角质层状态的评价方法及关于化妆品的角质层改善效果的评价方法技术

本发明专利技术的课题涉及提供更简便地评价角质层状态的方法。通过使水溶性染料的溶液与角质层片接触，计测染色强度或荧光强度，从而能够简便地进行角质层状态的评价。进一步提供通过应用本发明专利技术的使用了水溶性染料的角质层状态的评价方法，从而对化妆品或美容处置的角质层改善效果进行评价的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】角质层状态的评价方法及关于化妆品的角质层改善效果的评价方法
本专利技术涉及角质层状态的评价方法。此外，本专利技术也涉及对化妆品或美容处置的角质层改善效果进行评价的方法。
技术介绍
在选择化妆品方面，准确地了解皮肤的状态是非常重要的，为了保持更理想的皮肤状态，需要根据皮肤状态来选择化妆品、美容方法。皮肤状态的评价中，使用Reviscometer、Cutometer等来测定皮肤的柔软性；进行了皮肤水分蒸发量(TEWL)的计测、利用显微镜进行的肌理的测定、利用带剥离进行的角质层评价等(非专利文献1、2、3，专利文献1)。其中，可以认为利用带剥离进行的角质层评价能够容易采取，对于适当地评价肌肤状态是有效的，公开了除了角质细胞的形状、面积、核的有无以外，通过使用能够染色β折叠结构的刚果红将角质层进行染色来观察，从而鉴别皮肤的柔软性的方法(专利文献2)。由β折叠结构的多寡来表现的皮肤柔软性虽然是角质层状态的指标之一，但除了柔软性以外，有显示角质层状态的各种特性，例如透明度、角质层细胞间脂质的结构、角质层屏障功能等。然而，关于从带剥离出的角质层简便地测定这些信息的方法，还没有进行充分的研究，此外能够简便地鉴别肌肤粗糙状态的方法也没有确立。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特开2007-033201号公报专利文献2：日本特开2007-263655号公报非专利文献非专利文献1:小山内宰等：アンチエイジングシリーズ皮膚の抗老化最前線，第150页～第161页非专利文献2:高桥元次等：アンチエイジングシリーズ皮膚の抗老化最前線，第114页～第133页非专利文献3:(株)インテグラル：FragranceJournal,35(2),67页～69页(2007年)
技术实现思路
专利技术所要解决的课题本专利技术的课题在于提供更简便地评价角质层状态的方法。进一步，本专利技术的课题在于提供使用简便地评价角质层状态的方法，来评价关于角质层改善效果的候选化妆品或美容处置的方法。用于解决课题的手段对于粗糙的角质层，已知角质层透明性低，屏障功能也低，细胞间脂质乱。虽然能够使用这些指标来评价角质层状态，但在这些指标的测定中，各自需要特殊的装置。因此，本专利技术人等为了提供更简便地评价角质层状态的方法而进行了深入研究。其结果是，发现如果用荧光素、玫瑰红将角质层片进行染色，则在粗糙的角质层的情况下染色强度变高(图1和图2)，而且发现使用了荧光素、玫瑰红的染色，即使是一眼看上去健康的皮肤，也灵敏度优异到可以识别其状态的程度(图3)，能够评价角质层片的角质层状态。进一步，提供了通过使用该角质层状态的评价法，来评价关于角质层改善效果的候选化妆品或美容处置的方法。更具体而言，本专利技术涉及以下的专利技术：[1]一种角质层状态的评价方法，其包括下述工序：使选自荧光素、玫瑰红和它们的盐中的染料的水溶液与角质层片接触的工序，洗涤上述染料的工序，测定角质层片中的上述染料的染色强度的工序。[2]根据项目[1]所述的评价方法，上述角质层状态的评价是对角质层透明度、角质层细胞间脂质的结构和角质层的水分含量进行评价。[3]根据项目[1]或[2]所述的评价方法，上述评价基于与标本的染色强度的比较、或与比色表的比较来进行。[4]根据权利要求1～3的任一项所述的方法，上述角质层片为通过带剥离调制的角质层片。[5]一种关于角质层改善效果的候选化妆品的评价方法，其包括下述工序：对角质层片应用候选化妆品的工序，使角质层片干燥的工序，使选自荧光素、玫瑰红和它们的盐中的染料的水溶液与角质层片接触的工序，洗涤上述染料的工序，以及测定角质层片中的上述染料的染色强度的工序。[6]根据项目[5]所述的方法，上述角质层片为培养角质层片。[7]一种关于角质层改善效果的美容处置的评价方法，其包括下述工序：使选自荧光素、玫瑰红和它们的盐中的染料的水溶液与对皮肤进行美容处置后取得的调制角质层片接触的工序，洗涤上述染料的工序，以及测定上述调制角质层片中的上述染料的染色强度或荧光强度的工序。[8]根据项目[7]所述的评价方法，上述评价基于：用染料对美容处置前的通过带剥离取得的角质层片进行染色，将美容处置前后的角质层片的荧光强度进行比较。[9]根据项目[8]所述的方法，上述美容处置为化妆品的涂抹、蒸汽的应用或按摩。专利技术的效果通过本专利技术，能够使用选自荧光素、玫瑰红和它们的盐中的染料来评价角质层片中的角质层状态。由于能够进行角质层状态的评价，因而通过评价候选化妆品或美容处置的应用前后的角质层状态，能够确认角质层改善效果。附图说明图1为显示对将被水湿润了的培养角质层片慢慢干燥而得的健康角质层模型、与冷冻干燥而得的肌肤粗糙角质层模型进行荧光素染色并拍摄到的图像。图2为显示对从进行10％SDS处理而诱导了肌肤粗糙的皮肤通过带剥离取得的肌肤粗糙角质层片、与从不进行SDS处理的部位的皮肤取得的健康角质层片进行荧光素的结果。显示皮肤的状态(图2A)、和表示荧光素染色时的荧光亮度的图(图2B)。图3显示表示对从上臂内侧的皮肤通过带剥离取得的角质层片、与从面颊的皮肤取得的角质层片荧光素染色后的荧光亮度的图。图4显示在体内使皮肤湿润，接着在低湿度(10％)或高湿度(90％)进行干燥后，对通过带剥离取得的角质层片进行荧光素染色并拍摄到的图像(图4A)，以及显示表示在该图像中选择12视场而计测的荧光亮度的图(图4B)。图5显示表示在将从皮肤通过带剥离取得的角质层用水浸润，在湿度90％慢慢干燥了的情况，以及使用硅胶快速干燥了的情况下，用各种染料进行染色而得的染色强度的图。作为染料，使用了(A)荧光素、(B)玫瑰红、(C)藏红、(D)刚果红。图6显示表示使角质层片浸渍于水、3％赤藓醇(ER)和3％POE(14)POP(7)二甲基醚后，在装有硅胶的密闭容器中，在湿度0％进行了干燥的情况下的由荧光素染色得到的荧光亮度的图。作为对照，也显示使水在湿度90％进行了干燥的情况下的结果。图7显示表示使角质层片浸渍于0％、0.1％、1％、3％、10％的POE(14)POP(7)二甲基醚中，然后在装有硅胶的密闭容器中，在湿度0％进行了干燥的情况下的由荧光素染色得到的荧光亮度的图。作为对照，将角质层片用水浸润后，在湿度90％进行了干燥的情况设为100来表示。具体实施方式本专利技术涉及一种角质层状态的评价方法，其包括下述工序：使选自荧光素、玫瑰红和它们的盐中的染料水溶液与角质层片接触的工序，洗涤染料的工序，测定角质层片中的染料的染色强度的工序。角质层状态可以通过选自角质层透明度、角质层细胞间脂质的结构化的程度和角质层水分量中的至少一种或它们的任意组合来表现。本专利技术基于发现：在用选自荧光素、玫瑰红和它们的盐中的染料将角质层片进行了染色的情况下，染色强度成为角质层状态，即选自角质层透明度、角质层细胞间脂质的结构化的程度和角质层水分量中的至少一种或它们的任意组合的指标。因此，角质层状态可以根据角质层片的染色强度进行评价，染色越强则角质层状态越差，评价为粗糙状态，判定为发生角质层透明度降低、角质层细胞间脂质的结构乱、以及角质层水分量减少。角质层状态的评价可以通过与比色表、染色强度的基准值的比较，或与成为对照的标准品的染色强度的比较来进行。成为对照的标准品例如可以为对健康的角质层片涂抹SDS等肌本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种角质层状态的评价方法，其包括下述工序：使选自荧光素、玫瑰红和它们的盐中的染料的水溶液与角质层片接触的工序，洗涤所述染料的工序，测定角质层片中的所述染料的染色强度的工序。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.01.21 JP 2013-0085901.一种以染色强度作为指标的角质层状态的评价方法，其包括下述工序：使选自荧光素、玫瑰红和它们的盐中的染料的水溶液与角质层片接触的工序，洗涤所述染料的工序，测定角质层片中的所述染料的染色强度的工序。2.根据权利要求1所述的评价方法，所述角质层状态的评价是对角质层透明度、角质层细胞间脂质的结构和角质层的水分含量进行综合性评价。3.根据权利要求1或2所述的评价方法，所述评价基于与标本的染色强度的比较、或与比色表的比较来进行。4.根据权利要求1或2所述的方法，所述角质层片为通过带剥离调制的角质层片。5.一种以染色强度作为指标的关于角质层改善效果的美容处置的评价方法，其包括下述工序：使选自荧光素...

【专利技术属性】
技术研发人员：八木荣一郎，岩井一郎，
申请(专利权)人：株式会社资生堂，
类型：发明
国别省市：日本;JP