一种杜氏盐藻培养基及培养方法技术

本发明专利技术涉及一种杜氏盐藻培养基，所述的培养基的组分及配比为：NaNO3 20-60mg/L，Na3PO4 20-40mg/L，K2HPO4 15-20mg/L，铁盐母液10-15ml/L，7H2O-ZnSO4 6-8mg/L，4H2O-MnCl2 4-6mg/L，5H2O-CuSO4 45-54ug/L，海盐200-250g/L，硼砂0.03-0.2g/L，CaCl2    0.05-0.1mg/L，余量为水。采用所述的培养基进行盐藻的培养，有利于盐藻细胞的增殖，还可使单个盐藻细胞中的β-胡萝卜素含量达到最高，同时还可明显提高盐藻蛋白质的合成量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于食品科学
，具体涉及。
技术介绍
盐藻对盐度有较强的适应性，可生长于接近于淡水到饱和盐水的各种盐度条件 下，在盐湖及海洋等高盐度地区分布广泛。盐藻是唯一一种没有细胞壁的种类，它属于一种 低等真核生物。盐藻富含多糖类化合物、微量元素、蛋白质、高度不饱和脂肪酸等多种营养 成分。目前，其已被用于多个领域，如它可作为鱼、虾等幼体的饵料，还可作为重要的抗氧化 及保湿成分应用于护肤化妆品领域。 0 -胡萝卜素的分子式为C 40 H 56，相对分子量为536. 88。它由四个异戊二 烯双键首尾相连而成，分子两端各有一个紫萝酮环，主要有全反式、9-顺式、13 -顺式 及15-顺式四种形式。0-胡萝卜素在体内酶的作用下可转变为维生素A，对保证正常的 生长和发育及 抗感染具有重要的作用；胡萝卜素分子具有多个共轭多烯双键的特殊结构，使它 能与含氧自由基发生不可逆反应，可清除氧自由基，抗氧化；可以增强免疫力，提高人体免 疫系统抵抗致癌物的能力；口服胡萝卜素可防止光敏感性红斑者的形成，并可降低皮 肤对紫 外光的敏感性；同时对心血管疾病、心肌细胞缺氧发生具有保护作用；此外，胡萝 卜素还是自然界中普遍存在、最稳定的天然色素。因此，其被广泛用于医药、食品及化妆品 等领域。胡萝卜素虽然分布广，但含量极微，以至难以从自然资源中提取和生产这种产 物。而杜氏盐藻细胞内有一杯状色素体，色素体内的色素主要是叶绿素和类胡萝卜素，报道 显示，其类胡萝卜素包括叶黄素、a-胡萝卜素及0-胡萝卜素等21种类，而其中晶体中反 式胡萝卜素相对含量为74. 26%，在极限条件下，盐藻中累积的0-胡萝卜素含量可高 达藻体干重的14%。因此，使得盐藻成为国内外公认的天然0-胡萝卜素的主要来源之一。 但在通常条件下，盐藻中e-胡萝卜素含量并不理想，而在改变其代谢途径时，盐藻可在胞 内合成并积累大量的胡萝卜素。因此，开展盐藻的科学养殖研宄具有重要的科研意义， 尤其提高盐藻中胡萝卜素的含量尤为重要。目前，已有相关研宄表明，盐藻生长的最适 磷源为磷酸盐，最适氮源为硝酸盐，而有关这两种无机盐的最佳浓度及盐藻生长所需要的 其他元素的研宄甚少，为此，本专利技术提供一种培养基，可提高盐藻产量尤其可提高其0 _胡 萝卜素含量。
技术实现思路
本专利技术的目的是解决现有技术中存在的上述问题，提供一种提取效率高，e -胡萝 卜素损失少且适用性广的e-胡萝卜素的超声提取法。 本专利技术的技术方案如下： 一种杜氏盐藻培养基，所述的培养基的组方及配比为： NaN03 20-60mg/L， Na3P04 20-40mg/L, K2HP04 15-20mg/L， 铁盐母液 10_15ml/L， 7 H20-ZnS04 6_8mg/L， 4 H20-MnC12 4_6mg/L， 5 H20- CuS04 45-54ug/L， 海盐 200-250 g/L， 硼砂 0? 03-0. 2g/L， CaCl2 0.05-0.1 mg/L, 余量为水； 优选的，所述的铁盐母液的组方及配比为：Na2- EDTA1. 0- I. 5mg/L及FeCL3. 6H20 0. 25-2mg/L〇 采用如上所述的杜氏盐藻培养基进行盐藻培养方法，包括以下步骤： (1)先配制盐藻培养基，所述的培养基组方及配比为： NaN03 20-60mg/L， Na3P04 20-40mg/L, K2HP04 15-20mg/L， 铁盐母液 10_15ml/L， 7 H20-ZnS04 6_8mg/L， 4 H20-MnC12 4_6mg/L， 5 H20- CuS04 45-54ug/L， 海盐 200-250 g/L， 硼砂 0? 03-0. 2g/L， CaCl2 0.05-0.1 mg/L, 余量为水。 (2)将处于对数生长的盐藻藻种以2000-5000r/min离心5-10min，弃原培养液，置 于步骤（1)中配制好的培养基中，封口后置入智能光照培养箱中进行培养，测定盐藻细胞的 密度及0 -胡萝卜素的含量。 优选的，步骤（2)中测定盐藻细胞的密度方法为自培养日开始隔天做一次细胞计 数。 优选的，步骤（2)中所述的细胞计数的具体方法：取盐藻藻液l-5ml，加0. 1-0. 5ml 无水乙醇麻醉，滴入血球计数板上，在显微镜下镜检计数。 优选的，步骤（2)中所述的测定0-胡萝卜素的含量是从盐藻培养第5-7d时取样 测定。 优选的，步骤（2)中所述的e-胡萝卜素含量测定方法为：用取液枪吸取5-10ml 藻液置于加有NaOH的离心管中，以2000-5000r/min离心5-10min，弃上清液，加丙酮溶液， 超声混匀，提取色素，以2000-5000r/min再次离心5-10min，吸上清液于25ml容量瓶中，超 声混匀，提取色素，重复提取直至藻体白色，最后合并提取液加蒸馏水定容至50ml，采用光 栅分光光度计测450nm下吸光度。 优选的，所述的丙酮溶液浓度为70-80%，丙酮溶液的加入量为5-10ml。 优选的，根据盐藻的生长速率采用补充营养的方法，具体为：Na3P04补充量 为0.2-0.3511^/10 6个、1(2册04补充量为0.8-1.211^/10 6个、7 1120-211504补充量为 0? 06-0. lmg/L 4 H20-MnC12 补充量为 0? 02-0. 06m g/L。 优选的，步骤（2)中所述的培养条件为：白天培养温度为20-25 °C，夜间为 15-20°C，光照强度为3000-5000Lux，光照时间为8-12h/d。 步骤（1)中所述的处于对数生长的盐藻藻种由中国海洋大学提供。 本专利技术与现有技术相比，有益效果体现在： 1.现有技术及有关报道中仅报道盐酸生长最好的磷源为磷酸盐，最好氮源为硝酸盐， 而对微量元素等营养成分影响盐藻培养的研宄很少或不完善，锌、锰元素均为盐藻生长所 必需，本专利技术中的培养基将添加了一定浓度的这两种元素，有利于盐藻细胞的增殖，而且严 格控制这两种元素的浓度，使单个盐藻细胞中的0-胡萝卜素含量达到最高。研宄显示，缺 锰可影响盐藻蛋白质的形成，本专利技术还可明显提高盐藻蛋白质的合成量。 2.盐藻在培养期间，除了需要硝酸盐、磷酸盐及锌、锰营养成分外，对Zn、Fe等需 求量也较高，Zn是DNA聚合酶的酶，P是DNA和RNA合成必需的元素，Fe是细胞中呼吸链的 重要成分，本专利技术，将上述微量元素与盐藻培养所需要的其他成分按一定浓度优化配比，更 利于盐藻的培养及0_胡萝卜素的合成 3.现有技术中将盐藻培养基置于室内窗台上培养，光照强度为3000~90000LUX， 在此条件下培养时，由于室温及窗台上每日光照强度及光照时间差异过大，盐藻增殖及 0 _胡萝卜素的产量均不稳定。本专利技术将培养基置于智能光照培养箱中进行培养中，培养条 件稳定，更利于盐藻的增殖及胡萝卜素的合成。【具体实施方式】 下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明： 步骤（1)中所述的处于对数生长的盐藻藻种由中国海洋大学提供。 实施例1 一种杜氏盐藻培养基，所述的培养基的组方及配比为： NaN03 20mg/L， Na3P04 20mg/L, K2HP04 15mg/L， 铁盐母液 10ml/L， 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种杜氏盐藻培养基，其特征在于，所述的培养基的组方及配比为：

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郭狄，
申请(专利权)人：中山鼎晟生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44