本发明专利技术总体上涉及借助分泌可减少白细胞外渗的因子的细胞来减少炎症。具体地，本发明专利技术涉及使用分泌因子的细胞的方法，所述因子可下调在血管内皮细胞中细胞粘附分子的表达。下调细胞粘附分子的表达可减少白细胞对内皮细胞的粘附从而减少外渗。结果是减少了炎症。所述细胞是具有多能特性的非胚胎、非生殖细胞。这些可包括多能标记物的表达和广泛的分化潜能。
【技术实现步骤摘要】
【专利说明】 本申请为分案申请，其原申请的申请日为2010年7月21日，申请号为 201080041878.X，名称为"干细胞用于减少白细胞外渗的用途"。
本专利技术总得来说涉及借助分泌可减少白细胞外渗的因子的细胞减少炎症的方法。 具体地，本专利技术涉及使用分泌因子的细胞的方法，所述因子可下调细胞粘附分子在血管内 皮细胞中的表达。下调细胞粘附分子的表达可减少白细胞黏着内皮细胞，从而减少外渗。结 果是减少了炎症。因此，本专利技术提供用于治疗与不想要的炎症组分相关的病理学疾病（包 括心血管疾病）的方法。本专利技术还涉及筛选调节细胞下调内皮细胞中细胞粘附分子表达的 能力的试剂的药物发现方法。本专利技术还涉及细胞库，其可被用于提供用于给予受试者的细 胞，所述库包含在下调内皮细胞中的细胞粘附分子的表达和减少白细胞黏附和外渗方面具 有所需能力的细胞。本专利技术还涉及包含具有特定所需能力的细胞的组合物。本专利技术还涉及 在给予所述细胞之前进行的诊断方法，包括评估待给予的细胞的所需能力的测定。本专利技术 还涉及治疗后诊断测定以评估所述细胞对被治疗的受试者的作用。本专利技术还涉及药物组合 物中具有需要能力的细胞。所述细胞是具有多能特性的非胚胎非生殖细胞。所述多能特性 可包括多能标记物的表达和广泛分化潜能。
技术介绍
急性炎症的过程由受伤组织局部的血管起始，所述血管改变以允许血浆蛋白质和 白细胞渗入周围组织中。进入所述组织的流体流增加可导致与炎症相关的特征性肿胀。血 管经受显著血管变化，包括血管舒张、渗透性增大和血流变缓，其由各种炎症介体的作用诱 导。增加的血管渗透性可导致血浆进入所述组织，引起由于血液中的细胞浓度增加而产生 的淤滞。淤滞使得白细胞沿着内皮边缘化，这是它们募集进入所述组织的关键步骤。正常 血流可以防止上述过程的发生，因为沿着血管周边的剪切力将细胞移动到血管中部。因此， 所述变化使得白细胞通过构成血管的内皮和基底膜外渗。一旦进入所述组织，所述细胞就 沿着趋化梯度移动到达损伤部位，在这里它们能够尝试除去刺激物并且修复所述组织。 白细胞从血液通过血管移动至组织被称为外渗，并且可被分为多个大步骤： (1)白细胞局部化并且募集至炎症局部的内皮一一包括边缘化和黏附至内皮细 胞：白细胞的募集是受体介导的。炎症的产物，例如组胺，可促进P-选择蛋白在内皮细胞上 立即表达。该受体微弱地结合至白细胞表面的碳水化合物配体，使得它们随着键的形成和 断裂沿着内皮表面"滚动"。来自受损细胞的细胞因子可诱导E-选择蛋白在内皮细胞上表 达，其与P-选择蛋白的功能类似。细胞因子也可诱导整联蛋白配体在内皮细胞上表达，这 进一步使得白细胞慢下来。这些微弱结合的白细胞如果没有被受损组织产生的趋化因子激 活就能自由分离。活化可增加结合的整联蛋白受体对内皮细胞表面的配体的亲和性，将白 细胞牢固地结合至内皮。 (2)通过血细胞渗出过程穿内皮的迀移，被称作变移：趋化因子梯度可刺激附着 的白细胞在内皮细胞之间移动并且穿过基底膜进入组织。 (3)白细胞通过趋化作用在组织中移动：达到组织间质的白细胞通过表达的整联 蛋白和CD44结合至细胞外基质蛋白质以防止它们从位点上脱落。趋化物使得白细胞沿着 趋化梯度朝向炎症源移动。白细胞外渗是白细胞从循环系统移出，朝向组织损伤或感染的部位的移动。该过 程形成先天免疫应答的一部分，包括募集非特异性白细胞。单核细胞还可在不存在感染和 组织损伤的情况下，在它们发育为巨噬细胞的过程中使用该过程。 白细胞外渗主要出现在毛细血管后微静脉，其中血流动力学剪切力被最小化。可 将该过程理解为多个步骤，下文概括为"趋化作用""滚动黏着""紧密黏附"和"（内皮）变 移"。已经证明每当这些步骤中的任一步骤被抑制时，白细胞募集即停止。 趋化作用 识别病原体并被病原体活化后，感染组织中的定居巨噬细胞释放细胞因子，例如 IL-l、TNF-a和趋化因子。IL-1和TNF-a可引起感染部位附近的血管内皮细胞表达细胞 粘附分子，包括选择蛋白。循环白细胞由于趋化因子的存在而朝向损伤或感染部位集中。 滚动黏着 像尼龙搭链一样，循环白细胞上的碳水化合物配体通过边缘亲和力与血管内壁的 选择蛋白分子结合。这使得白细胞慢下来并且开始沿着血管壁内表面滚动。在这种滚动中， 在选择蛋白和它们的配体之间发生短暂的键形成和断裂。 紧密黏着 同时，由巨噬细胞释放的趋化因子可激活滚动的白细胞并且使得表面整联蛋白分 子从默认的低亲和力状态转换为高亲和性状态。这是通过整联蛋白的近分泌活化促进的， 其中所述整联蛋白的近分泌活化通过内皮细胞释放的趋化因子和可溶因子实现。整联蛋白 在活化状态与内皮细胞上表达的互补受体以高亲和性紧密结合。这使得白细胞固定不动， 尽管有流动的血流的剪切力。 夺務 白细胞的细胞骨架以如下方式重组，即白细胞铺展在内皮细胞上。白细胞以这种 形式伸出伪足并且通过内皮细胞间的空隙。白细胞变移随着出现在白细胞和内皮细胞表面 上的PECAM蛋白与所述细胞相互作用并且有效地将所述细胞拉动通过内皮而出现。白细胞 可分泌降解基底膜的蛋白酶，使得它们能够逸出血管一一该过程被称为血细胞渗出。一旦 白细胞处于间隙液中，即沿着趋化梯度朝向损伤或感染的部位移动。 嗜中性粒细胞在炎症部位积聚是由特定类的细胞粘附分子介导的，所述细胞粘附 分子包括白细胞上的CD18整联蛋白和选择蛋白（内皮上的P-和E-选择蛋白，以及白细胞 上的L-选择蛋白）。这一点得到了对患有白细胞黏附缺陷综合征患者进行的研宄的支持， 所述患者的白细胞在CD18或选择蛋白碳水化合物配体表达方面有遗传缺陷（例如，II型 白细胞黏附缺陷）。 诜择蛋白 选择蛋白在内皮细胞（通过组织巨噬细胞）的细胞因子活化后很快表达。活化的 内皮细胞最初表达P-选择蛋白分子，但是到活化后2小时内，倾向于表达E-选择蛋白。内 皮选择蛋白与白细胞跨膜糖蛋白（包括唾液酸化路易斯血型抗原X)上的碳水化合物结合。 P-诜择蛋白:P-选择蛋白在活化的内皮细胞和血小板上表达。P-选择蛋白的合成 可由凝血酶、白细胞三烯B4、补体片段C5a、组胺、TNF-a或LPS诱导。这些细胞因子诱导 内皮细胞中的怀布尔-帕拉德体的外化，将预先形成的P-选择蛋白呈递于内皮细胞表面。 P-选择蛋白可作为配体结合PSGL-1。 E-选择蛋白：内皮白细胞黏附因子-1由细胞因子刺激的内皮细胞表达。认为它 通过介导细胞黏附至血管内壁而负责血液白细胞在炎症部位积聚。它表现出与LUAM1的 结构特征一致的结构特征，包括存在凝集素-或EGF-样结构域，之后有含6个保守半胱 氨酸残基的短共有重复序列（SCR)结构域。这些蛋白质是细胞粘附分子的选择蛋白家族 的一部分（'^七8〇116七&1.，-了.￡叉？.]^(1.172:263-272(1990) ;(：〇111118 6七&1.，_了.81〇1. Chem. 266:2466-2473 (1991))。在P-选择蛋白合成后不久E-选择蛋白合成，其由例如IL-1 和TNF-a的细胞因子诱导。E-选择蛋白可结合PSGL-1和ESL-1。 L-诜择蛋白:L-诜择蛋白在一心白细朐h组成塑表汰，并目P,知其作为配体与 GIyCAM-l、MadCAM-l和本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种构建细胞库的方法，所述方法包括扩增并储存细胞(I)用于将来给予受试者，所述细胞(I)具有以下一种或多种所需效能：(1)减少白细胞外渗，(2)减少白细胞至血管内皮或者分离的内皮细胞的粘附，(3)减少细胞因子介导的内皮细胞的活化，(4)减少一种或多种细胞粘附分子在内皮细胞上的表达，所述细胞(I)是表达oct4、端粒酶、rex‑1或rox‑1中的一种或多种并且/或者能够分化为内胚层、外胚层和中胚层胚层中至少两种的细胞类型的非胚胎、非生殖细胞。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·M·沃达，W·范特霍夫，
申请(专利权)人：ABT控股公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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