本发明专利技术为一种同步生产甜菊糖苷、黄酮和绿原酸的工业化生产方法。步骤如下：（1）称取甜菊叶，加水提取，过滤得提取液，保温条件下加絮凝剂，调pH至7-12，30-75℃静置0-120min，过滤，得到滤泥和滤液，滤液经树脂纯化得甜菊糖苷产品；（2）滤泥用酸性溶剂提取，合并提取液，浓缩；（3）浓缩液加溶剂稀释，上大孔吸附树脂吸附；（4）对步骤（3）中的大孔吸附树脂进行梯度解析，低度解析液浓缩干燥得绿原酸产品，高度解析液浓缩备用；（5）高度解析浓缩液加水稀释后，用等体积有机溶剂萃取，合并有机相，浓缩干燥得黄酮产品。该方法实现了甜菊糖苷、黄酮和绿原酸的同时提取，降低了生产成本，提高了甜叶菊的综合利用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于天然产物提取
，尤其涉及。
技术介绍
甜菊糖苷为萜苷类天然产物，是从甜叶菊的叶片中分离提取的一种低热量的高倍甜味剂，其甜度为蔗糖的150-300倍，热量却仅为蔗糖的1/300。随着人们对健康问题的日益关注，甜菊糖苷以其低能量、高甜度的优势，已在食品、饮料及日化用品等行业得到了广泛的应用，甜叶菊也已成为继甘蔗和甜菜之后的第三大糖源。甜叶菊属菊科甜菊属多年生草本植物，在其发源地作为甜茶、药茶饮用已有一百多年的历史。甜叶菊中除甜菊糖苷外还含有黄酮、绿原酸等成分，且这些成分都有重要的生物活性，如抗菌、降血压、降血脂等。目前，关于甜菊糖苷的制备方法国内外均有报道，但只有少数关于甜菊糖苷副产物提取的研究。申请号2007101634536、200710111313.4、200710111314.9和论文《甜叶菊有效部位制备工艺及化学成分与质量控制方法研究》中将甜叶菊糖苷和黄酮同时提取出后，直接用树脂分离，得甜菊糖苷产品和黄酮产品。甜叶菊提取液中除甜菊糖苷和黄酮外，还含有绿原酸、无机盐、氨基酸等多种水溶性杂质，直接用树脂分离，不能得到高品质的糖苷和黄酮产品，该类专利虽已发布较长时间，但仍没有在工业上应用。论文《甜叶菊渣中总黄酮的纯化工艺研究》、《甜叶菊渣中总黄酮的提取工艺优选》和《甜叶菊中总糖苷和总黄酮的提取、纯化工艺及清除自由基研究》中提取糖苷成分后，用乙醇对叶渣进行再一次提取得甜叶菊黄酮产品。甜叶菊黄酮分子多含有糖基片段，大大增加了其水溶性，糖苷提取过程中约80%的黄酮成分已随糖苷一起浸出，液渣中只有少量黄酮残留，只对叶渣进行提取，造成了黄酮成分的大量损失，且再一次提取导致耗能增加，不利于工业化生产。文章中多采用紫外方法在358nm波长下检测黄酮含量，叶渣用乙醇提取过程中叶绿素、绿原酸等成分也被同时提出，且这些成分在该波长下也有较强吸收，对检测结果造成较大干扰。由于技术欠缺，目前国内外甜菊糖苷生产厂商只将甜叶菊作为甜菊糖苷的原料，市场上没有其它副产物推出，造成了甜叶菊资源的极大浪费。本申请专利中提供了一种甜菊糖苷副产物黄酮和绿原酸的工业化生产方法，可很大程度上提高甜叶菊的综合利用价值。
技术实现思路
为了克服现有技术缺点，本专利技术提供了，它对设备要求低，可用于甜菊糖苷、黄酮和绿原酸的工业化生产。本专利技术的目的将通过以下技术方案得以实现: (O称取甜菊叶，加水提取，过滤得提取液，保温条件下加絮凝剂，调PH至7-12，30-75°C静置0-120min，过滤，得到滤泥和滤液，滤液经树脂纯化得甜菊糖苷产品； (2)滤泥用酸性溶剂提取，合并提取液，浓缩； (3)浓缩液加溶剂稀释，上大孔吸附树脂吸附； (4)对步骤(3)中的大孔吸附树脂进行梯度解析，低度解析液浓缩干燥得绿原酸产品，高度解析液浓缩备用； (5)高度解析浓缩液加水稀释后，用等体积有机溶剂萃取，合并有机相，浓缩干燥得黄酬广品。本专利技术所述步骤(I)中的树脂为册20、厶05-4、691、0130、001\6、001父8、SQ338、330中的任意一种或几种。本专利技术所述步骤(I)中的絮凝剂为硫酸铝钾、聚合氯化铝、硫酸亚铁中的任意一种或几种，添加量为滤液重量的0.1-5%。本专利技术所述步骤(I)中的提取方式为回流、超声辅助、微波辅助、连续逆流中的任意一种或几种；加水量为甜菊叶重量的10-30倍；加热温度为50-100°C，提取时间为l_5h，提取次数为2-5次。本专利技术所述步骤(2)中的提取次数为1-5次，所述浓缩为浓缩至固含量10-100% ;所述步骤(2)中酸性溶剂为水、乙醇、甲醇、异丙醇、丙酮、1，4-二氧六环中的任意一种或几种，ρΗ=0.1-5.5。本专利技术所述步骤(3)中稀释用溶剂为水、乙醇、甲醇中的任意一种或几种；所述浓缩液稀释至原来浓度的1/2-1/20 ;所述大孔吸附树脂为AB-8、DlOU LX-5中的任意一种或几种；所述吸附流速为0.5-3BV/h0本专利技术所述步骤(4)中的解析用溶剂为水、乙醇、甲醇、丙醇、1，4-二氧六环、丙酮中的任意一种或几种。本专利技术所述步骤(4)中的梯度解析，低度解析溶剂中有机溶剂浓度为5-30%，用量为1-5倍柱体积，高度解析溶剂中有机溶剂浓度为50-90%，用量为1-5倍柱体积；所述高度解析液浓缩至固含量为50-90%。本专利技术所述步骤(5)中的加水稀释至原来浓度的1/2-1/20 ;所述步骤(5)中的有机溶剂为与水不互溶的有机溶剂。本专利技术所述步骤(5)中的有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷、甲苯、二甲苯中的任意一种或几种；所述有机溶剂萃取次数1-5次。本专利技术质量控制方法可包括以下含量测定方法中的一种或几种: 1.总糖苷 本专利技术提出的甜叶菊甜菊苷类，是从甜菊叶中提取的甜菊苷类活性成分的组合，主要包括甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷和甜菊双糖苷，总糖苷含量检测参照《JECFA第73届会议制定的甜菊糖苷检测标准》。2.绿原酸 本专利技术提出的甜叶菊绿原酸提取物，是从甜菊叶中提取的绿原酸类活性成分的组合，主要包括咖啡酰奎尼酸，阿魏酰奎尼酸，二咖啡酰奎尼酸，P-香豆酰奎尼酸，咖啡酰阿魏酰奎尼酸等，其含量检测参照2013年美国Chromadex机构检测方法。3.总黄酮 本专利技术提出的甜叶菊黄酮提取物，是从甜菊叶中提取的黄酮类活性成分的组合，主要成分有:槲皮素、槲皮苷、槲皮素-3-f β -D-阿拉伯糖苷、槲皮素-3-0-、芹菜素、芹菜素_4’ ~0~ β -D-葡萄糖苷、木犀草素、木犀草素β -D-葡萄糖苷和山奈酚-3-f a -L-鼠李糖苷等，苷元为槲皮素、山奈酚、芹菜素和木犀草素。样品的前处理方法:精密称取0.1OOOg样品至10mL三角瓶中，加入25mL甲醇-25%盐酸水溶液，80°C水浴回流45min，冷却至室温，转移至50mL容量瓶中，甲醇定容。色谱条件:仪器=Agilent 1260高效液相色谱仪，配置紫外检测器；色谱柱:C18柱(4.6Χ250_，5μπι)色谱柱；检测波长:360nm ;色谱柱温度:30°C ;进样量:10yL ;运行时间:30min ;流速1.3 mL/min ;流动相:pH=l.0, 40%甲醇水溶液。标准曲线绘制:分别精密吸取槲皮素、山奈酚、芹菜素和木犀草素对照品溶液(浓度为0.67 μ g/ μ L) 0、2、4、6、8、10 μ L注入液相色谱仪，测定各色谱峰峰面积，以对照品进样量为横坐标，色谱峰峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。利用UPLC-MS技术，确定各成分比例，确定水解系数。UPLC条件:色谱柱C18(2.3μm, 2.1 X 100 mm);流速 0.3 mL/min;进样量 7 μ L;流动相 ρΗ=1.0，40% 甲醇水溶液；MS-ESI (-):毛细管电压2.7 kv;进样锥电压10 v ;离子源温度120°C ;去溶剂温度3500C ;UV 吸收波长 360 nm。含量测定:精密称取3批合适量的甜叶菊黄酮产品3份，置1mL量瓶中，加70%乙腈超声溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为总黄酮含量测定的样品溶液。精密吸取上述供试溶液5 μ L,注入液相色谱仪，测定各色谱峰峰面积，乘以各自水本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种同步生产甜菊糖苷、黄酮和绿原酸的工业化生产方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）称取甜菊叶，加水提取，过滤得提取液，保温条件下加絮凝剂，调pH至7‑12，30‑75℃静置0‑120min，过滤，得到滤泥和滤液，滤液经树脂纯化得甜菊糖苷产品；（2）滤泥用酸性溶剂提取，合并提取液，浓缩；（3）浓缩液加溶剂稀释，上大孔吸附树脂吸附；（4）对步骤（3）中的大孔吸附树脂进行梯度解析，低度解析液浓缩干燥得绿原酸产品，高度解析液浓缩备用；（5）高度解析浓缩液加水稀释后，用等体积有机溶剂萃取，合并有机相，浓缩干燥得黄酮产品。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：徐美利，牛志平，田洪，王立志，李乾丽，
申请(专利权)人：晨光生物科技集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13
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