从氨基到羧基末端包含下述的单链多肽：CD37-特异性scFv、人免疫球蛋白铰链区多肽和人免疫球蛋白CH2和CH3结构域。5.根据权利要求1-3任一项的人源化或嵌合CD37-特异性结合蛋白，其中所述轻链可变区通过包含(Gly4Ser)n的接头肽与所述重链可变区附着，其中n是1、2、3、4、5或6，如SEQIDNO：221、222、223、224、225或226中所示的。6.根据权利要求5的人源化或嵌合CD37-特异性结合蛋白，其中所述轻链和重链可变区通过包含下述氨基酸序列之一的铰链区多肽与CH2和CH3结构域相连：SEQIDNO：90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、115、116、118、120、122、124、126或127。7.根据权利要求6的人源化或嵌合CD37-特异性结合蛋白，其中所述铰链区多肽包含SEQIDNO：92或SEQIDNO：106中所示的氨基酸序列。8.根据权利要求6的人源化或嵌合CD37-特异性结合蛋白，其中所述CH2和CH3结构域是IgG1CH2和CH3结构域。9.根据权利要求1-3任一项的人源化或嵌合CD37-特异性结合蛋白，其包含SEQIDNO：48、52或82中所示的氨基酸序列。10.根据权利要求1-3任一项的人源化或嵌合CD37-特异性结合蛋白，其中所述结合蛋白具有0.5nM-10nM的对人CD37的结合亲和力。11.一种组合物，其包含根据权利要求1-10任一项的人源化或嵌合CD37-特异性结合蛋白和药学上可接受载体。12.一种分离的核酸分子，其包含编码根据权利要求1-11任一项的人源化或嵌合CD37-特异性结合蛋白的核苷酸序列。13.一种载体，其包含权利要求12的分离的核酸分子。14.一种用根据权利要求13的载体转染或转化的宿主细胞。15.根据权利要求1-10任一项的人源化或嵌合CD37-特异性结合蛋白或根据权利要求11的组合物用于制备治疗需要所述治疗的人受试者中与异常B-细胞活性相关疾病的药物的用途，其中所述与异常B-细胞活性相关疾病涉及表达CD37的B细胞。16.根据权利要求15的用途，其中所述与异常B-细胞活性相关疾病是B-细胞癌或自身免疫疾病。17.根据权利要求16的用途，其中所述自身免疫疾病是类风湿性关节炎、多发性硬化、全身性红斑狼疮、Crohn氏病、Sjogren氏综合征、Grave氏病、I型糖尿病、牛皮癣、免疫性血小板减少性紫癜、天疱...

【专利技术属性】
技术研发人员：LS格罗斯迈尔，MS海登勒贝特，JA勒贝特，PA汤普逊，SA西蒙，W布拉迪，
申请(专利权)人：新兴产品开发西雅图有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US