本发明专利技术公开了能够用于在植物中调控基因表达的多核苷酸序列。公开了来源于高粱(Sorghum bicolor)的在植物中起作用的终止子序列。还公开了核酸分子、重组表达构建体、包含这些终止子序列的植物和种子。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】 本专利申请要求提交于2013年2月18日的美国临时申请61/765900的权益，其 全部内容W引用方式并入本文。
本专利技术设及植物分子生物学和植物基因工程领域。更具体地，其设及用于调控植 物基因表达的新型植物终止子序列及其应用。
技术介绍
植物基因工程近来的进步已打开了工程化植物W具有改善的特性或性状的新的 大口。该些转基因植物在其基因组中典型地具有重组DNA构建体，其具有可操作地连接至 多个调控区的蛋白质编码区，该调控区使转基因准确的表达。在转基因植物中帮助调控基 因表达的调控元件的一些例子为启动子、内含子、终止子、增强子和沉默子。 植物基因工程已发展至将多种性状导入商业上重要的植物中，也叫基因堆积。该 是通过多基因转化实现的，其中多种基因被转化W产生可表达复合表型或多种表型的转基 因植物。然而最优化地调节或控制每种转基因的表达是重要的。调控元件需要为多样的W 避免引入相同的转基因植物重复序列，它们已经与对转基因表达和稳定性来说不期望的负 面效应相关联（Peremarti等人，（2010)PlantMolBiol73 ;363-378;Mette等人，（1999) EMBOJ18 ;241-248;Mette等人，（2000化MBOJ19 ;5194-5201;Mourrain等人，（2007) Planta225 ;365-379,美国专利7632982,美国专利7491813,美国专利7674950,PCT专利申 请PCT/US2009/046968)。因此，发现和表征能被用于在重要的农作物物种中表达异源性核 酸的新型调控元件是重要的。各种不同的调控区能够被用于最优化地控制每种转基因的表 达。 调控序列位于编码区的下游，编码区包含用于转录终止和3'mRNA加工的所需 信号，并被称为终止子序列。该终止子序列在mRNA加工、定位、稳定性和翻译中起关键作 用（Prou壯oot，N. (2004)Curr.Op.CellBiol16:272-278. ;Gilmartin，2005)。包含在 终止子序列中的3'调控序列能够影响基因的表达水平。已经发现植物细胞中嵌合基因 的优化表达依赖于合适的3'序列的存在（Inge化recht，I.L.W.等人（1989)PlantCell 1 ;671-680)。通过基因的渗漏终止子的通读转录可导致从另一个基因的启动子的一个转 基因的无益转录。转基因植物中转基因的双向、趋同转录也可由于分离的趋同基因的渗 漏转录终止或来自基因组启动子而发生。趋同、重叠转录可降低转基因表达、或生成反义 RNA炬ieri，S.等人（2002)MolecularBreeding10:107-117)。该强调了发现新型和高效 转录终止子的重要性。
技术实现思路
本专利技术设及用于调控植物基因表达的调控序列。具体地，本专利技术设及终止子序列。 本专利技术提供了包含终止子序列的重组DNA构建体。 本专利技术的一个实施例是分离的多核巧酸序列，该分离的多核巧酸包含；(a)如SEQ ID NO ;1所示的序列；(b)与SEQ ID NO ;1具有至少95%序列同一性的序列；或（C)包含 (a)或化）的功能性片段的序列，其中所述分离的多核巧酸序列在植物细胞中作为终止子 起作用。本专利技术的另一个实施例是包含分离的多核巧酸序列的重组构建体，该分离的多核 巧酸序列包含；（a)如SEQ ID NO; 1所示的序列；化）与SEQ ID NO; 1具有至少95%序列同 一性的序列；或（C)包含（a)或化）的功能性片段的序列，其中该分离的多核巧酸序列在植 物细胞中作为终止子起作用。该重组构建体还可包含启动子和异源多核巧酸，其中启动子 和异源多核巧酸可操作地连接至分离的多核巧酸序列，并且对于所关注的分离的多核巧酸 来说是异源的。[000引本专利技术的另一个实施例是在植物中表达异源多核巧酸的方法，该方法包括W下步 骤；（a)将上文所述的重组DNA构建体导入可再生的植物细胞；化）从（a)的可再生的植物 细胞再生转基因植物；W及（C)从步骤化）的转基因植物获取子代植物，其中转基因植物和 子代植物包含重组DNA构建体并表现出异源多核巧酸的表达。 在第四实施例中，本专利技术设及包含重组DNA构建体的载体、细胞、植物、或种子，该 重组DNA构建体包含本专利技术所述的终止子序列。 本专利技术涵盖了包含上文所述的重组DNA构建体的再生的、成熟的和能繁殖的转基 因植物、由其产生的转基因种子、T1和后续世代。该转基因的植物细胞、组织、植株和种子 可包含所关注的至少一种重组DNA构建体。 在一个实施例中，包含本专利技术所描述的终止子序列的植物是单子叶植物。在另一 个实施例中，包含本专利技术所描述的终止子序列的植物是玉米植物。 附图说巧巧序列表 根据下列的详细描述和附图W及序列表，可W更全面地理解本专利技术，下列的详细 描述和附图W及序列表形成本申请的一部分。此序列表中W单个字母表示核巧酸序列， 字母表示氨基酸，如Nucleic Acids Research 13:3021-3030 (1985)和Biochemical Journal 219 (No. 2) ;345-373 (1984)中所描述的lUPAC-IUBMB标准所规定，上述文献 全文W引用方式并入本文。用于核巧酸和氨基酸序列数据的符号和格式遵循在37C. F. R. § 1. 822中所示出的规定。 图1示出了PHP32498的图谱，用于在扩增后克隆SB-UBU0. 58地b)终止子的载 体。 图2示出了PHP34006的图谱，用于测试0.58地bSB-UBI终止子（SB-UBITERM) 的载体。 图3示出了在瞬时测定中0. 58地b SB-UBI终止子相对于PINII终止子的测试结 果。它示出了用PHP34006(0. 58地b SB-UBI终止子）和PHP34005(PINII终止子）转化的 BMS细胞中GUS报告基因表达的定量分析。 图4A和图4B示出了用SB-UBI(PHP34006)和PINII(PHP34005)终止子构建体稳 定转化的Gaspe Flint来源的玉米品系中GUS报告基因表达的定量分析。图4A示出了在 蛋白水平测定的GUS报告基因表达，并且图4B示出了用qRT-PCR(定量反转录-聚合酶链 反应）测定的GUS报告基因表达。[001引 图5A和5B示出了采用SB-UBI终止子和PINII终止子下游的两组引物巧A中为 组1，5B中为组2)稳定转化的GaspeFlint来源的玉米品系的qRT-PCR测定结果。 图6示出在克隆的SB-UBI终止子（SEQIDNO;1)与SEQIDNO;18的核巧酸1至 584bp(3<UTR加上下游的基因序列）之间的比对。SEQIDNO;1是SB-UBI终止子的584bp的核巧酸序列。[002USEQIDNO;2是用于扩增SB-UBI终止子的正向引物TMS2118的核巧酸序列。 [002引SEQIDNO;3是用于扩增SB-UBI终止子的反向引物TMS2119的核巧酸序列。[002引SEQIDN0;4是PHP32498的核巧酸序列，在PCR扩增后用于克隆1.0化SB-UBI终 止子的载体。SEQIDNO;5是PHP34006的核巧本文档来自技高网...
【技术保护点】
包含分离的多核苷酸序列的重组构建体，所述分离的多核苷酸序列包含：(a)包含如SEQ ID NO：1所示的序列的核苷酸序列；(b)包含与如SEQ ID NO：1所示的序列具有至少95％同一性的序列的核苷酸序列；或(c)包含(a)或(b)的功能性片段的核苷酸序列；其中所述分离的多核苷酸序列在植物细胞中作为转录终止子起作用。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：SE阿比特，
申请(专利权)人：先锋国际良种公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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