本发明专利技术涉及用于特异性检测来自受试者的样品中的补体因子H相关蛋白质1（CFHR1）的测定，以及与之相关的试剂盒和试剂。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】用于补体因子H相关蛋白质1检测的试剂、试剂盒和方法 本专利技术涉及用于特异性检测来自对象的样品中的补体因子H相关蛋白质1 (CFHR1)的测定，以及与之相关的试剂盒试剂。 补体因子H也称为因子H是含唾液酸糖蛋白，其在补体介导的免疫系统的调节中 起不可或缺的作用，所述补体介导的免疫系统涉及微生物防御、免疫复合物处理、程序性细 胞死亡和年龄相关性黄斑变性。补体因子H是最佳表征的补体因子H蛋白质家族成员。补 体因子H家族由下述成员组成：补体因子H(CFH)、补体因子H相关蛋白质1 (CFHR1)、补体 因子H相关蛋白质2 (CFHR2)、补体因子H相关蛋白质3 (CFHR3)、具有同种型4A和4B的 补体因子H相关蛋白质4 (CFHR4A和CFHR4B)、以及补体因子H相关蛋白质5 (CFHR5)。补 体因子H相关蛋白质在补体因子H基因下游编码，并且与补体因子H的子结构域共享高度 同源性。补体因子H相关蛋白质还共享功能相似性（Jozsi，M.和Zipfel，P. F.，Trend in Immunology 29 (2008) 380-387)。 补体系统由~40种蛋白质组成，所述~40种蛋白质存在于体液中或者细胞和组织 表面上，并且通过三个主要途径以级联样方式活化（Walport，M. J.N.，Engl. J. Med. 344， 1058-1066)。替代途径通过中心组分C3的自发水解以低速率连续活化，凝集素途径通过识 别微生物碳水化合物的甘露糖结合凝集素或纤维胶原素（ficolins)起始，并且经典途径通 过Clq与抗原结合的免疫球蛋白结合而活化。酶促步骤生成补体组分的活性片段，并且触 发进一步的扩增。三个途径在C3浓度时合并，所述C3在活化后被切割成C3a和C3b。补 体因子H保护宿主细胞免于起因于无限制的补体活化的损伤。补体因子H通过下述来调节 自身细胞上的补体活化：具有对因子I介导的C3b切割的辅因子活性，以及针对替代途径 C3转化酶C3bBb的衰变加速活性。补体因子H使自身细胞免于补体活化，而不是细菌/病 毒。由于补体因子H在补体调节中的中枢作用，存在起于异常(FH活性的许多临床并发症。 补体因子H基因中的突变与严重和多样性疾病相关，包括罕见肾病症溶血性尿毒症综合征 (HUS)和膜性增生性肾小球肾炎（MPGN)也称为致密沉积物病（DDD)、膜性增生性肾小球肾 炎II型或致密沉积物病、以及更频繁的视网膜疾病年龄相关性黄斑变性(AMD)。除其补体 调节活性之外，补体因子H还具有多重生理活性，并且1)充当细胞外基质组分，2)与整联蛋 白型细胞受体结合，和3)与广泛选择的配体相互作用，例如C反应蛋白、凝血酶敏感蛋白、 骨唾液蛋白、骨桥蛋白和肝素。 补体因子H蛋白质家族包含蛋白质CFH、CFHR1、CFHR2、CFHR3、CFHR4A、CFHR4B和 CFHR5〇 显而易见的是在现有技术中，没有特异性方法可用于血液、血清、血浆、液体 (liquor)样品或任何其他体液中的补体因子H相关蛋白质1 (CFHR1)的体外检测。本专利技术 的专利技术人目前已发现且可以建立特异性测定衍生自个体的血液、血清、血浆或液体样品中 的CFHR1的方法。 本专利技术的目的是提供样品中的CFHR1检测的简单和成本有效的操作，例如以便诊 断与CFHR1相关的疾病和病症。 全血、血清或血浆是临床常规中最广泛使用的样品来源。帮助可靠检测某种疾病 或提供早期预后信息的标记物的鉴定可以导致极大帮助该疾病诊断和管理的方法。尤其重 要的是改善某些疾病的早期诊断，因为早期干预可以减少功能残废且改善长期结果。 本专利技术的目的是研宄在体外优选在对象的体液样品中特异性评价CFHR1，即与其 他CFH家族成员无交叉反应性的方法。 本专利技术的专利技术人已令人惊讶地能够证实使用本专利技术的试剂盒，特异性检测补体因 子H相关蛋白质1 (CFHR1)的方法，所述CFHR1是补体因子H家族成员的蛋白质。 本专利技术的方法特别适合于对象的血液、血清、血浆或液体样品中的CFHR1的体外 评价。 所公开的方法和试剂盒可以克服目前已知的可用于评价CH1家族成员的方法的 几个问题。 在一个实施方案中，本专利技术涉及包含下述的试剂盒： a) 能够结合补体因子H R1 (CFHR1)蛋白质的第一试剂，和 b) 能够结合补体因子H R1 (CFHR1)蛋白质的第二试剂， 其中第一试剂和第二试剂与不同且非重叠的表位结合， 并且其中第一试剂和第二试剂两者不都与(FH交叉反应， 并且其中第一试剂和第二试剂两者不都与CFHR2交叉反应， 并且其中第一试剂和第二试剂两者不都与CFHR3交叉反应， 并且其中第一试剂和第二试剂两者不都与CFHR4交叉反应， 并且其中第一试剂和第二试剂两者不都与CFHR5交叉反应， 并且其中一种试剂用可检测标记进行标记， 并且其中另一种试剂能够固定到固相上。 在优选实施方案中，非重叠表位是位于CFHR1的不同结构域中的表位。 惊讶地发现此类试剂盒允许特异性检测来自对象的样品中的CFHR1，如实施例 7、8、9和10中所示。特别地，成功使用包含标记的单克隆抗体MAB〈CFHRl>M-5. 1. 5和生 物素标记的抗体MAB〈CFH/CFHRl>M-L20/3的试剂盒。如实施例中所述，生物素标记的抗 体MAB〈CFH/CFHRl>M-L20/3能够经由与包被有链霉抗生物素蛋白的磁性颗粒结合而固定 到固相上。另外，MAB〈CFHRl>M-5. 1.5是钌化的，并且可以通过电化学发光进行检测。另 外，两种抗体与不同且非重叠的表位结合，因为对应于CHFR1的氨基酸1-143的免疫原 (=CHFR1的SCR (短共有重复序列）结构域1-2)用于生成MAB〈CFHRl>M-5. 1. 5,而MAB〈CFH/ CFHRDM-L20/3与CFHR1的更C末端部分内，即在CHFR1的SCR结构域3-4-5内的表位结 合。 第一试剂和第二试剂应理解为多肽或多肽复合物。 因此，在本专利技术的试剂盒的一个优选实施方案中，第一试剂与SEQ ID No. 2的氨 基酸144 - 330内的表位结合。 因此，在本专利技术的试剂盒的另一个优选实施方案中，第二试剂与SEQ ID No. 2的 氨基酸1-143内的表位结合。 如表1中所示，MAB〈CFHRl>M-5. 1. 5不与CFH交叉反应，但显示与CFHR2交叉反应。 另外，表1显示MAB〈CFH/CFHRl>M-L20/3与(FH和CFHR5交叉反应，但不与CFHR2交叉反应。 分别缺乏与CFHR2和/或era和CFHR5的交叉反应是至关重要的，因为CFH蛋白 质家族的这些成员显示与CFHR1的最大结构相似性。 因此，在本专利技术的试剂盒的另一个优选实施方案中，第一试剂不与CFHR2交叉反 应。 在本专利技术的试剂盒的另一个优选实施方案中，第二试剂不与CFH交叉反应。 在本专利技术的试剂盒的另一个优选实施方案中，第二试剂不与CFHR5交叉反应。 在本专利技术的试剂盒的另一个优选实施方案中，第二试剂不与(FH和CFHR5交叉反 应。 在试剂盒的一个优选实施方案中，第一试剂与(FH和CFHR5交叉反应，但不与 CFHR2、CF本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种试剂盒，其包含a）能够结合补体因子H R1（CFHR1）蛋白质的第一试剂，和b）能够结合补体因子H R1（CFHR1）蛋白质的第二试剂，其中所述第一试剂和所述第二试剂与不同且非重叠的表位结合，并且其中所述第一试剂和所述第二试剂两者不都与CFH交叉反应，并且其中所述第一试剂和所述第二试剂两者不都与CFHR2交叉反应，并且其中所述第一试剂和所述第二试剂两者不都与CFHR3交叉反应，并且其中所述第一试剂和所述第二试剂两者不都与CFHR4交叉反应，并且其中所述第一试剂和所述第二试剂两者不都与CFHR5交叉反应，并且其中一种试剂用可检测标记进行标记，并且其中另一种试剂能够固定到固相上。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：A恩格尔，A加卢瑟，J卡尔，P卡斯特纳，W奥伯迈尔，M索库波瓦，
申请(专利权)人：霍夫曼拉罗奇有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH
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