本发明专利技术公开了一种抗菌肽PD22及其用途。所述抗菌肽PD22的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明专利技术中的抗菌肽PD22具有分子量小、人工合成方便且成本低、对大肠杆菌、沙门氏菌和魏氏梭菌等细菌杀菌作用强、细胞毒性低，在断奶仔猪饲料中应用能够显著降低断奶仔猪腹泻率和提高断奶仔猪的生长速度的优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程领域，尤其涉及一种抗菌肽ro22及其用途。
技术介绍
为了提高母猪繁殖效率和减少母源性疾病的垂直传播，我国养猪场仔猪一般选择 3-4周龄断奶，而断奶过程在自然界中一般发生在3-4个月。仔猪早期断奶给仔猪造成了巨 大的应激，仔猪和母猪分开、营养来源从液态的母乳变为固态的饲料、混群和环境的变化， 且早期断奶仔猪消化系统和免疫系统发育并不完善，极容易受各种病原菌的攻击而感染疾 病，其中消化道疾病是最常见、最严重的疾病之一，也是导致断奶仔猪生长抑制甚至死亡的 重要原因。长期以来，使用抗生素是预防和治疗断奶仔猪腹泻的主要手段，但是抗生素的大 量使用导致病原菌耐药性不断增强、抗生素使用效果不断削弱，且生猪生产中抗生素的长 期大量使用导致的畜产品药物残留和有害菌种耐药性增强已经成为威胁人类安全的重大 隐患。因此，寻找能够替代抗生素解决断奶仔猪肠道疾病问题的产品是当前动物营养研究 中的热点课题。抗菌肽是自然界生物中广泛存在的小分子活性多肽，具有抗菌谱广、热稳定 性强和不易产生细菌耐药性等特点，是替代抗生素理想的潜在物质。然而，天然来源的抗菌 肽大多具有分子量大、抗菌活性不高、对宿主细胞具有毒副作用或能导致宿主溶血等缺陷， 在一定程度上限制了抗菌肽在断奶仔猪养殖中的推广应用。通过分子设计和改造是克服天 然来源抗菌肽缺陷、促进抗菌肽在断奶仔猪养殖中应用的有效手段。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新的抗菌肽。 为实现上述目的，本专利技术提供一种抗菌肽TO22,其特征在于：所述抗菌肽TO22的 氨基酸序列如SEQIDN0:1所示。具体为：KKIVKAALQAATQ，分子量为1369. 67Da，等电点为 10. 30〇 本专利技术还保护所述抗菌肽TO22的用途，其特征在于，所述用途为抗菌的用途。 进一步，所述抗菌为抗大肠杆菌、沙门氏菌和/或魏氏梭菌。 进一步，所述用途为用于饲养家禽的用途。 进一步，所述家禽为猪、鸡、鸭或鹅。 进一步，所述猪为乳仔猪、断奶仔猪、生长猪或种猪。 进一步，所述鸡为肉鸡或蛋鸡。 进一步，所述用途指的是提高断奶仔猪日增重和降低料重比。 进一步，所述用途指的是降低断奶仔猪腹泻率。 进一步，所述用途指的是改善断奶仔猪肠道功能。 本专利技术具有如下优点：本专利技术中的抗菌肽TO22具有分子量小、人工合成方便且成 本低、对大肠杆菌、沙门氏菌和魏氏梭菌等细菌杀菌作用强、细胞毒性低等优点，在断奶仔 猪饲料中应用能够显著降低断奶仔猪腹泻率和提高断奶仔猪的生长速度。 本专利技术的实施例通过测定抗菌肽F*D22最小抑菌浓度（minimalinhibitory concentration,MIC)来反映其抗菌效果，最小抑菌浓度为检测不到细菌生长的最低样品浓 度。结果表明本专利技术的抗菌肽TO22对大肠杆菌、魏氏梭菌、沙门氏菌和枯草芽孢杆菌均有 非常强的杀伤作用。在细胞毒性实验上，即使在300ug/mL的浓度下，抗菌肽TO22对猪小肠 上皮细胞IPEC-I也存在很低（小于10%)的细胞毒副作用。与阴性对照相比，抗菌肽TO22 可显著降低断奶仔猪腹泻率。抗菌肽PD22可显著提高断奶仔猪日增重和降低料重比。显 著提高断奶仔猪空肠和回肠绒毛高度及绒毛高度与隐窝深度的比值，说明抗菌肽TO22能 够显著改善断奶仔猪肠道功能。【附图说明】 图1是抗菌肽TO22细胞毒性分析图； 图2抗菌肽TO22对大肠杆菌攻毒断奶仔猪（24日龄）腹泻的影响图； 图3抗菌肽TO22对24日龄断奶仔猪腹泻率的影响图。【具体实施方式】 下面详细描述本专利技术的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终 相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。实施例中未注明 具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。 所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。 实施例1 :抗菌肽TO22的制备 抗菌肽TO22的化学合成方法：根据
技术实现思路
中所述氨基酸序列，用全自动多肽合 成仪（ABI433)合成TO22全序列（湖南师范大学生命科学学院合成），并通过HPLC反相柱 层析脱盐纯化； 纯化的抗菌肽TO22分子量采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 (MLDI-TOF)测定，等电点使用等电聚焦电泳测定，氨基酸序列采用自动氨基酸序列测定 仪进行解析。 抗菌肽TO22,所述的抗菌肽TO22为人工设计合成的活性多肽，包含13个氨基酸残 基，分子量为1369. 67Da，等电点为10. 30,其氨基酸序列为KKIVKAALQAATQ(SEQIDN0:1)。 实施例2:抗菌肽TO22抑菌实验通过测定抗菌肽]^22 最小抑菌浓度（minimalinhibitoryconcentration,MIC) 来反映其抗菌效果，最小抑菌浓度为检测不到细菌生长的最低样品浓度。采用二倍稀释法， 具体方法如下： 受试细菌接种于LB固体培养基上，然后于37°C培养箱中倒置培养。待菌落长出 后，用一次性接种环挑取各受试细菌单菌落至LB液体培养基中，37°C培养箱中震荡培养至 对数生长期。紫外分光光度计上检测菌液0D600,根据10D600 =IXIO9CFlVmL将受试菌菌 液用液体LB培养基稀释至2X105CFU/mL。然后在无菌96孔板各孔中加入100yLLB液体 培养基，然后在Al孔中加入100yL稀释到一定浓度的抗菌肽TO22样品（抗菌肽样品加入 前用0. 22ym微孔滤膜过滤除菌），混匀后取100yL加入A2孔，A2孔混匀后再取100yL加 入A3孔，依次倍比稀释，最后从A12孔吸出100yL弃去，至此抗菌肽TO22二倍浓度梯度样 制成。向预先加入抗菌肽ro22的各孔中再依次加入已稀释好的菌液100 y L混匀，于37°C 缓慢震荡培养16h，然后测定600nm处吸光值。结果计算：取检测不到细菌生长的孔和与之 相邻的有细菌生长的孔中抗菌肽TO22浓度之和的平均值作为抗菌肽TO22最小抑菌浓度。 测试结果见表1所示。从表1中可以看出抗菌肽TO22对大肠杆菌、魏氏梭菌、沙门氏菌和 枯草芽孢杆菌（中国科学院亚热带农业生态研究所提供）均有非常强的杀伤作用。表1 :抗菌肽TO22对各菌的最小抑菌浓度表[0当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗菌肽PD22，其特征在于：所述抗菌肽PD22的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨焕胜，肖丽萍，施建成，周盛昌，杨林，姜文，叶俊标，
申请(专利权)人：漳州傲农牧业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：福建;35
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