本发明专利技术公开了一种利用黄腐酸促进雨生红球藻生产虾青素的方法，首先制备雨生红球藻藻液，雨生红球藻到对数生长期后期，此时细胞浓度达到106cells mL-1，用缺氮的BG-11培养基稀释藻液使其浓度达到2×105cells mL-1，获得诱导用的藻液；然后用纯水配成10g L-1的黄腐酸母液，将黄腐酸母液添加到已经稀释好的诱导藻液中使黄腐酸浓度达到4.95-5.05mg L-1；然后将上述藻液进行培养，待藻体细胞完全变红后，收集藻细胞此时其虾青素的积累量已达到最高。本发明专利技术方法简单可行，成本低廉，并大幅缩短雨生红球藻变红的时间且虾青素的量有较显著地提高，从而很大的提高了虾青素的产率。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程
，具体设及一种利用黄腐酸促进雨生红球藻生产邮 青素的方法。
技术介绍
天然邮青素（3,3'-二哲基-4,4'-二酬基-e，e'-胡萝h素）是目前自然 界发现的最强的抗氧化剂。天然邮青素来源自发夫酵母、蛙鱼、邮壳及雨生红球藻中，而雨 生红球藻中含有丰富的邮青素，可达其干重的4%，被誉为天然邮青素的浓缩品。邮青素的 抗氧化活性主要体现在一方面它是类胡萝h素的最高级衍生物；另一方面其共辆双键末端 具有不饱和的酬基和哲基，由此基团构成a-哲基酬，因此它要强于一般的类胡萝h素的 抗氧化性。天然邮青素对人体无任何毒副作用，邮青素的抗氧化活性使得其在医药、化妆品 和保健品等有很大的应用潜力，另外邮青素也可W作为水产动物的饲料添加剂W及食品添 加剂。 雨生红球藻属于一种单细胞绿藻，它只有在胁迫条件下，比如高温、强光照、氮饥 饿等，能够大量的积累邮青素。而关于刺激雨生红球藻产邮青素的诱导大多集中在物理和 化学因子上，较少有关于植物激素的研究。黄腐酸作为一种植物生长调节剂，能够促进植物 生长，具有很强的抗逆作用，而雨生红球藻正是在该种胁迫下才大量积累邮青素。外援添加 黄腐酸能激发植物防御基因的表达，诱导植物的化学防御，与机械损伤和昆虫取食相似的 效果。因此黄腐酸可能会诱导雨生红球藻大量积累邮青素。 目前国内已经有规模化生产邮青素的公司，也已有了一些相关的技术和专利，比 如"雨生红球藻的培养生产方法"（201210295602)公开了一种利用光生物反应器培养雨 生红球藻的方法，包括不同L邸光源的和二氧化碳调节抑值培养绿色细胞的方法。湖北 师范学院的"一种雨生红球藻高密度培养的气升式光生物反应器"（CN200510018203. 4)， 公开了一种雨生红球藻高密度培养的气升式光生物反应器，包括养殖罐、水处理装置、照明 装置、气体供应装置，通过调控反应条件实现全天候高密度养殖，并将藻的养殖和邮青素 积累结合在同一反应器中完成。天津大学的"用酵母发酵残液培养藻类生产邮青素的方 法"（CN1480524A)，公开了一种利用酵母发酵残液生产邮青素的方法，是向酵母发酵残液中 加入无机盐配成培养基，在特定的容器内培养雨生红球藻或绿球藻，经过分离提取邮青素。 上述相关专利技术虽然先进，但是工艺较为复杂，设备要求高，操作较为繁琐，该就增加了 生产的成本和技术推广的难度。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种利用黄腐酸促进雨生红球藻生产邮青素的方法，该方法 的不仅操作简单、成本低，而且可很大程度上缩短积累邮青素的周期及提高邮青素的产率。 本专利技术所采用的技术方案是，一种利用黄腐酸促进雨生红球藻生产邮青素的方 法，包括W下步骤： 步骤1、藻液的制备；培养雨生红球藻到对数生长期后期，用缺氮的BG-11培养基 稀释藻液并获得诱导的藻液；[000引步骤2、诱导雨生红球藻积累邮青素：用纯水配成lOg。的黄腐酸母液，将黄腐酸 母液添加到已经稀释好的诱导的藻液中使黄腐酸浓度达到4. 95-5. 05mg然后将上述藻 液进行培养，待藻体细胞完全变红后，收集藻细胞； 步骤3、利用有机溶剂提取藻细胞的邮青素。 本专利技术的特点还在于： 雨生红球藻为雨生红球藻菌株化ematococ州SpluvialisLUGU。 步骤1中藻液的制备具体为：在24-26°C、光强2900-30001X，持续光照条件下培 养，培养雨生红球藻到达对数生长期后期，此时细胞浓度达到l〇6cellsml/i，利用缺氮的 BG-11培养基稀释到2X105cellsmL-i作为诱导藻液。 步骤2中诱导雨生红球藻积累邮青素中的培养条件为；26-28 °C、光强 9500-100001X、冷光灯连续光照及饥饿营养盐的复合胁迫。 步骤3中利用有机溶剂提取藻细胞的邮青素具体为：取5ml上述藻液，400化/min 离屯、5min，弃上清得藻细胞沉淀；分别向藻细胞沉淀中加入2mL30%甲醇和5%K0H混合 液，60°C水浴15min，4000r/min离屯、lOmin，除上清，沉淀加入纯水洗漆2次，除碱液残留； 然后加入5mLDMS0,200w超声破壁15min，其中，超声Imin，10s间歇，于45°C水浴20min，抽 提至藻体发白，离屯、收集上清测0D490;并按照公式(4.SAXV3) /Vfc计算得出邮 青素的含量，其中C为邮青素含量，A为490nm下0D值，Va为DMS0体积，Vb为藻液体积。 本专利技术的有益效果是；（1)本专利技术操作简单易行、成本低，原材料为自己筛选的雨 生红球藻菌株可按常规方法培养。 (2)本专利技术大幅提高了邮青素的产率，实验证明，添加4. 95-5. 05mg。的黄腐 酸的诱导组比对照组积累邮青素的周期缩短了 20-30%，邮青素的产量比对照组提高了 82. 3-86. 9%，达到 20. 3-20. 817mg[1。【具体实施方式】 下面结合【具体实施方式】对本专利技术进行详细说明。 本专利技术提供一种利用黄腐酸促进雨生红球藻生产邮青素的方法，包括W下步骤： 步骤1、藻液的制备；雨生红球藻采用雨生红球藻菌株化ematococ州Spluvialis LUGU(NCBI:KM115647)，利用BG-11 培养基，在 24-26°C、光强 2900-30001X，持续光照条件下 培养，培养雨生红球藻到达对数生长期后期，此时藻细胞浓度达到l〇6cellsml/i，利用缺氮 的BG-11培养基稀释到2X105cellsmL-1作为诱导藻液； 步骤2、诱导雨生红球藻积累邮青素：用纯水配成lOg。的黄腐酸母液，将黄腐酸 母液添加到已经稀释好的诱导藻液中使黄腐酸浓度达到4. 95-5. 05mg然后将上述藻液 在26-28°C、光强9500-100001X、冷光灯连续光照及饥饿营养盐的复合胁迫下进行培养，待 藻体细胞完全变红后，收集藻细胞； 步骤3、利用有机溶剂提取藻细胞的邮青素，邮青素的提取方法： 每两天取5ml上述藻液，400化/min离屯、5min，弃上清得藻细胞沉淀；分别向藻细 胞沉淀中加入2血30%甲醇和5%KOH混合液，60°C水浴15min，4000r/min离屯、lOmin，除 上清，沉淀加入纯水洗漆2次，除碱液残留；然后加入5mLD当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种利用黄腐酸促进雨生红球藻生产虾青素的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、藻液的制备：培养雨生红球藻到对数生长期后期，用缺氮的BG‑11培养基稀释藻液并获得诱导的藻液；步骤2、诱导雨生红球藻积累虾青素：用纯水配成10g L‑1的黄腐酸母液，将黄腐酸母液添加到已经稀释好的诱导的藻液中使黄腐酸浓度达到4.95‑5.05mg L‑1；然后将上述藻液进行培养，待藻体细胞完全变红后，收集藻细胞；步骤3、利用有机溶剂提取藻细胞的虾青素。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：余旭亚，丁柯，张和平，赵永腾，尚敏敏，车绕琼，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：云南;53
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