一种庆大霉素残留检测试纸条及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种庆大霉素残留检测试纸条及其应用。试纸条包括试纸和微孔试剂，所述微孔试剂中冻干有胶体金标记的庆大霉素单克隆抗体；所述试纸由样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜、底板依次连接组成，所述反应膜上包括检测区和质控区，检测区包被有庆大霉素半抗原-载体蛋白偶联物，质控区包被有抗抗体。用本发明专利技术试纸条检测庆大霉素的方法简单、快速、直观、准确、成本低、易推广使用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种庆大霉素残留检测试纸条及其应用，具体涉及一种用于检测牛奶中庆大霉素残留的试纸条。
技术介绍
庆大霉素(Gentamicin，GM)属于氨基糖甙类抗生素，主要作用于革兰氏阴性细菌，由于其具有广谱抑菌和杀菌作用，被广泛应用于兽医临床和动物饲料添加剂。但GM的血清有效浓度与毒性浓度很相近，安全范围较小，在其应用过程中易产生毒副作用，尤其大剂量不规范使用，易导致动物性食品中GM残留超标.对人体健康构成危害，造成肾毒性和耳毒性。许多国家在动物生产中严禁使用GM或规定有严格的最高残留限量(MRL)，我国农业部235号公告规定，动物性食品中GM的MRL为100ng/g。目前庆大霉素残留检测方法主要有气相色谱法、高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法、高效毛细管电泳法和免疫学检测法。仪器法检测价格昂贵，不适合在基层推广使用和大量筛选。免疫学测定方法灵敏度较高，特异性强，使用方便。因此，大规模筛选检测以免疫学检测方法更实际、更具有应用前景。胶体金免疫层析法检测时间短，稳定性好、操作简便、无需其他仪器设备，结果判断直观可靠，适用于进行现场快速筛选。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种庆大霉素残留检测试纸条及其应用。本专利技术所提供的庆大霉素残留检测试纸条包括试纸和微孔试剂，试纸包括反应膜、样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板；反应膜上包括检测区和质控区，检测区包被有庆大霉素半抗原-载体蛋白偶联物，质控区包被有羊抗鼠抗抗体。所述微孔试剂中冻干有庆大霉素单克隆抗体-胶体金标记物，微孔试剂具有微孔塞。所述庆大霉素半抗原-载体蛋白偶联物是由庆大霉素半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白可为卵清蛋白、牛血清白蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白、血蓝蛋白。所述庆大霉素单克隆抗体-胶体金标记物中的庆大霉素单克隆抗体是以庆大霉素半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得的庆大霉素单克隆抗体。所述保护膜粘贴在样品吸收垫上，为检测端，上面有MAX标记线。所述检测区位于近于有MAX标记的保护膜的一端，所述质控区位于远离有MAX标记的保护膜的一端，均呈与所述试纸的长相垂直的条带状。所述底板为PVC底板；所述样品吸收垫为吸滤纸；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜为硝酸纤维素膜；所述保护膜为PE材质保护膜。本专利技术的另一个目的是提供一种制备上述庆大霉素残留检测试纸条的方法，其包括步骤：1)制备冻干有庆大霉素单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂；2)制备具有包被庆大霉素半抗原-载体蛋白偶联物的检测区和包被羊抗鼠抗抗体的质控区的反应膜；3)将2)制备好的反应膜与样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板组装成试纸；4)将1)和3)制备好的冻干有庆大霉素单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂和试纸组装成试纸条。具体地说，步骤包括：1)将庆大霉素与对溴甲基苯甲酸反应，制备庆大霉素半抗原；2)将庆大霉素半抗原与载体蛋白偶联，制备庆大霉素半抗原-载体蛋白偶联物；3)用庆大霉素半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到分泌庆大霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株；4)提取小鼠IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗体；5)用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；6)将制备的庆大霉素单克隆抗体加入到制备的胶体金中，得到庆大霉素单克隆抗体-胶体金标记物；7)将庆大霉素单克隆抗体-胶体金标记物冻干在微孔试剂中后，将微孔试剂加上微孔塞；8)将样品吸收垫用含牛血清白蛋白(牛血清白蛋白在缓冲液中的终浓度为0.5％体积百分含量)、pH为7.2、0.1mol/L磷酸盐缓冲液浸泡2h，37℃下烘干2h；9)在底板上按顺序粘贴上样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜；10)将制备好的微孔试剂、试纸组装成试纸条，2～8℃条件下保存12个月。本专利技术的另一个目的是提供一种应用上述庆大霉素残留检测试纸条检测样品中庆大霉素残留的方法，它包括步骤：(1)用试纸条进行检测；(2)分析检测结果。本专利技术中用试纸条检测样品时，将待检样品溶液滴加于微孔试剂中，混匀后室温孵育5min，将标有MAX标记线端向下，插入孵育后的微孔试剂，待检样品液与微孔中的金标抗体结合后一起向反应膜扩散；若待检样品液中庆大霉素的含量高，则扩散过程中待检样品液中的庆大霉素可与金标抗体相结合，进而完全封闭金标抗体上庆大霉素的抗原结合点，阻止金标抗体与反应膜上庆大霉素半抗原-载体蛋白偶联物结合，检测区不显色，而抗抗体则可与金标抗体结合，质控区显色；若待检样品液中庆大霉素的含量低或无，则金标抗体上的抗原结合位点不能被封闭，进而金标抗体会与反应膜上庆大霉素半抗原-载体蛋白偶联物结合，检测区显色，同时抗抗体也可与金标抗体结合，质控区显色。如果质控区不显色，则试纸失效。如图4a、4b、4c、4d所示。阳性：当质控区(C)显示出条带，而检测区(T)不显色，判为阳性，用“+”表示。阴性：当质控区(C)和检测区(T)均显示出条带，判为阴性，用“－”表示。无效：当质控区(C)不显示条带，试纸失效。本专利技术采用将高特异性的庆大霉素单克隆抗体-胶体金标记物冻干在微孔试剂中，能够使金标抗体与待检样品液充分接触，充分反应，从而减少误差，增加整个体系的反应灵敏度。本专利技术的试纸条具有灵敏度高、成本低、操作简单、检测时间短、储存简单、保质期长的优点。用本专利技术的试纸条检测庆大霉素，方法简单、快速、直观、准确、成本低、易推广使用。附图说明图1为试纸剖面结构示意图。图2为试纸俯视图。图3为微孔试剂图。图4a、4b、4c、4d为试纸检测结果判定图。图5为庆大霉素半抗原合成路线图。图6为庆大霉素半抗原核磁共振氢谱图。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。实施例1庆大霉素残留检测试纸条的构成一、试纸(图1)所述试纸是由底板、样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜组成；所述样品吸收垫1、反应膜2、吸水垫3和保护膜7依次按顺序粘贴在底板6上，样品吸收垫的末端与反应膜相连，反应膜的末端与吸水垫相连，样品吸收垫的始端与底板的始端对齐，吸水垫的末端与底板的末端对齐；所述试纸的样品吸收垫端粘贴有保护膜，保护膜7覆盖在样品吸收垫上的检测端，在检测端保护膜上印有MAX字样(图2)；所述反应膜上有检测区4和质控区5，均呈与所述试纸的长相垂直的条带状，检测区位于近于有MAX标记的保护膜的一端，质控区位于远离有MAX标记的保护膜的一端。检测区包被有庆大本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种庆大霉素残留检测试纸条，其特征在于包括试纸和微孔试剂，所述试纸包括反应膜、样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板，所述反应膜上有检测区和质控区，检测区包被有庆大霉素半抗原‑载体蛋白偶联物，质控区包被有羊抗鼠抗抗体，所述微孔试剂中冻干有庆大霉素单克隆抗体‑胶体金标记物。

【技术特征摘要】
1.一种庆大霉素残留检测试纸条，其特征在于包括试纸和微孔试剂，所述试纸包括反应
膜、样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板，所述反应膜上有检测区和质控区，检测区包被有
庆大霉素半抗原-载体蛋白偶联物，质控区包被有羊抗鼠抗抗体，所述微孔试剂中冻干有庆大
霉素单克隆抗体-胶体金标记物。
2.根据权利要求1所述的庆大霉素残留检测试纸条，其特征在于所述试纸由样品吸收垫、
反应膜、吸水垫、保护膜依次粘贴在底板上组成，所述微孔试剂上具有微孔塞。
3.根据权利要求2所述的庆大霉素残留检测试纸条，其特征在于所述保护膜粘贴在样品
吸收垫上，为检测端，上面有MAX标记线。
4.根据权利要求1所述的庆大霉素残留检测试纸条，其特征在于所述检测区位于近于有
MAX标记的保护膜的一端，所述质控区位于远离有MAX标记的保护膜的一端。
5.根据权利要求1所述的庆大霉素残留检测试纸条，其特征在于所述庆大霉素半抗原-载
体蛋白偶联物由庆大霉素半抗原与载体蛋白偶...

【专利技术属性】
技术研发人员：万宇平，赵正苗，刘叶，冯静，聂雯莹，何方洋，孙倩倩，
申请(专利权)人：北京勤邦生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11