用于治疗心力衰竭的合成线性APELIN模拟物制造技术

本发明专利技术涉及新的组合物，其包含修饰的apelin-13肽序列，将其设计成可治疗它们所施用的受试者的心血管疾病，且其显示出比其野生型复本更大的抵抗降解性和等效或更大的生物活性。本发明专利技术还涉及制备所述组合物的方法和使用所述组合物作为药物活性剂治疗心血管疾病的方法。X1-X2-X3-R-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13                                            I。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗心力衰竭的合成线性APELIN模拟物序列表本申请包含已经电子递交的ASCII码形式的序列表并将其整体引入本文作为参考。所述的ASCII拷贝于2014年2月21日创建并命名为PAT055326-WOSL.txt，其大小为117407比特。专利
：本专利技术涉及新的组合物，其包含修饰的肽和多肽序列，将其设计成可治疗它们所施用的受试者的心血管疾病，且所述修饰的肽和多肽序列显示出比其野生型复本更大的抵抗降解性和等效或更大的生物活性。本专利技术还涉及制备所述组合物的方法和使用所述组合物作为药物活性剂治疗心血管疾病的方法。专利技术背景：在西方世界中心力衰竭的发病率约占65岁以上成年人的1/100。最常见的病理现象是心肌收缩力和由此的心输出量慢性缺陷，心输出量即心室随时间射出的有效血量，具有慢性心力衰竭的患者可以具有急性代偿失调发作，即维持足够血液循环的心脏衰竭，其中心肌收缩力进一步衰减。仅在美国，每年就有～500K因“急性代偿失调性心力衰竭”(ADHF)而住院。ADHF的最新疗法包括利尿药、血管舒张药和正性肌力药，它们直接增加心肌收缩力。目前静脉用正性肌力药(多巴酚丁胺、多巴胺、米力农、左西孟旦)用于急诊环境，不过，它们涉及不良反应，例如心律失常和长期死亡率增加。这些倾向性阻止了它们应用于慢性心力衰竭。地高辛是口服正性肌力药，但受限于窄的治疗指数、增加的致心律失常可能性和在肾功能不全中的禁忌征。增加心肌收缩力、而没有致心律失常性或死亡倾向性的心力衰竭疗法是ADHF迫切需求的，但在慢性心力衰竭中还存在大量未满足的医学需求。Apelin是用于在先的孤独G蛋白偶联受体(GPCR)、APJ也称作apelin受体、血管紧张素(angiotension)-样-1受体、血管紧张素II-样-1受体等的的内源性配体。apelin/APJ途径广泛在心血管系统中表达，且apelin已经在临床前模型中显示主要有益的心血管作用。在人体中紧急apelin施用导致外周和冠状血管扩张，并且增加心输出量(Circulation.2010；121：1818-1827)。作为结果，APJ激动作用作为具有心力衰竭的患者的重要治疗靶标出现。认为活化apelin受体APJ增加心肌收缩力并且提供心脏保护，没有目前疗法的倾向性。然而，天然apelins显示极短的半衰期和体内作用期限。公认极短半衰期是递送这样的治疗内源性肽类的主要困难，这归因于快速血清清除率和通过肽酶作用发生蛋白水解降解。目前用于克服这一缺陷的一种方式在于将大剂量的所关注的治疗肽施用于患者，使得尽管一些治疗肽被降解，但是仍然保留治疗有效性。然而，该方法对于患者有不适感。由于大部分治疗肽类不能口服施用，所以治疗肽必须通过静脉内注射频繁地恒定输注，或通过不便利的皮下注射途径频繁地施用。频繁施用的要求也导致许多潜在的肽治疗剂具有不可接受的高度突出的治疗成本。大量降解的肽的存在也可能产生不期望的副作用。施用中的不适感和高成本是为何具有富有吸引力的生物活性特性的大部分治疗肽无法开发成药物候选物的两个原因。因此，延长肽类半衰期的一种方法在于修饰治疗肽类，按照这样的方式，其降解被减慢，同时仍然维持生物活性。因此，期望鉴定模拟apelin功能、但具有增进的半衰期并且显示与天然存在的apelin等效或高于它的生物活性的肽类和多肽类。此外，期望鉴定apelin类似物肽类和多肽类，其显示增加的构象约束，即实现和维持活性构象状态的能力，使得肽类和多肽类可以与其受体和/或其它途径靶标发生相互作用，无需添加的折叠或复位。另外的方法包括通过使所述肽类与防止其通过肾消除的分子缀合降低清除率。因此，对于具有增加的半衰期的修饰的治疗肽类存在需求，以便提供在体内更长的作用期限，同时维持低毒性，仍然保持修饰肽类的治疗优势。专利技术概述：本专利技术涉及通过修饰所关注的治疗肽或多肽即APJ激动剂克服肽在体内降解的问题。本专利技术的目的在于提供新的肽类和多肽类或其生物缀合物，其用作APJ激动剂并且还具有如下超过野生型apelin和其它公知apelin类似物的改进的至少一个：半衰期增加；施用和/或溶解时对降解的更大免疫性；和增加的构象约束，而均显示与野生型apelin相同或大于它的生物活性。本专利技术的肽类和多肽类或其生物缀合物由此特别地用于治疗或预防心血管疾病，例如心力衰竭、与心力衰竭相关的障碍和病症和对活化APJ受体活性有响应的障碍和病症。在一个实施方案中，本专利技术的肽类和多肽类或其生物缀合物特别地用于治疗或预防与心力衰竭相关的障碍或病症和对活化(或激动)APJ受体活性有响应的障碍。在另一个实施方案，本专利技术的肽类和多肽类或其生物缀合物用于治疗急性代偿失调性心力衰竭(ADHF)、慢性心力衰竭、肺动脉高压、心房颤动、Brugada综合征、室性心动过速、动脉粥样硬化、高血压、再狭窄、缺血性心血管疾病、心肌病、心脏纤维化、心律失常、水分潴留、糖尿病(包括妊娠糖尿病)、肥胖、外周动脉病、脑血管意外、短暂脑缺血发作、创伤性脑损伤、肌萎缩侧索硬化、烧伤(包括晒伤)和先兆子痫。本专利技术涉及如本文所述的肽类和多肽类或其生物缀合物、药物组合物集及其制备方法和用途。本专利技术的肽类和多肽类的实例包括式I-IV的任意一种的肽类和多肽类或其酰胺、酯、盐和生物缀合物以及本文特别地列出的肽类或多肽类及其生物缀合物，包括、但不限于实验例。本专利技术由此提供肽或多肽式(I)：X1-X2-X3-R-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13I其中：X1是所述多肽的N-末端和不存在、为Q、A或pE；X2是R或r；X3是P或4-PhP；X5是L、Cha、D-L、F、Y、Y(Bzl)、3，4-Cl2-F或NaI；X6是D-氨基酸、S或A；X7是D-氨基酸、L、H或Aib；且X6和X7的至少一个是D-氨基酸或Aib；X8是K、k、Q或E；X9是G或D；X10是P或哌可酸；X11是D-Nle、Nle、f或D-Nva；X12不存在、P或D-氨基酸；X13是C-末端和不存在、为F或D-氨基酸；且X11、X12和X13的至少一个是D-氨基酸；其中：Nle是L-正亮氨酸；D-Nle是D-正亮氨酸；Nal是L-(萘基)丙氨酸；D-Nva是D-正缬氨酸；Aib是α-氨基异丁酸；Cha是(S)-β-环己基丙氨酸；D-Tic是D-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-甲酸；pE是L-焦谷氨酸；3，4-Cl2-F是(S)-3，4-二氯苯基丙氨酸；Y是L-酪氨酸；且Y(Bzl)是L-苄基-酪氨酸；或所述多肽的酰胺、酯或盐；或基本上与之等效的多肽。正如本文进一步解释的，公认的3个字母或1个字母缩写用于表示构成本专利技术肽类和多肽类的氨基酸残基。除外“D”位于之间，氨基酸是L-氨基酸。当1个字母是大写字母时，它是指L-氨基酸。当1个字母缩写是小写字母的情况时，它是指D-氨基酸。式I的任意上述举出的氨基酸残基或本文所述的其相关式例如式I-IV可以以保守方式被取代，条件是本专利技术的肽或多肽仍然保持功能活性和结构特性(例如半衰期延长、防止降解、构象约束)。允许的保守氨基酸取代的原理和实例进一步在本文中解释。本专利技术还提供其生物缀合物或多聚体，包含：a.式I-IV的任意一种的肽或多肽；b.半衰期延长部分；其中所述肽或多肽和所本文档来自技高网...

【技术保护点】
具有下式的多肽：X1‑X2‑X3‑R‑X5‑X6‑X7‑X8‑X9‑X10‑X11‑X12‑X13                                           I其中：X1是所述多肽的N‑末端，且不存在或为pE；X2是R或r；X3是P或4‑PhP；X5是L、Cha、D‑L、F、Y、Y(Bzl)、3，4‑C12‑F或NaI；X6是D‑氨基酸、S或A；X7是D‑氨基酸、L、H或Aib；且X6和X7的至少一个是D‑氨基酸或Aib；X8是K、k、Q或E；X9是G或D；X10是P或哌可酸；X11是D‑Nle、Nle、f或D‑Nva；X12不存在、为P或D‑氨基酸；X13是C‑末端且不存在、为F或D‑氨基酸；且X11、X12和X13的至少一个是D‑氨基酸；其中：Nle是L‑正亮氨酸；D‑Nle是D‑正亮氨酸；Nal是L‑萘基)丙氨酸；D‑Nva是D‑正缬氨酸；Aib是α‑氨基异丁酸；Cha是(S)‑β‑环己基丙氨酸；D‑Tic是D‑1，2，3，4‑四氢异喹啉‑3‑甲酸；pE是L‑焦谷氨酸；3，4‑Cl2‑F是(S)‑3，4‑二氯苯基丙氨酸；Y是L‑酪氨酸；且Y(Bzl)是L‑苄基‑酪氨酸；或所述多肽的酰胺、酯或盐；或基本上与之等效的多肽。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.11.20 US 61/728,395;2013.03.14 US 61/781,397;1.多肽，其选自：或所述多肽的酰胺、酯或盐。2.多肽，其选自：pE-R-P-R-L-a-H-K-G-Pip-nle-a-f-OH(SEQIDNO:24)；pE-R-P-R-(D-Leu)-S-Aib-K-G-P-nle-a-f-OH(SEQIDNO:27)；pE-R-P-R-L-S-Aib-k-G-P-nle-a-f-OH(SEQIDNO:28)；pE-R-P-R-L-d-H-K-G-P-nle-a-f-OH(SEQIDNO:31)；pE-R-(trans-4-PhP)-R-L-a-H-K-G-P-nle-a-f-OH(SEQIDNO:32)；pE-R-P-R-L-s-H-K-G-P-nle-a-f-OH(SEQIDNO:35)；pE-R-P-R-L-a-F-K-G-P-nle-a-f-OH(SEQIDNO:40)；pE-R-P-R-L-a-H-K-G-P-nle-a-tic-OH(SEQIDNO:49)；pE-R-P-R-L-a-H-k-G-P-Nle-a-f-OH(SEQIDNO:54)；pE-R-P-R-L-a-H-K-G-P-Nle-P-f-OH(SEQIDNO:57)；pE-R-P-R-L-abu-H-K-G-P-nle-a-f-OH(SEQIDNO:67)；pE-R-P-R-L-nva-H-K-G-P-nle-a-f-OH(SEQIDNO:75)；pE-R-P-R-L-A-h-K-G-P-nle-a-f-OH(SEQIDNO:81)；pE-R-P-R-L-a-H-Q-G-P-nle-a-f-OH(SEQIDNO:82)；和pE-R-P-R-L-a-H-K-D-P-nle-a-f-OH(SEQIDNO:85)；或所述多肽的酰胺、酯或盐；其中Pip是哌可酸；abu是2-氨基丁酸；4-PhP是4-苯基脯氨酸。3.生物缀合物或其...

【专利技术属性】
技术研发人员：F·泽克里，八十岛华杨，P·格罗舍，J·袁，H·赵，
申请(专利权)人：诺华股份有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH