本发明专利技术涉及一种增强LAK细胞杀伤活性和增殖活性的培养方法和用途。所述增强LAK细胞杀伤活性和增殖活性的培养方法为将LAK细胞与DC细胞共培养。DC细胞用于增强LAK细胞杀伤活性和增殖活性的用途。本发明专利技术通过将LAK细胞和DC细胞共培养，促进LAK细胞的增殖，增强了LAK细胞的杀伤活性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及细胞培养领域，尤其设及一种增强LAK细胞杀伤活性和增殖活性的培 养方法和用途。
技术介绍
伴随着老龄化加剧、生态环境遭受破坏、不健康生活方式及食品安全问题凸现，我 国肿瘤发病率多年持续上升，已成为一个必须高度重视的公共卫生问题乃至社会问题，中 国亟须向肿瘤宣战。据世界癌症报告估计，2012年中国癌症发病人数为306. 5万，约占全球 发病的五分之一；癌症死亡人数为220. 5万，约占全球癌症死亡人数的四分之一。当前我国 癌症发病率、死亡率呈持续增长趋势，我国癌症发病率接近世界水平，但死亡率高于世界水 平。更为严峻的是，运种势头并未得到有效的遏制。今后20年，我国癌症的发病数和死亡 数还将持续上升：根据国际癌症研究署预测，如不采取有效措施，我国癌症发病数和死亡数 到2020年将上升至400万人和300万人；2030年将上升至500万人和350万人。 长期W来，肿瘤的治疗一般都采用手术、化疗和放疗=种治疗模式。随着生物科学 的发展，生物治疗成为肿瘤治疗的第四种治疗模式。生物治疗是指利用人体自身的免疫系 统来杀死清除肿瘤细胞的治疗方法。运种方法安全有效，只杀肿瘤细胞，不伤害正常组织， 副作用非常小。生物治疗还能缓解放疗和化疗的副作用，增强患者对其他治疗的敏感性和 耐受性。LAK细胞治疗是一种有效的抗肿瘤生物治疗方法，是将体外激活和扩增的LAK细 胞再过继输入给患者的治疗方法。LAK细胞不需抗原刺激，缺乏祀细胞特异性，因此具有广 谱的抗肿瘤效应，在细胞治疗上具有广泛的应用前景。近年来，国外已将LAK细胞回输与 IL-2联合应用对肿瘤患者进行治疗，特别是晚期肿瘤，取得了较为满意的疗效。LAK细胞 化ymphokine-activated ki 1 ler)即淋己因子激活的杀伤细胞，将外周血淋己细胞在体外 经淋己因子白介素-2 (比-2)激活3~5天扩增制备LAK细胞是LAK细胞培养的最经典方 法，但是运样得到的LAK细胞杀伤活性相对较弱，应用有限。 因此，LAK细胞的培养体系和杀伤效果是目前的研究热点。如公开号为 CN101495620A的中国专利技术专利申请公开了在培养LAK细胞时，向培养基中添加伴刀豆球蛋 白A等植物凝集素和具有白细胞介素-2 (比-2)样活性的增殖因子，来达到增殖活化LAK细 胞。该培养体系培养的LAK细胞增殖速度较慢，细胞的杀伤活性也不够强，很难满足LAK细 胞临床回输的需求。 为此，亟需一种增强LAK细胞杀伤活性和增殖活性的培养方法。
技术实现思路
有鉴于此，有必要针对上述的LAK细胞增殖活性和杀伤活性低的问题，提供一种 增强LAK细胞杀伤活性和增殖活性的培养方法和用途。 为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案： 一种增强LAK细胞杀伤活性和增殖活性的培养方法，将LAK细胞与DC细胞共培 养。 优选地，所述增强LAK细胞杀伤活性和增殖活性的培养方法，包括w下步骤： S1、细胞的分选： 阳0川采用抗CD14抗体的磁珠将PBMC分为CD14+细胞和CD14细胞； 阳01引 S2、DC细胞的诱导： 将步骤S1分选得到的CD14+细胞诱导并培养为成熟的DC细胞； S3、LAK细胞的诱导： 将步骤S1分选得到的CD14细胞诱导并培养为LAK细胞； S4、DC细胞和LAK细胞共培养： 将S2获得的DC细胞和S3获得的LAK细胞共培养7-8天。[001引优选地，所述步骤S2中DC细胞的诱导具体方法为：将步骤S1分选得到的CD14+ 细胞按照5-10X105个/mL的细胞密度进行培养，培养基为含有lOO-lOOOU/mLGM-CSF、 lOO-lOOOU/mLIL-4 的 X-VIV0 15 无血清培养基；第 5-6 天加入 lOO-lOOOU/mL 的 TNF- a 促 进DC细胞的成熟，培养至第6-7天获得成熟的DC细胞。 优选地，所述步骤S3中LAK细胞的诱导具体方法为：步骤S1分选后得到的 CD14细胞按照5-10 X 10 5个/mL的密度接种培养，培养基为含有10-5化g/mLOKT-3、 lOO-lOOOU/mL IL-2的X-VIV0 15无血清培养基，培养6-7天收集LAK细胞。 优选地，所述步骤S4中DC细胞和LAK细胞共培养具体方法为：将S2获得的DC细 胞和S3获得的LAK细胞共同培养，培养基为含10-50ng/mL 0KT-3、100-1000U/mL比-2的 X-VIV0 15无血清培养基，共培养7-8天后收集细胞共培养物。 优选地，步骤S2-S4中的培养条件为37°C、5% %。 阳02引优选地，所述步骤S2-S4在培养过程中按照1 X 106个/mL的细胞密度补加培养液 和细胞因子。 阳02引优选地，DC细胞与LAK细胞按数量比1:10-25共培养。 更优选地，DC细胞与LAK细胞按数量比1:15-20共培养。 更进一步优选地，DC细胞与LAK细胞按数量比1:20共培养。 本专利技术还提供DC细胞的用途，DC细胞用于增强LAK细胞杀伤活性和增殖活性的 用途。 本专利技术将DC细胞值emlritic Cells,树突状细胞）与LAK细胞共培养，利用DC 细胞的抗原提呈来增强LAK细胞的杀伤活性和增殖活性。DC细胞是一类起源于骨髓、散在 分布、发生迁移的白细胞，是由形态、表型和功能不完全相同的多种细胞组成的一个细胞体 系。DC细胞能敏锐的捕捉肿瘤细胞与正常细胞那微小的差异，并把运种差异传递给T淋己 细胞，进而将人体内残存的、转移的癌细胞全部、彻底地消灭干净。迄今为止，DC细胞被认 为是目前发现的功能最强大的抗原提呈细胞。[002引与现有技术相比，本专利技术增强LAK细胞杀伤活性和增殖活性的方法具有如下有益 效果： 本专利技术增强LAK细胞杀伤活性和增殖活性的方法通过将LAK细胞和DC细胞共培 养，明显促进LAK细胞的增殖，共培养3天后，LAK细胞数量约1 X 1〇9个，共培养6天后，LAK 细胞数量约3. 8 X 1〇9个，约为单独培养LAK细胞浓度的2倍。 本专利技术增强LAK细胞杀伤活性和增殖活性的方法通过将LAK细胞和DC细胞共 培养，增强了 LAK细胞的杀伤活性，效祀比40:1、20:1、10:1时的杀伤活性分别为52. 6%、 39. 3%和15. 7%，远远高于现有技术中LAK细胞的杀伤活性。【附图说明】 阳03U 图1为实施例1中DC细胞的形态图。 图2为实施例1中LAK细胞的形态图。 阳03引图3为实施例1中共培养8天后DC细胞和LAK细胞形态图。 图4为实施例1中LAK细胞的流式检测结果图。 图5为实施例1中LAK细胞增殖曲线图。【具体实施方式】 为了更好的说明本专利技术，下面结合附图和【具体实施方式】做进一步说明。本专利技术LAK 细胞保存液中所用试剂或仪器均可由市场购得，使用的检测方法等都是本领域所熟知的， 在此不再寶述。 在本专利技术中使用的主要仪器分别购自W下公司：细胞培养箱购自德国MEMM邸T公 司，倒置显微镜购自福建M0TIC公司，流式细胞仪购自美国抓公司，酶标仪购自美国梅里埃 公司。实施例1、LAK细胞的培养方法 一种LAK细胞的培养方法，包括W下步骤： W40] S1、细胞的分选 采用抗CD14抗体磁珠从PBMC (外周血单个核细胞）本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种增强LAK细胞杀伤活性和增殖活性的培养方法，其特征在于，将LAK细胞与DC细胞共培养。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈海佳，王一飞，葛啸虎，罗二梅，
申请(专利权)人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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