同时检测XRCC1、ERCC1和GSTP1基因多态性的引物与方法技术

本发明专利技术提供同时检测XRCC1、ERCC1和GSTP1基因多态性的引物与方法，包括PCR扩增引物和SNaPshot PCR引物。本发明专利技术属于生物检测技术领域，本发明专利技术提供的引物可以实现XRCC1、ERCC1和GSTP1基因多态性的特异性检测，不会发生交叉反应，准确性好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物检测
，尤其设及一种同时检测XRCC1、ERCC1和GSTP1基 因多态性的引物与方法。
技术介绍
销类抗癌药物，包括顺销、卡销和奥沙利销等，是目前临床应用中对多种癌症具 有较高活性的抗癌药物，主要通过引起细胞内DNA损伤来清除癌细胞。X线修复交叉互补基团UXRCC1)，位于人类染色体19ql3. 2-13. 3,大小为33化。 切除修复交叉互补基因UERCC1)，为人类DNA损伤修复基因，位于染色体19ql3. 2-13. 3。谷 脱甘肤S转移酶Pl(GSTPl)，谷脱甘肤S转移酶（GST)是体内最重要的II相代谢酶，通过直 接结合化学致癌物或通过与谷脱甘肤结合而发挥解毒功能，可降解外源性化合物毒性。 现有研究数据显示，XRCC1_R399QR/R，R/Q和Q/Q基因型频率分别约为55%，37%， 8〇/〇 ;ERCC1_C118TC/C，C/T，T/T基因型频率分别约为 52. 6%，43. 1%，4. 2% ;GSTP1_1105V Ile/lle(I/I)，Ile/Val(I/V)，Val/Val(V/V)基因型频率分别为 57. 4%，35. 9%，6. 7〇/〇。 因此，通过XRCCl/ERCCl/GSTPl基因多态性的检测，有助于预测销类药物化疗的 预后，在帮助指导用药和个性化治疗方面具有重要意义。现有技术缺少一种特异性好、灵敏 度高、可实现多个位点同时检测的XRCCl/ERCCl/GSTPl基因多态性检测引物及其方法。
技术实现思路
为解决现有技术中存在的问题，本专利技术提供一种同时检测XRCCl/ERCCl/GSTPl基 因多态性的引物与方法，具有特异性好、灵敏度高、准确性好等优点，实现了XRCC1/ERCC1/ GSTP1基因多态性的同时检测。本专利技术同时检测的位点包括XRCC1_R399Q;c. 1196A〉G(P. Gln399Arg)(SNP；rs25487),ERCC1_C118T；c.354T>C(p.Asnll8=)(SNP；rsll615),GSTP1_ I105V;c.313A〉G(p.IlelOSVal)(SNP;rsl695)。 本专利技术提供一种同时检测XRCCl/ERCCl/GSTPl基因多态性的引物，包括PCR扩 增引物和SNaPshotPCR引物；所述PCR扩增引物包括：针对XRCC1_R399Q的上游引物 5，-TCTGACTCCCCTCCAGATT-3'（SEQIDNO. 1)和下游引物5'-GCCCCTCAGATCACACCTA-3'（SEQ IDNO. 2)，针对ERCC1_C118T的上游弓I物 5' -TCCAGAACACTGGGACATGA-3'（沈QID NO. 3)和下游引物 5'-TCCCTATTGATGGCTTCTGC-3'（SEQIDNO. 4)，针对GSTP1_ I105V的上游引物 5'-ACCCCAGGGCTCTATGGGAA-3'（SEQIDNO. 5)和下游引物 5'-TGAGGGCACAAGAAGCCCCT-3'（SEQIDNO. 6);所述SNaPshotPCR引物包括；针对XRCC1_ R399Q的SNaPshotPCR引物 5'-CGTCGGCGGCTGCCCTCCC-3'（SEQIDNO. 7)，针对ERCC1_ C118T的SNaPshotPCR引物 5，-TTTTTTTTAGGGGCAATCCCGTACTGAAGTTCGTGCGCAA-3,（沈QID NO. 8)，针对GSTP1_I105V的SNaPshotPCR引物 5'-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGCGTGGAGGACC TCCGCTGCAAATAC-3'（SEQIDNO. 9)。[000引采用上述技术方案，本专利技术提供的同时检测XRCCl/ERCCl/GSTPl基因多态性的引 物，可W实现XRCCl/ERCCl/GSTPl基因多态性的特异性检测，不会发生交叉反应，准确性 好。 优选地，所述？〇?扩增引物中，《贿(：1_1?3999、6贿(：1_(：1181'和651口1_1105￥的引物 浓度比为 1 ;1 ;1;所述SNaPshotPCR引物中，XRCC1_R399Q、ERCC1_C118T和GSTP1_I105V 的引物浓度比为1 ;1 ;1。 相应地，本专利技术还提供一种同时检测XRCC1/ERCC1/GSTP1基因多态性的方法，包 括如下步骤;A)提取DNA样品；B)采用权利要求1或2中所述的PCR扩增引物进行多重 PCR扩增，对扩增产物进行纯化；C)采用权利要求1或2中所述的SNaPshotPCR引物进行 SNaPshotPCR扩增，对扩增产物进行纯化；D)毛细管电泳技术进行检测，对检测结果进行分 析，确定SNP位点及其基因型。 优选地，所述步骤A)中的DNA样品为邸TA抗凝外周血的DNA样品。 优选地，所述步骤B)中的多重PCR扩增反应条件包括；阶段1 ;98°C 3min ;阶段2 : 981：1〇3;阶段3;581：3〇3;阶段4;721：1111111;阶段5;返回到阶段2,29个循环；阶段6; 72°C 5min;阶段7;25°C保温。即，St巧1:98。C for 3minutes;St巧2:98。C for 10 seconds ；Step 3；58° C for 30 seconds ；Step 4；72° C for 1 minute ；Step 5 ；Go to step 2, 29 times ；Step 6；72° C for 5 minutes ；Step 7；25° C forever。 所述步骤C)中的SNaPshot PCR扩增反应条件包括；阶段1 ;96°C 10s ;阶段2 : 55°C 5s ;阶段3 ;60°C 30s ;阶段4 ;返回到阶段1，25个循环；阶段5 ;4°C保温。目P，St巧 1；96° C forlOseconds ；Step 2；55° C for 5 seconds ；Step 3；60° C for SOseconds； Step 4 ；Go to step 1,25 times ；Step 5:4° C forever。 优选地，所述步骤D)中，采用GE肥MAP阳RIDV4. 1软件对检测结果进行分析。 此外，本专利技术还提供同时检测XRCC1/ERCC1/GSTP1基因多态性的引物在制备检测 XRCC1 /ERCC1 /GSTP1基因多态性试剂中的用途。 与现有技术相比，本专利技术的有益效果是；本专利技术提供了 一种同时检测XRCC1/ ERCC1/GSTP1基因多态性的引物，引物的特异性好，不会发生交叉反应，准确性好，实现了 XRCC1/ERCC1/GSTP1基因多态性的同时检测，提高了检测效率。此外，本专利技术还提供了一种 同时检测XRCC1/ERCC1/GSTP1基因多态性的SNaPshot法，通过使用特异性的PCR扩增引物 和SNaPshotPCR引物，具有特异性好、灵敏度高、准确性好等优点，可W为销类药物的临床 用药提供指导。【附图说明】 图1本专利技术提供的XRCC1/ERCC1基因引物的扩增片段。 图2本专利技术提供的GSTP1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时检测XRCC1、ERCC1和GSTP1基因多态性的引物，其特征在于：包括PCR扩增引物和SNaPshot PCR引物；所述PCR扩增引物包括：针对XRCC1_R399Q的上游引物5’‑TCTGACTCCCCTCCAGATT‑3’和下游引物5’‑GCCCCTCAGATCACACCTA‑3’，针对ERCC1_C118T的上游引物5’‑TCCAGAACACTGGGACATGA‑3’和下游引物5’‑TCCCTATTGATGGCTTCTGC‑3’，针对GSTP1_I105V的上游引物5’‑ACCCCAGGGCTCTATGGGAA‑3’和下游引物5’‑TGAGGGCACAAGAAGCCCCT‑3’；所述SNaPshot PCR引物包括：针对XRCC1_R399Q的SNaPshot PCR引物5’‑CGTCGGCGGCTGCCCTCCC‑3’，针对ERCC1_C118T的SNaPshot PCR引物5’‑TTTTTTTTAGGGGCAATCCCGTACTGAAGTTCGTGCGCAA‑3’，针对GSTP1_I105V的SNaPshot PCR引物5’‑TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGCGTGGAGGACCTCCGCTGCAAATAC‑3’。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵薇薇，胡昌明，燕启江，郭周萍，
申请(专利权)人：广州金域医学检验中心有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44