本发明专利技术公开一种再生蚕丝蛋白多肽，涉及生物技术多肽制备领域。其序列为PVAATDRFIGILQGSCDDAVQ。制备步骤包括（1）将蚕丝废料500g剪碎后，按照质量/体积=1:1-3加入碳酸氢钠溶液，混匀；（2）将含蚕丝废料的碳酸氢钠溶液在-70-80℃速冻；（3）采用冷冻高速组织匀浆器，将凝固混合物匀浆；（4）匀浆后，煮沸1-2小时；（5）趁热，过滤，取上清；（6）待上清冷却后，调pH值至pH6.5-6.9；（7）离心10000-15000rpm，30-60分钟，得到沉淀物；（8）将沉淀物复溶于pH4.5-5.0缓冲液中，采用固定化酶技术，分解得到分子量为2400-3600Da的多肽。所述的再生蚕丝蛋白多肽，在制备化妆品中的应用。本发明专利技术制备的再生蚕丝蛋白多肽，纯度大于60%。该多肽具有保湿和防晒的作用，作用与天然蚕丝蛋白相比，效果更好，且原料成本低。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物技术多肽制备领域，具体涉及再生蚕丝蛋白多肽制备领域。技术背景蚕丝是熟蚕结茧时所分泌丝液凝固而成的连续长纤维，也称天然丝，是一种天然纤维。人类利用最早的动物纤维之一。在蚕丝纤维的制造过程中产生一些废料，如真丝废丝、汰头、茧衣、絹纺下脚料等，这些材料由于强力较低，无法用于织作蚕丝广泛应用于纤维制造业，因而被丢弃，造成了浪费。为了合理利用这些废蚕丝，研宄人员对再生蚕丝蛋白的结构和性能进行了测试分析。结果发现，再生蚕丝蛋白，强度较天然蚕丝小，吸湿能力和抗紫外线性能高于天然蚕丝。再生蚕丝的这些性能改变对蚕丝纤维的制造是非常不利的。然而，随着蚕丝的应用领域的拓宽，蚕丝在化妆品领域的功效显得尤为突出。由于蚕丝蛋白质分子特殊的化学结构，具有天然调湿、改善人体皮肤营养、防止皮肤起皱、增强皮肤细胞活力和弹性、促进细胞新陈代谢及维持皮肤正常生理状态的作用。由于，化妆品与纤维制造的需求不同，化妆品需要更高的保湿效果，以及抗紫外线的作用，因此，再生蚕丝比天然蚕丝具有更好的吸湿能力和抗紫外线的特点，如果应用于化妆品领域，有起到更好的保湿和防晒的作用。当再生蚕丝蛋白应用于化妆品时，和天然蚕丝蛋白一样存在分子量较大的问题。较大的分子量的蛋白往往会引起过敏反应，导致皮肤瘙痒。小分子蛋白质或多肽就不容易诱发免疫变态反应。但是，小分子蛋白质往往会失去原形蛋白质的功效。因此，如何才能让分解后的蚕丝蛋白小分子既有原蛋白质的功效，且不引起过敏，一直是一个难以协调的问题。
技术实现思路
专利技术目的针对现有蚕丝蛋白化妆品的现状，专利技术一种再生蚕丝蛋白多肽及制备和应用，该多肽是利用再生蚕丝制备的多肽，将该多肽应用于化妆品，其与天然蚕丝蛋白相比，具有更好的保湿和防晒效果。同时，降低原料成本。技术方案本专利技术为一种再生蚕丝蛋白多肽，其序列为PVAATDRFIGILQGS⑶DAVQ。制备步骤包括(I)将蚕丝废料500g剪碎后，按照质量/体积=1:1-3加入碳酸氢钠溶液，混匀；(2)将含蚕丝废料的碳酸氢钠溶液在-70-80°C速冻；(3)采用冷冻高速组织匀浆器，将凝固混合物匀浆；⑷匀浆后，煮沸1-2小时；(5)趁热，过滤，取上清；(6)待上清冷却后，调pH值至ρΗ6.5-6.9 ； (7)离心10000-15000rpm, 30-60分钟，得到沉淀物；(8)将沉淀物复溶于PH4.5-5.0缓冲液中，采用固定化酶技术，分解得到分子量为2400-3600Da的多肽，即得。所述的蚕丝废料，其特征在于，可以是真丝废丝、汰头、茧衣、絹纺下脚料等。所述的固定化酶，其特征在于，可以是无花果蛋白酶、菠萝蛋白酶等。所述的再生蚕丝蛋白多肽，在制备化妆品中的应用。本专利技术多肽也可由上海生工合成，纯度98%。有益效果本专利技术的制备得到的再生蚕丝蛋白多肽，经蛋白质序列测定，序列为PVAATDRFIGILQGS⑶DAVQ，纯度大于60%。实验表明，该多肽具有保湿和防晒的作用，作用与天然蚕丝蛋白相比，效果更好。抗原实验结果表明，该多肽没有抗原性。同时，实现废物利用，降低原料成本。【具体实施方式】实施例1将清洗、烘干后的将真丝废丝500g剪碎后，加入500ml碳酸氢钠溶液，混匀；将含真丝废丝的碳酸氢钠溶液在-70-80°C速冻；采用冷冻高速组织匀浆器，将凝固混合物匀浆；匀浆后，煮沸I小时；趁热，过滤，取上清；待上清冷却后，调PH值至pH6.5-6.9 ;离心1000rpm,60分钟，得到沉淀物；将沉淀物复溶于pH4.5-5.0缓冲液中，采用固定化的菠萝蛋白酶，分解得到分子量为2400-3600Da的多肽，即得。采用固相蛋白质自动测序仪测定该多肽的序列为 PVAATDRFIGILQGSCDDAVQ，纯度为 72.9%。实施例2将清洗、烘干后的将茧衣500g剪碎后，加入100ml碳酸氢钠溶液，混匀；将含茧衣的碳酸氢钠溶液在-70-80°C速冻；采用冷冻高速组织匀浆器，将凝固混合物匀浆；匀浆后，煮沸2小时；趁热，过滤，取上清；待上清冷却后，调pH值至pH6.5-6.9 ;离心15000rpm，30分钟，得到沉淀物；将沉淀物复溶于PH4.5-5.0缓冲液中，采用固定化的无花果蛋白酶，分解得到分子量为2400-3600Da的多肽，即得。采用固相蛋白质自动测序仪测定该多肽的序列为 PVAATDRFIGILQGSCDDAVQ，纯度为 79.1 %。实施例3将实施例1制备的多肽添加入乳膏基质中，进行免疫原性检测。BALB/c白鼠6只，雌雄各半，将小鼠背部脱毛，裸露皮肤。分别取不同浓度的再生蚕丝蛋白多肽溶液(0.5，1.0,2.0mg/ml)以1.25 μ L/cm2涂敷密度短期I次涂敷，每H涂敷I次，连续8周，于1-12周眼眶静脉丛定点取血每周一次，12000rpm离心2min，分离血楽取上清液，_20°C低温保存备用。待室温溶解后，取0.1ml上清液间接ELISA检测血清中抗体滴度。以各样品实际A值(0D450)比阴性对照血清A值即得RA值，RA彡2.1即为阳性，将Blood b1-samples样品作一系列稀释后进行检测，呈阳性反应的最高稀释度即为该样品的滴度。测定结果显示。1-12周收集的血样，经ELISA间接法检测多肽诱导抗体均为阴性。由此可见，本专利技术得到的再生蚕丝蛋白多肽无免疫原性。实施例4将上海生工制备的多肽添加入乳膏基质中。分别取不同浓度的天然蚕丝蛋白2.0mg/ml、再生蚕丝蛋白2.0mg/ml、再生蚕丝蛋白多肽溶液(0.5，1.0，2.0mg/ml)以1.25 μ L/cm2涂敷密度短期I次涂敷，轻轻拍打至吸收，测定12小时后角质层水分含量。数据计算:皮肤水合度变化率)=/皮肤水合度(对照时)X 100%。将实验重复三次，2.0mg/ml天然蚕丝蛋白、2.0mg/ml再生蚕丝蛋白、0.5，1.0,2.0mg/ml再生蚕丝蛋白多肽溶液的皮肤水合度率分别提高了为42.15、38.13,45.22,51.22,60.28% 0同时，分别取不同浓度的天然蚕丝蛋白2.0mg/ml、再生蚕丝蛋白2.0mg/ml、再生蚕丝蛋白多肽溶液(0.5，1.0，2.0mg/ml)以1.25 μ L/cm2涂敷密度短期I次涂敷，轻轻拍打至吸收，测定12小时后使用前后表皮的水分经皮肤散失，将实验重复三次。初始对照的透皮失水值分别为 21.0g/(m2 *h)、21.7g/ (m2.h)、22.1g/(m2 *h)、22.7g/ (m2.h)和 20.6g/(m2.h)使用2.0mg/ml天然蚕丝蛋白、2.0mg/ml再生蚕丝蛋白、0.5，1.0，2.0mg/ml再生蚕丝蛋白多肽溶液至12h时，透皮失水分别达到16.8g/ (m2.h)、14.lg/ (m2.h)、13.2g/(m2.h)、12.7g/(m2.h)和 11.lg/(m2.h)，均有不同程度的降低。可见，再生蚕丝蛋白多肽溶液能显著性提高皮肤水合度率，有效地降低皮肤的透皮水分蒸发，具有保湿的作用，且与天然普通蚕丝蛋白和再生蚕丝蛋白相比，效果更好。实施例5将上海生工制备的多肽添加入乳膏基质中。选择受试者左、右手臂内侧距手掌基部10公分处为实验部位，左手臂内侧距手掌基部15公分处为对照空白部位。首先使用皮肤黑素和血红素测试仪测定实本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种再生蚕丝蛋白多肽，其特征在于，序列为PVAATDRFIGILQGSCDDAVQ。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：罗瑞雪，
申请(专利权)人：苏州普罗达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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