基于线虫趋避行为的草甘膦农药检测方法技术

基于线虫趋避行为的草甘膦农药检测方法，本发明专利技术涉及一种草甘膦农药的检测方法，它为了解决现有草甘膦鉴定方法存在的灵敏度低、操作复杂、成本高的问题。检测方法：琼脂置于锥形瓶中，用封口膜密封后进行灭菌处理，灭菌处理后置于培养皿中，凝固得到琼脂皿；二、在琼脂皿表面取4个观测点，分别加入待测农药，大肠杆菌菌液，纯水和Tretocephalus线虫L2期幼虫；三、当待测农药聚有大于30％的幼虫时，表明农药中含有草甘膦。本发明专利技术的检测方法对实验条件要求低，不需要特殊的高精分析仪器和检测设备，操作方便，检测灵敏度高。

【技术实现步骤摘要】
基于线虫趋避行为的草甘膦农药检测方法
本专利技术涉及一种草甘膦农药的检测方法。
技术介绍
农药的快速检测是在食品安全和环境保护背景下日益要求的技术。线虫能够较灵敏地感受周围环境变化，可在短时间内对环境变化产生指示作用。线虫由于易于保存和便于试验操作，作为一种典型模式生物在科研领域被广泛应用。线虫的幼虫分为4个时期，分别为L1、L2、L3和L4期，处于不同生长期的线虫，会对相应的环境胁迫具有特殊的耐受度和敏感度，出自2009年《IUBMBLife》YunbiaoWang等人的“UnderstandingthemechanismofthedormantdauerformationofC.elegans:fromgeneticstobiochemistry”。根据2011年第6期《杭州师范大学学报》名称为“草甘膦残留检测技术的研究进展”的记载，现有草甘膦常用检测方法包括高效液相色谱法、色谱‐质谱联用法、气相色谱法、化学分析法、子印迹‐化学发光分析法、免疫分析法等，但一般都需要复杂的分析仪器，操作过程复杂。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有草甘膦鉴定方法存在的灵敏度低、操作复杂、成本高的问题，而提供一种基于线虫趋避行为的草甘膦农药检测方法。本专利技术基于线虫趋避行为的草甘膦农药检测方法按下列步骤实现：一、称取2～3g琼脂于锥形瓶中，加入1000mL纯水中，用封口膜密封后放入高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌处理，冷却至40～50℃后在培养皿中加入灭菌处理后的琼脂液，在室温下冷却凝固得到琼脂皿；二、在步骤一得到的琼脂皿的圆周边缘间隔等距离取4个观测点，在第一观测点、第二观测点和第三观测点上分别滴入1μL待测农药，1μL大肠杆菌菌液和1μL纯水，在第四观测点上加入80～200只Tretocephalus线虫L2期幼虫；三、观测1.5～2.5小时后，当第一观测点上聚有大于30％的Tretocephalus线虫L2期幼虫时，表明待测农药中含有草甘膦。Tretocephalus线虫为一类食细菌土壤线虫，本专利技术发现Tretocephalus线虫L2期幼虫，在草甘膦刺激下无回避响应，反而有趋向性反应。因此，利用此类线虫鉴定对草甘膦进行定性判断。本专利技术具有快捷、直观、高效低价的特点，能够检测出浓度为0.005％的草甘膦。本专利技术的检测方法对实验条件要求低，不需要特殊的高精分析仪器和检测设备，实验操作方便，成本低廉，易于掌握。附图说明图1为实施例一中所述的琼脂皿的结构示意图。具体实施方式具体实施方式一：本实施方式基于线虫趋避行为的草甘膦农药检测方法按下列步骤实施：一、称取2～3g琼脂于锥形瓶中，加入1000mL纯水中，用封口膜密封后放入高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌处理，冷却至40～50℃后在培养皿中加入灭菌处理后的琼脂液，在室温下冷却凝固得到琼脂皿；二、在步骤一得到的琼脂皿的圆周边缘间隔等距离取4个观测点，在第一观测点、第二观测点和第三观测点上分别滴入1μL待测农药，1μL大肠杆菌菌液和1μL纯水，在第四观测点上加入80～200只Tretocephalus线虫L2期幼虫；三、观测1.5～2.5小时后，当第一观测点上聚有大于30％的Tretocephalus线虫L2期幼虫时，表明待测农药中含有草甘膦。本实施方式草甘膦农药检测方法对实验条件要求低，不需要特殊的高精分析仪器和检测设备，实验操作方便，灵敏度高。具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤一所述的灭菌处理是在120℃下灭菌20min。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是步骤一所述的培养皿的直径尺寸为6cm。其它步骤及参数与具体实施方式一或二相同。具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是步骤一冷却至40～50℃后在培养皿中加入18～24mL灭菌处理后的琼脂液。其它步骤及参数与具体实施方式一至三之一相同。具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式四不同的是步骤一冷却至40～50℃后在培养皿中加入20mL灭菌处理后的琼脂液。其它步骤及参数与具体实施方式四相同。具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至五之一不同的是步骤二所述的大肠杆菌菌液中大肠杆菌的浓度为1×109个/mL～2×109个/mL。其它步骤及参数与具体实施方式一至五之一相同。具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式一至六之一不同的是步骤二在第四观测点上加入80～120只Tretocephalus线虫L2期幼虫。其它步骤及参数与具体实施方式一至六之一相同。具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式七不同的是步骤二在第四观测点上加入100只Tretocephalus线虫L2期幼虫。其它步骤及参数与具体实施方式七相同。具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式一至八之一不同的是步骤三观测2小时后，当第一观测点上聚有大于30％的Tretocephalus线虫L2期幼虫时，表明待测农药中含有草甘膦。其它步骤及参数与具体实施方式一至八之一相同。实施例一：本实施例基于线虫趋避行为的草甘膦农药检测方法按下列步骤实现：一、称取3g琼脂于锥形瓶中，加入1000mL纯水中，用封口膜密封后放入高压蒸汽灭菌锅中在120℃下灭菌20min，冷却至50℃后在直径为6cm培养皿中加入20mL灭菌处理后的琼脂液，在室温下冷却凝固得到琼脂皿；二、在步骤一得到的琼脂皿的圆周边缘间隔等距离取4个观测点，在第一观测点A、第二观测点B和第三观测点C上分别滴入1μL待测农药，1μL浓度为2×109个/mL的大肠杆菌菌液和1μL纯水，在剩余的第四观测点O上加入100只Tretocephalus线虫L2期幼虫；三、观测2小时后，第一观测点A上聚有35％的Tretocephalus线虫L2期幼虫，表明待测农药中含有草甘膦。本实施例表明Tretocephalus线虫对草甘膦具有趋向性反应。本实施例4个观测点分别在6点钟、9点钟、12点钟和3点钟方向。本实施例基于线虫趋避行为的草甘膦农药检测方法的灵敏度高，能达到0.005％。实施例二：本实施例基于线虫趋避行为的草甘膦农药检测方法按下列步骤实现：一、称取3g琼脂于锥形瓶中，加入1000mL纯水中，用封口膜密封后放入高压蒸汽灭菌锅中在120℃下灭菌20min，冷却至50℃后在6cm培养皿中加入20mL灭菌处理后的琼脂液，在室温下冷却凝固得到琼脂皿；二、在步骤一得到的琼脂皿的圆周边缘间隔等距离取4个观测点，在第一观测点A、第二观测点B和第三观测点C上分别滴入1μL纯水，1μL浓度为2×109个/mL的大肠杆菌菌液和1μL纯水，在剩余的第四观测点O上加入100只Tretocephalus线虫L2期幼虫；三、观测2小时后，第二观测点B上聚有90％的Tretocephalus线虫L2期幼虫，聚于A点的线虫小于5％，表明在没有草甘膦农药的吸引下，Tretocephalus线虫只对作为食物的大肠杆菌具有趋向性反应。本文档来自技高网...

【技术保护点】
基于线虫趋避行为的草甘膦农药检测方法，其特征在于是按下列步骤实现：一、称取2～3g琼脂于锥形瓶中，加入1000mL纯水中，用封口膜密封后放入高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌处理，冷却至40～50℃后在培养皿中加入灭菌处理后的琼脂液，在室温下冷却凝固得到琼脂皿；二、在步骤一得到的琼脂皿的圆周边缘间隔等距离取4个观测点，在第一观测点、第二观测点和第三观测点上分别滴入1μL待测农药，1μL大肠杆菌菌液和1μL纯水，在第四观测点上加入80～200只Tretocephalus线虫L2期幼虫；三、观测1.5～2.5小时后，当第一观测点上聚有大于30％的Tretocephalus线虫L2期幼虫时，表明待测农药中含有草甘膦。

【技术特征摘要】
1.基于线虫趋避行为的草甘膦农药检测方法，其特征在于是按下列步骤实现：一、称取2～3g琼脂于锥形瓶中，加入1000mL纯水中，用封口膜密封后放入高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌处理，冷却至40～50℃后在培养皿中加入灭菌处理后的琼脂液，在室温下冷却凝固得到琼脂皿；二、在步骤一得到的琼脂皿的圆周边缘间隔等距离取4个观测点，在第一观测点、第二观测点和第三观测点上分别滴入1μL待测农药，1μL大肠杆菌菌液和1μL纯水，在第四观测点上加入80～200只Teratocephalus线虫L2期幼虫；三、观测1.5～2.5小时后，当第一观测点上聚有大于30％的Teratocephalus线虫L2期幼虫时，表明待测农药中含有草甘膦。2.根据权利要求1所述的基于线虫趋避行为的草甘膦农药检测方法，其特征在于步骤一所述的灭菌处理是在120℃下灭菌20min。3.根据权利要求1所述的基于线虫趋避行为的草甘膦农药检测方法，其特征在于步骤一培养皿的直径尺寸为6cm。4.根据权利要求1所述的基于线虫趋避行为的草甘...

【专利技术属性】
技术研发人员：王云彪，阿娜莎，陈展彦，武海涛，
申请(专利权)人：中国科学院东北地理与农业生态研究所，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23