本发明专利技术提供用于检测生物样本中BMP3和NDRG4甲基化水平的引物和探针。本发明专利技术还提供一种使用本发明专利技术的引物和探针检测生物样本中BMP3和NDRG4甲基化水平的方法及试剂盒。本发明专利技术提供的引物和探针具有高灵敏度和特异性，该检测方法可提供用于结直肠肿瘤早期诊断的信息，为结直肠肿瘤早发现提供了一个简便易行的解决方案。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术及诊断研宄领域，涉及一种用于检测生物样本中BMP3和 NDRG4甲基化水平的引物和探针，及利用该引物和探针检测样品中BMP3和NDRG4甲基化水 平，以提供用于结直肠肿瘤早期诊断的信息。
技术介绍
结直肠癌也被称为大肠癌，发生在结肠（大肠）或直肠中，通常发展缓慢，是中国 城镇第二高发癌症，40岁以上无症状人群中6%患有早期肠癌。随着食品结构和生活习惯 的改变，以及环境问题的日益突出，导致大肠癌发生率快速增长，据《中国肿瘤登记年报》报 道显示，肠癌是目前中国城市发病率仅次于肺癌的第二大癌症，主要包括结肠癌与直肠癌 两大类。目前我国每年新增结直肠癌确诊病例44万例，每年死亡患者多达23万人。国家 癌症早诊早治项目专家委员会2013年研宄报告指出，中国40岁以上高危人群患进展期腺 瘤和早期肠癌比率为6 %。这些癌变病灶不及时切除，90 %的情况下将会转化为恶性肠癌。 由于大部分患者在早期并未发现重视并得到及时治疗，肠癌死亡率居高不下。如果将肠癌 早期筛查技术在中国进行普及推广，预计结直肠癌死亡率可从现有水平降低50 %以上。 筛查是在未出现疾病症状的人群中寻找并确诊患者。目前筛查主要有以下几类： (1)常规血检类，特异性敏感性不强，对身体有创伤性；（2)影像学类，如肠镜检查，软式乙 状结肠镜，CT结肠成像（虚拟肠镜检查），双对比钡灌肠（DCBE)等，此类方法需要检查 前药物清肠、麻醉等处理，对身体创伤性比较严重；（3)粪便潜血检测类，如粪便隐血试验 (FOBT)，粪便免疫化学试验（FIT)等，方便无创但特异性敏感性不强。同时，以上方法均需 要到医院实施，处理周期长，或者费用较高。
技术实现思路
本专利技术针对上述缺点，提供了一种用于检测生物样本中BMP3和NDRG4甲基化水平 的引物和探针，通过取病人的生物样本，采用荧光实时PCR反应技术，达到快速敏捷地检测 出BMP3和NDRG4甲基化水平，以达到高灵敏和特异性提供用于结直肠肿瘤早期诊断的信 息，为结直肠肿瘤早发现提供一个简便易行的解决方案的目的。 为实现上述目的，本专利技术采取下述技术方案来实现： 本专利技术人体生物样本包括组织、细胞、血液、分泌物和排泄物；其中排泄物为粪便。 采用本专利技术的引物和探针可检测上述各种生物样本，基于无侵入性和低廉方便考虑，优选 粪便样本。 用于检测生物样本中BMP3和NDRG4甲基化水平的引物，包括正向引物，一条选自 (A)组的正向引物和一条选自⑶组的正向引物； (A)BMP3 正向引物 GTTTAATTTTCGGTTTCGTCGTC (SEQ ID NO ：1) AATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO ：2) AATATTCGGGTTATATACGTCGCGA(SEQ ID NO ：3) AATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO ：4) TTGAAAATATTTGGGTTATATATGTTGT(SEQ ID NO ：5) GAGTGGAGACGGCGTTCGTA(SEQ ID NO ：6) TGGAGTGGAGATGGTGTTTGT(SEQ ID NO ：7) TTAGGTTGCGTTGGGTTAGCG(SEQ ID NO ：8) TTGTTAGGTTGTGTTGGGTTAGTG(SEQ ID NO ：9) GGTGAGGTTCGCGTAGTTGTTG(SEQ ID NO ：10) GTGAGGTTTGTGTAGTTGTTGGG(SEQ ID NO ：11) AATATTCGGGTTTATACGTCGC(SEQ ID NO ：12) AATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO ：13) GAGTGGAGACGGCGTTCGTA(SEQ ID NO :14) AATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO ：15) AATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO ：16) AATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO ：17) AATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO ：18) TATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO： 19) TTTGAAAATATTCGGGTTATATACGTYGY(SEQ ID NO ：20) TTTGAAAATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO ：21) TTTGAAAATATTTGGGTTATATACGTTGC(SEQ ID NO ：22) TTTGAAAATATTCGGGTTATATACGTTGC(SEQ ID NO ：23) TTTGAAAATATTTGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO ：24) TTTGAAAATATTYGGGTTATATACGTYGC(SEQ ID NO ：25) AATATTCGGGTTATATACGTCGCGATT(SEQ ID NO ：26) AGGAGGGAAGGTATAGATAGATTTTGAA(SEQ ID NO ：27) GAGTGGAGACGGCGTTCGTA(SEQ ID NO ：28) GGAGTGGAGACGGCGTTC(SEQ ID NO ：29) GAGTGGAGACGGCGTTC(SEQ ID NO ：30) GGCGTTCGTAGCGTTTTGC(SEQ ID NO ：31) GCGTTCGTAGCGTTTTGC(SEQ ID NO ：32) TTTGGAGTTTAATTTTCGGTTTC(SEQ ID NO ：33) AGTGGGGTTGGTCGTTATTTC(SEQ ID NO ：34) TTGAAAATATTTGGGTTATATATGTTGT(SEQ ID NO ：35) TGGAGTGGAGATGGTGTTTGT(SEQ ID NO ：36) TTGTTAGGTTGTGTTGGGTTAGTG(SEQ ID NO ：37) GTGAGGTTTGTGTAGTTGTTGGG(SEQ ID NO ：38) (B)NDRG4 正向引物 CGGTTTTCGTTCGTTTTTTCG(SEQ ID NO ：39) CGAAACTTCAACGCCGCCGAC(SEQ ID NO ：40) GTACGTGGAGGGGTTTTTGGTTG(SEQ ID NO ：41) CGCGCAAACAAAAAACGAAACTTCGA (SEQ ID NO ：42) GAGTGGGTGAGAAGTCGGTGGGG(SEQ ID NO ：43) GGCGGAGTGGGTGAGAAGTCG(SEQ ID NO ：44) GGGTTTTTGGTTGTTCGTATTTGTATT(SEQ ID NO ：45) CGGTTTTCGTTTTTGTAGTCGCGGGT(SEQ ID NO ：46) GCGGAGGGGTTTTTGGTTGTTCG(SEQ ID NO ：47) GCGGGTGAGAAGTCGGC(SEQ ID NO ：48) CGGAGCGGGTGAGAAGTC(SEQ ID NO ：49) CGGTTTTCGT本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于检测生物样本中BMP3和NDRG4甲基化水平的引物，其特征在于，包括正向引物，一条选自(A)组的正向引物和一条选自(B)组的正向引物；(A)BMP3正向引物GTTTAATTTTCGGTTTCGTCGTC(SEQ ID NO：1)AATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO：2)AATATTCGGGTTATATACGTCGCGA(SEQ ID NO：3)AATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO：4)TTGAAAATATTTGGGTTATATATGTTGT(SEQ ID NO：5)GAGTGGAGACGGCGTTCGTA(SEQ ID NO：6)TGGAGTGGAGATGGTGTTTGT(SEQ ID NO：7)TTAGGTTGCGTTGGGTTAGCG(SEQ ID NO：8)TTGTTAGGTTGTGTTGGGTTAGTG(SEQ ID NO：9)GGTGAGGTTCGCGTAGTTGTTG(SEQ ID NO：10)GTGAGGTTTGTGTAGTTGTTGGG(SEQ ID NO：11)AATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO：12)AATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO：13)GAGTGGAGACGGCGTTCGTA(SEQ ID NO：14)AATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO：15)AATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO：16)AATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO：17)AATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO：18)TATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO：19)TTTGAAAATATTCGGGTTATATACGTYGY(SEQ ID NO：20)TTTGAAAATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO：21)TTTGAAAATATTTGGGTTATATACGTTGC(SEQ ID NO：22)TTTGAAAATATTCGGGTTATATACGTTGC(SEQ ID NO：23)TTTGAAAATATTTGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO：24)TTTGAAAATATTYGGGTTATATACGTYGC(SEQ ID NO：25)AATATTCGGGTTATATACGTCGCGATT(SEQ ID NO：26)AGGAGGGAAGGTATAGATAGATTTTGAA(SEQ ID NO：27)GAGTGGAGACGGCGTTCGTA(SEQ ID NO：28)GGAGTGGAGACGGCGTTC(SEQ ID NO：29)GAGTGGAGACGGCGTTC(SEQ ID NO：30)GGCGTTCGTAGCGTTTTGC(SEQ ID NO：31)GCGTTCGTAGCGTTTTGC(SEQ ID NO：32)TTTGGAGTTTAATTTTCGGTTTC(SEQ ID NO：33)AGTGGGGTTGGTCGTTATTTC(SEQ ID NO：34)TTGAAAATATTTGGGTTATATATGTTGT(SEQ ID NO：35)TGGAGTGGAGATGGTGTTTGT(SEQ ID NO：36)TTGTTAGGTTGTGTTGGGTTAGTG(SEQ ID NO：37)GTGAGGTTTGTGTAGTTGTTGGG(SEQ ID NO：38)(B)NDRG4正向引物CGGTTTTCGTTCGTTTTTTCG(SEQ ID NO：39)CGAAACTTCAACGCCGCCGAC(SEQ ID NO：40)GTACGTGGAGGGGTTTTTGGTTG(SEQ ID NO：41)CGCGCAAACAAAAAACGAAACTTCGA(SEQ ID NO：42)GAGTGGGTGAGAAGTCGGTGGGG(SEQ ID NO：43)GGCGGAGTGGGTGAGAAGTCG(SEQ ID NO：44)GGGTTTTTGGTTGTTCGTATTTGTATT(SEQ ID NO：45)CGGTTTTCGTTTTTGTAGTCGCGGGT(SEQ ID NO：46)GCGGAGGGGTTTTTGGTTGTTCG(SEQ ID NO：47)GCGGGTGAGAAGTCGGC(SEQ ID NO：48)CGGAGCGGGTGAGAAGTC(SEQ ID NO：49)CGGTTTTCGTTCGTTTTTTCGT(SEQ ID NO：50)CGGTTTTCGTTCGTTTTTTCG(SEQ ID NO：51)ATYGATYGGGGTGTTTTTTAG...
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：吕宁，陈一友，杨蛟，
申请(专利权)人：浙江诺辉生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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