针对IL-6的抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及对IL-6具有结合特异性的抗体及其片段。本发明专利技术的另一实施方式涉及本文所述的抗体，及其结合片段，包括本文所述的VH，VL和CDR多肽的序列，以及编码其的多核苷酸。本发明专利技术还涉及与一种或多种功能性或可检测部分缀合的抗-IL-6抗体及其结合片段的缀合物。本发明专利技术还涉及制备所述抗-IL-6抗体及其结合片段的方法。本发明专利技术的实施方式还涉及抗-IL-6抗体及其结合片段用于诊断、评估和治疗与IL-6相关的疾病和障碍的用途。这些抗体可以结合可溶的IL-6、表达IL-6的细胞表面、IL-6/IL-6R的至少一种，或预防IL-6和IL-6R的结合、IL-6/IL-6R和gpl30的结合，和/或IL-6/IL-6R/gpl30多聚体的形成，以及由此抑制与上述任何有关的生物学效应。

【技术实现步骤摘要】
针对IL-6的抗体及其用途本申请是申请日为2008年5月21日、申请号为200880025053.1、专利技术名称为“针对IL-6的抗体及其用途”的专利技术专利申请的分案申请。本申请要求2007年5月21日提交的美国临时专利申请no.60/924,550的优先权，其内容在此通过参考将其全文引入。
本专利技术涉及对IL-6具有结合特异性的抗体及其片段。本专利技术还涉及筛选与IL-6相关的疾病和障碍的方法，和通过给药所述抗体或其片段预防或治疗与IL-6相关的疾病或障碍的方法。
技术介绍
白介素-6(下文称为"IL-6")(还称为干扰素-β2；B-细胞分化因子；B-细胞刺激因子-2；肝细胞刺激因子；杂交瘤生长因子；和浆细胞瘤生长因子)为多功能细胞因子，其涉及许多生物过程例如急性炎性反应的调控，特异性免疫应答的调节，包括B-和T-细胞分化、骨代谢、血小板生成、表皮增殖、月经、神经细胞分化、神经保护、老化、癌症和在阿尔茨海默病中出现的炎性反应。参见A.Papassotiropoulos，等，NeurobiologyofAging，22:863-871(2001)。IL-6为通过受体复合物促进细胞应答的细胞因子的家族成员，所述受体复合物由信号-转导糖蛋白gpl30的至少一个亚单位和IL-6受体("IL-6R")(还称为gp80)构成。IL-6R还可以可溶形式("sIL-6R")存在。IL-6与IL-6R结合，其然后使信号-转导受体gpl30二聚化。参见Jones，SA，J.Immunology，175:3463-3468(2005)。在人类中，编码IL-6的基因以5个外显子和4个内含子组织，并且映入7p21处的染色体7的短臂。IL-6RNA的翻译和翻译后加工导致其成熟形式的具有184个氨基酸的21至28kDa蛋白质的形成。参见A.Papassotiropoulos，等，NeurobiologyofAging，22:863-871(2001)。如下更详细地陈述，认为IL-6在许多疾病和障碍的发育中起作用，所述疾病和障碍包括但不限于疲劳、恶病质、自体免疫疾病、骨骼系统的疾病、癌症、心脏病、肥胖症、糖尿病、哮喘、阿尔茨海默病和多发性硬化。由于IL-6在各种疾病和障碍中的感知的参与，在本领域仍然存在对于以下的需要：用于预防或治疗与IL-6相关的疾病的组合物和方法、以及用于筛选以鉴定患有与IL-6相关的疾病或障碍的患者的方法。特别优选的抗-IL-6组合物为当给药给患者时具有最小或极小副反应的那些。降低或抑制与IL-6相关的疾病或障碍的组合物或方法对于需要其的患者而言是有益的。
技术实现思路
本专利技术涉及对IL-6具有结合特异性的特异性抗体及其片段，特别是具有特定的表位特异性和/或功能性质的抗体。本专利技术的一个实施方式包括能够与IL-6和/或IL-6/IL-6R复合物结合的特异性人源化抗体及其片段。这些抗体可以结合可溶的IL-6或细胞表面表达的IL-6。同样地，这些抗体还抑制一种或多种IL-6，IL-6/IL-6R复合物，IL-6/IL-6R/gpl30复合物和/或IL-6/IL-6R/gpl30的多聚体的形成或生物学效应。本专利技术的另一实施方式涉及本文所述的抗体，其包括本文所述的VH，VL和CDR多肽的序列，以及编码其的多核苷酸。在本专利技术更特别的实施方式中，这些抗体将阻断gpl30激活和/或拥有小于50皮摩尔的结合亲和性(Kds)和/或小于或等于10-4S-1的Koff值。在本专利技术的另一实施方式中这些抗体及其人源化版本将衍生自兔免疫细胞(B淋巴细胞)，并且可以基于它们与人类种系序列的同源性(序列同一性)选择。这些抗体可能需要最少或没有序列修饰，从而便于人源化后功能性质的保持。在本专利技术的另一实施方式中该抗体可以基于它们在功能检验例如IL-6驱动的T1165增殖检验、IL-6刺激的HepG2触珠蛋白产生检验等中的活性来选择。本专利技术的进一步实施方式涉及来自抗-IL-6抗体的片段，包括例如衍生自兔免疫细胞的VH，VL和CDR多肽和编码其的多核苷酸，以及这些抗体片段和编码其的多核苷酸在形成新的抗体和多肽组合物上的用途，所述新的抗体和多肽组合物能够识别IL-6和/或IL-6/IL-6R复合物或IL-6/IL-6R/gpl30复合物和/或其多聚体。本专利技术还涉及与一种或多种功能性或可检测部分缀合的抗-IL-6抗体及其结合片段的缀合物。本专利技术还涉及制备所述人源化抗-IL-6或抗-IL-6/IL-6R复合物抗体及其结合片段的方法。在一个实施方式中，结合片段包括但不限于，Fab、Fab'、F(ab')2、Fv和scFv片段。本专利技术的实施方式涉及抗-IL-6抗体用于诊断、评估和治疗与IL-6或其异常表达相关的疾病和障碍的用途。本专利技术还涉及抗-IL-6抗体的片段用于诊断、评估和治疗与IL-6或其异常表达相关的疾病和障碍的用途。该抗体的优选用途为治疗和预防与疲劳和/或恶病质和类风湿性关节炎相关的癌症。本专利技术的其它方式涉及抗-IL-6抗体在重组宿主细胞，优选二倍体酵母例如二倍体毕赤酵母(Pichia)和其它酵母菌株中的生产。附图说明图1显示各种独特表位被通过抗体选择策略制备的抗-IL-6抗体的收集物(collection)识别。表位可变性(Epitopevariability)通过抗体-IL-6结合竞争研究确认(ForteBioOctet)。图2显示兔抗体可变轻和可变重序列和同源人序列以及最终的人源化序列之间的可变轻和可变重序列的比对。框架区鉴定为FR1-FR4。互补决定区鉴定为CDR1-CDR3。氨基酸残基如所示编号。起始兔序列分别被称为针对可变轻和可变重序列的RbtVL和RbtVH。从框架1穿过框架3的末端跨越的，最类似的人类种系抗体序列中的3个，在兔序列之下比对。首先显示认为与兔序列最类似的人序列。在该实例中，这些最类似的序列为针对轻链的L12A和针对重链的3-64-04。人CDR3序列未示出。最接近的人框架4序列在兔框架4序列之下比对。垂直虚线表示其中兔残基与一个或多个在同一位置的人残基相同的残基。粗体的残基表示在该位置的人残基与在同一位置的兔残基相同。最终的人源化序列分别被称为针对可变轻序列和可变重序列的VLh和VHh。下划线的残基表示在这三个比对的人序列中该残基与在该位置的兔残基相同，但与在该位置的人残基不同。图3证明产生的IgG和用于示例性IL-6策略的抗原特异性之间的高相关性。11孔中的9个显示与抗原识别的特异IgG相关性。图4提供在皮下给药(s.c.)100μg/kg的人IL-6后1小时α-2-巨球蛋白(A2M)对于以不同剂量静脉内给药的抗体Ab1的剂量应答曲线。图5提供抗体Ab1进展组vs对照组的存活数据。图6提供抗体Ab1消退组(regressiongroup)vs对照组的另一存活数据。图7提供每三天10mg/kg静脉内给药(i.v.)的多克隆人IgG(270-320mg肿瘤大小)vs每三天10mg/kg静脉内给药的抗体Ab1(270-320mg肿瘤大小)的存活数据。图8提供每三天10mg/kg静脉内给药的多克隆人IgG(400-527mg肿瘤大小)vs每三天10mg/kg静脉内给药的抗体Ab1(400-527mg肿瘤大小)的存活数据。图9提本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗‑人IL‑6抗体或抗体片段，其和与选自以下的抗‑人IL‑6抗体相同的线性或构象表位特异性地结合，和/或和在完整人IL‑6多肽或其片段上的与选自以下的抗‑人IL‑6抗体相同的线性或构象表位竞争结合：Ab1,Ab2,Ab3,Ab4,Ab5,Ab6,Ab7,Ab8,Ab9,Ab10,Ab11,Ab12,Ab13,Ab14,Ab15,Ab16,Ab17,Ab18,Ab19,Ab20,Ab21,Ab22,Ab23,Ab24,Ab25,Ab26,Ab27,Ab28,Ab29,Ab30,Ab31,Ab32,Ab33,Ab34,Ab35,和Ab36。

【技术特征摘要】
2007.05.21 US 60/924,5501.抗-人IL-6抗体或其对IL-6具有结合特异性的抗体片段，其包含SEQIDNO:20的可变轻链区和SEQIDNO:19的可变重链区，并且还包含SEQIDNO:586的恒定轻链区和SEQIDNO:588的恒定重链区。2.根据权利要求1所述的抗-人IL-6抗体，其直接或间接与可检测标记或治疗剂连接。3.一种或多种核酸序列，其导致根据权利要求1所述的抗-人IL-6抗体的表达。4.根据权利要求3所述的一种或多种核酸序列，其由酵母或人类优选密码子组成。5.载体，包括根据权利要求3或4所述的一种或多种核酸序列。6.根据权利要求5所述的载体，其为质粒或重组病毒载体。7.重组细胞，其表达根据权利要求1所述的抗体。8.根据权利要求7所述的细胞，其选自哺乳动物、酵母、细菌和昆虫细胞。9.根据权利要求8所述的细胞，其为酵母细胞。10.根据权利要求8所述的细胞，其为二倍体酵母细胞。11.根据权利要求9或10所述的细胞，其为毕赤酵母细胞。12.根据权利要求1或2所述的抗体或其对IL-6具有结合特异性的抗体片段在制备用于治疗与IL-6表达细胞相关的疾病或状况的抗体组合物中的用途，其中所述组合物含有治疗有效量的至少一种根据权利要求1～8中任一项所述的抗-人IL-6抗体或其对IL-6具有结合特异性的抗体片段。13.根据权利要求12所述的用途，其中所述与IL-6表达细胞相关的疾病或状况选自：四肢无力、运动性疲劳、癌症相关性疲劳、炎症疾病相关性疲劳、慢性疲劳综合症、癌症相关性恶病质、心脏相关性恶病质、呼吸性相关性恶病质、肾相关性恶病质、年龄相关性恶病质、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、系统性幼年特发性关节炎、牛皮癣、牛皮癣性关节病、强直性脊柱炎、炎性肠病、风湿性多肌痛、巨细胞性动脉炎、自体免疫性血管炎、移植物抗宿主病、舍格伦综合症、成人型史笛儿氏症、骨关节炎、骨质疏松症、骨骼柏杰氏疾病、多发性骨髓瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、前列腺癌、白血病、肾细胞癌、多中心性巨大淋巴结增生症、卵巢癌、癌症化疗中的药物抗性、癌症化疗毒性、缺血性心脏病、动脉粥样硬化、哮喘、多发性硬化、阿尔茨海默病、脑血管疾病、发烧、急性期反应、过敏、贫血、抑郁症、血栓形成、血小板增多症、急性心力衰竭、代谢综合症、流产、慢性前列腺炎、肾小球肾炎、盆腔炎性疾病、再灌注损伤、移植排斥、禽流感、天花、大流行性感冒、成人呼吸窘迫综合症、严重急性呼吸道综合症、败血症和全身炎症反应综合症。14.根据权利要求12所述的用途，其中所述与IL-6表达细胞相关的疾病或状况选自：炎症性贫血、慢性病贫血、慢性疾病相关抑郁症、肥胖症、糖尿病和高血压。15.根据权利要求12所述的用途，其中所述与IL-6表达细胞相关的疾病是癌症、自体免疫疾病或炎症性疾病。16.根据权利要求1或2所述的抗-人IL-6抗体在制备用于治疗与IL-6表达细胞相关的疾病或状况的治疗方案中的抗体组合物中的用途，其中所述治疗方案进一步包括化疗、放疗、细胞因子给药或基因治疗，其中所述抗体组合物含有治疗有效量的所述抗-人IL-6抗体。17.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：L·加西亚马丁内兹，A·E·C·詹森，K·奥尔森，B·达泽尔，E·奥加拉，J·莱瑟姆，B·科瓦瑟维奇，J·T·L·史密斯，
申请(专利权)人：奥尔德生物控股有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国;US