本发明专利技术公开了一种高效降解仲丁灵的蜡状芽孢杆菌LY05及其应用及使用方法，所述菌株已于2015年6月19日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏号是CCTCC NO：M 2015397。所述菌株可在短时间内有效降解仲丁灵农药残留。以所述菌株制备得到的菌剂，具有生产成本低，使用方便，去除效果好等优点。使用本菌剂可有效修复嘧菌酯仲丁灵污染的水体和土壤，解决农业生产中农药残留超标问题及环境污染问题，保护生态环境和人类健康。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及微生物
，尤其是一种高效降解仲下灵的蜡状芽抱杆菌LY05 及其应用及使用方法。
技术介绍
仲下灵（Butralin)化学名称为N-仲下基-4-特下基-2,6-二硝基苯胺，又名止 芽素，基本理化性质如式1所示。仲下灵属于二硝基苯胺类除草剂，可被杂草根系或芽銷吸 收，药剂进入植物体后，主要抑制分生组织的细胞分裂，从而抑制杂草幼芽及幼根生长，可 用于棉花、大豆、魏豆、油菜、花生、上豆、冬小麦、大麦、藍麻、向日葵、甘薦、蔬菜、果树等，主 要用于防除单子叶杂草和一年生阔叶杂草，也可防除小粒种子的双子叶杂草。亦可作植物 生长调节剂使用，控制烟草蔽芽生长。 随着仲下灵使用的日益广泛和使用时间的延长，加之耐光、热的特点，其在±壤中 的持效期较长，使用不当会对后巷作物产生药害，如果残留超过最大限量，则会对人畜产生 不良影响或通过食物链对生态系统中的生物造成毒害。因此，消除环境中仲下灵的残留污 染引起科研工作者的高度重视，已成为一个重要的研究课题。 生物修复度ioremediation)技术因其操作简便、经济实用、环境友好等优点，已 成为处理环境中有机污染物的有效措施。国际上已有利用生物修复技术成功治理石油污染 的先例。近年来，研究利用生物修复技术治理农药残留污染已成为研究热点。目前许多发达 国家和大公司都投入巨资W从事农药残留生物降解制剂的研究和开发，如美国BCI公司、 美国工程服务生物修复公司已经将降解制剂产品规模化生产，国内的北京佳农新贸易发展 有限公司已成功生产"比亚"生物降解制剂可用于去除有机憐类农药残留。但是，由于农药 结构多样性，而微生物降解农药往往具有很强的针对性，导致现有降解菌资源库远不能满 足农药残留污染生物修复的实际需求。目前还没有专口针对仲下灵的降解微生物及其相关 降解制剂产品。因此，有针对性地筛选高效降解菌株，研制微生物修复剂，通过人工接种加 速±壤中除草剂的降解，消除残留药害是一项十分必要的工作和切实可行的途径。
技术实现思路
本专利技术的目的是：提供一种高效降解仲下灵的蜡状芽抱杆菌LY05。 本专利技术的另一目的是提供该菌株在降解仲下灵农药残留中的应用。 本专利技术的另一目的是提供所述菌株在制备降解仲下灵制剂中的应用。 本专利技术的另一目的是提供一种降解仲下灵的制剂。 本专利技术是运样实现的：高效降解仲下灵的蜡状芽抱杆菌LY05,其保藏号为CCTCC NO:M2015397。 该菌株16SrDNA序列如沈QIDNO. 1所示。 高效降解仲下灵的蜡状芽抱杆菌LY05的菌株在降解仲下灵农药残留中的应用。 采用高效降解仲下灵的蜡状芽抱杆菌LY05的菌株生产降解仲下灵制剂的方法， 包括如下步骤： 1) 将蜡状芽抱杆菌LY05的菌株于无机盐培养基中，30~35°C，150~200巧m下振荡 培养至对数生长期，获得菌种. 2) 将上述菌种按无机盐培养基的体积比的10%的接种量接种入种子瓶，30~35°C， 150~200rpm下振荡培养至对数生长期，获得种子液； 3) 将获得的种子液按照10%的体积比的接种量接种入发酵培养基中，在30~35°C、 150~200rpm下发酵培养45-5化，获得发酵液，发酵液的菌数大于3.OX10?C化/mU将发 酵液直接稀释5-20倍作为液体菌剂。 在种子发酵罐和生产发酵罐的培养过程中，无菌空气的通气量为0. 40~0. 60mV min,揽拌速度为150~200r/min，溫度30~35°C，种子罐的培养时间及生产发酵罐的培 养时间均为45-5化，发酵结束后菌体数量大于3. 0X1〇9C化/mL。 步骤2)中所述的发酵培养基与步骤3)中所述的发酵培养基相同，其组成按质量 百分比比计算，包括酵母膏0. 5%，蛋白腺1%，葡萄糖0. 5%，化C1 1%，其余为水，pH7。[001引步骤1)及步骤2)中所述的无机盐培养基，皿2?040. 4g，K2HPO40. 4g，NH4CI1g，MgCl20. 1g，Na2S041.425g，FeS04.7H20 0.025g，微量元素液 10 血，加蒸馈水定容至 1100血，pH7. 0,高压蒸汽灭菌（12rC，20min);其中微量元素液组成如下：ZnS04.7H20 1. 1g，M拆O4?H2O0. 58g，（NH4)sM07024? 4&0 0. 18g，C0SO4? 7&0 0. 024g，C11SO4? 5&0 0. 077g，H3BO30. 029g，NaN03? 4&0 0. 074g，蒸馈水 1L。 一株降解仲下灵的蜡状芽抱杆菌cereus)LY05,所述菌种保存在 中国典型培养物保藏中屯、（CCTCC)，地址为中国武汉，武汉大学，保藏号为CCTCCN0:M 2015397,保藏日期为2015年6月19日。 所述菌株经形态学特征、生理生化特性、16SrDNA序列分析鉴定为蜡状芽抱杆菌 (《acinuscereus)，该菌株在在牛肉膏蛋白腺固体平板上生长很快，呈圆形或近似圆形、 质地软、稍有光泽的白色菌落，生长较快。菌体细胞杆状，成短或长链，芽抱中生，无芙膜。电 子显微镜下观察杆状细胞长直径〉1 y m。通过生理生化特性测定，显示该菌株革兰氏阳性， 接触酶阳性，氧化酶阴性，VP试验阳性，甲基红试验阳性。该菌可利用葡萄糖、巧樣酸盐；不 利用木糖、k阿拉伯糖、甘露醇。 本专利技术筛选获得一株蜡状芽抱杆菌化？cereus)LY05,该菌株可在短时间 内有效降解仲下灵农药残留，保护生态环境和人类健康，且使用方便，成本低，去除率达到 80%W上，可用于修复仲下灵污染的水体、±壤等自然环境，解决农业生产中农药残留超标 问题及环境污染问题，保护生态环境和人类健康。使用蜡状蜡状芽抱杆菌LY05生产制备得 到的液体菌剂，具有生产成本低，使用方便，去除效果好等优点，适合治理水体和±壤等环 境中仲下灵造成的污染，具有非常重要的理论和应用价值。【附图说明】 附图1为仲下灵标准品色谱图； 附图2为降解菌剂对无机盐培养基中仲下灵（50mg/L)的降解率； 附图3为降解菌剂对±壤中仲下灵（50mg/L)的降解率。【具体实施方式】 本专利技术的实施例1 :仲下灵降解菌LY05的分离与鉴定 1)仲下灵降解菌LY05的分离与筛选 称取长期受仲下灵污染上壤10g于250mLS角锥形瓶中，加入100mL无机盐培养 基，添加仲下灵至浓度为100mg/l，=角锥形瓶置于摇床（30°C，200巧m的上培养7d，取5 mL培养液接种至新鲜基础培养基(仲下灵100mg/L)中，然后在30°C摇瓶培养7d，依次类 推，按仲下灵100mg/L的浓度梯度增长，使最终富集培养液仲下灵的浓度达到1000mg/l， 得到富集降解菌株。 降解菌富集分离过程中，每2次转接后，将菌悬液制备成102~106系列稀释液， 用涂布法分别在固体分离纯化培养基上进行分离，28°C培养两天，根据其不同的外观形态 和特征挑取单菌落，反复划线纯化，并根据菌落外观形态特征和显微形态观察的菌体形态 特征合并相同的菌株，并将所得的菌株接种于固体分离纯化培养基斜面，保存、备用。 经过大量的富集培养，分离到能够在含仲下灵1000mg/L的分离培养基上生长的 菌株2本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种高效降解仲丁灵的蜡状芽孢杆菌LY05，其特征在于：其保藏号为CCTCC NO：M 2015397。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：吴小毛，龙友华，尹显慧，李明，李荣玉，张承，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：贵州;52
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