一种从人尿中提取促性腺激素的方法技术

技术编号:12174620 阅读:226 留言:0更新日期:2015-10-08 11:59
本发明专利技术公开了一种从人尿中提取促性腺激素的方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤1.调节pH值析出杂质;步骤2.过滤除杂、超滤浓缩;步骤3.离子交换柱层析;步骤4.沉淀除杂;步骤5.沉淀与干燥,即可得到促性腺激素粗品。本发明专利技术所述的从人尿中提取促性腺激素的方法,具有工艺技术简单,产品收率高,生产成本低、产品纯度好,效价高等优点,为后续提取高纯度产品的生产省去了许多步骤。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种化学药物提取工艺,尤其是。
技术介绍
促性腺激素(gonadoti^pins)是调节脊椎动物性腺发育,促进性激素生成和分泌的糖蛋白激素。如垂体前叶分泌的尿促性素(HMG)、人胎盘分泌的绒毛膜促性腺激素(HCG,简称绒促性素)、促黄体生长素(LH)等,都被广泛应用于不孕不育的治疗,它们都有相似的结构,分别由α、β两条肽链组成,其中α链的序列是完全一致的。不同蛋白间的差别在β链的序列上,还反映在不同的空间结构和对不同细胞表面受体的结合上。尿促性素(HMG)是由绝经期妇女尿液中提取得到的一类生殖激素,主要含有尿促卵泡素(FSH, Follicle-Stimulating Hormone)和促黄体生成素(LH, LuterinizingHormone)组成。尿促卵泡素是由垂体前叶嗜碱性细胞合成、分泌的一类糖蛋白,由α、β两个亚基组成,α有85个氨基酸,β有115个氨基酸,特异性由β亚基组成,分子量约33000。尿促卵泡素的主要生理功能是促进卵泡的各种细胞生长、发育,以利卵母细胞的成熟。尿促卵泡素的作用包括:促进卵泡周围间质细胞分化为内、外两层泡膜细胞并合成促黄体生成素受体;促进卵泡颗粒细胞增生和颗粒细胞内的芳香化酶系统活化,使雄激素转化为雌激素;促进卵泡液分泌,使卵泡细胞逐渐增大。尿促卵泡素主要针对排卵障碍引起的不孕症,并广泛应用于人工授精、试管婴儿等辅助生育技术中。促黄体生长素(LH)对女性能促进卵巢黄体生成,分泌孕激素,对男性有刺激睾丸中的间质细胞的功能,分泌雄激素。绒促性素(Human Chor1nic Gonadotrophin, HCG)是从怀孕妇女尿液中提取的精制糖蛋白促性腺激素,是人类受孕后胎盘合体滋养层细胞分泌的一种糖蛋白激素。在妊娠早期hCG的浓度迅速增高,检测尿中的hCG即可证实妊娠。临床上用于不孕症、黄体功能不足、功能性子宫出血、隐睾症、男性性腺功能减退症、先兆流产或习惯性流产等。目前,尿促卵泡素和绒促性素的提取工艺比较复杂,生产周期长,产品收率不高,导致生产成本大大增加,无法满足市场需求。殷小崴等在公开号为CN101555278A的中国专利技术专利中公开了《一种尿促卵泡素的提取方法》;赵贵吉等在公开号为CN102311494A的中国专利技术专利申请中也公开了《一种提取人绒毛膜促性腺素的方法》;该两件专利申请公开的提取工艺,与现有技术相比,具有工艺技术简单、产品收率高等优点,但是也存在着产品杂质含量高、纯度低、效价低等缺点,造成了后续精制过程步骤繁琐。
技术实现思路
针对上述问题,本专利技术的目的在于提供一种可显著地简化工艺、缩短生产时间、降低耗能、提高产品活性、收率、纯度、效价高的。为达到上述目的,本专利技术所提出的技术方案为:,其特征在于,包括如下步骤: 步骤I调节pH值析出杂质:用碱调节原料液的pH值至8.0?9.0 ; 步骤2过滤除杂、超滤浓缩:调节pH值后,向原料液中加入硅藻土或高岭土进行过滤,然后将滤液通过截留分子量为8000-15000的超滤膜进行浓缩,得超滤浓缩液; 步骤3离子交换柱层析:超滤浓缩液上CM Sepharose Fast Flow离子交换柱,先以pH4.0-5.0的NaAc进行洗涤,后以含0.3M NaCl的溶液进行洗脱,收集洗脱液; 步骤4沉淀除杂:在搅拌下,先向洗脱液中加入10%乙酸铵,以及有机溶剂使有机溶剂浓度达到50-60%,离心,收集清液; 步骤5沉淀与干燥:向清液中加入有机溶剂,使有机溶剂浓度达到80-85%,搅拌均匀后静置沉淀5-8小时,离心收集沉淀物,有机溶剂洗涤2-3遍,脱水干燥后即可得到促性腺激素粗品。进一步,所述的促性腺激素为尿促性素,所述的原料液为绝经期妇女尿液。进一步,所述的促性腺激素为绒毛膜促性腺激素,所述的原料液为妊娠期妇女尿液。优选的,所述的有机溶剂为乙醇或丙酮。优选的,步骤2所述的超滤膜的截留分子量为10000。采用上述技术方案,本专利技术所述的从人尿中提取促性腺激素的方法,具有工艺技术简单,广品收率闻,生广成本低、广品纯度好,效价闻等优点,为后续提取闻纯度广品的生产省去了许多步骤。【具体实施方式】下面结合具体实施例,对本专利技术做进一步说明。实施例1,尿促性素的提取,包括如下步骤: (1)通过采集绝经期妇女尿液1000L,经检验合格后的尿液投入罐内,用碱调节尿液的pH值至8.0?9.0 ; (2)调节pH值完毕后,向尿液中加入1kg硅藻土,搅拌均匀,用板框进行过滤; (3)将过滤好的溶液打入超滤罐,通过分子孔径为10000的超滤膜过滤,浓缩液1L打入沉淀te ; (4)往离子交换层析柱中预装CMSepharose Fast Flow填料后,以2倍柱体积pH 4.5NaAc缓冲液A平衡,将浓缩液上柱后,再以2倍柱体积缓冲液A洗涤,然后用2倍柱体积含0.3M NaCl的缓冲液B洗脱,收集洗脱液; (5)在搅拌下,向洗脱液中加入乙醇使浓度达到55%,离心,收集清液; (6)向清液中加入乙醇,使浓度达到80%,搅拌均匀后静置沉淀5小时,沉淀物用无水乙醇洗涤3遍,脱水干燥后得到尿促性素产品0.65g克。使用雌性幼大白鼠卵巢增重法进行生物测定,上述方法生产的尿促性素中,尿促卵泡素生物活性为62.4国际单位/毫克,促黄体生成素为71.5国际单位/毫克。实施例2,绒毛膜促性腺激素的提取,包括如下步骤: (O使用妊娠期妇女尿液原料1000L,将经检验合格后的尿液泵入罐内,用碱调节尿液的pH值至8.0?9.0 ; (2)调节pH值完毕后,向尿液中加入1kg硅藻土或高岭土,搅拌30分钟至均匀,用板框进行过滤; (3)将过滤好的溶液泵入超滤罐,通过截留分子量为10000的超滤膜过滤,得到的超滤浓缩液1L打入沉淀罐; (4)往离子交换层析柱中预装SepharoseFast Flow填料后,以2倍柱体积pH 4.5NaAc缓冲液A平衡,将浓缩液上柱后,再以2倍柱体积缓冲液A洗涤,然后用2倍柱体积含0.3M NaCl的缓冲液B洗脱,收集洗脱液; (5)在搅拌下,先向洗脱液中加入10%乙酸铵,以及有机溶剂使有机溶剂浓度达到60%,离心,收集清液; (6)向清液中加入有机溶剂,使有机溶剂浓度达到85%,搅拌均匀后静置沉淀5小时,离心收集沉淀物,有机溶剂洗涤2-3遍,脱水干燥后即可得到绒毛膜促性腺激素4.3克。使用雌性幼大白鼠卵巢增重法进行生物测定,上述方法生产的绒毛膜促性腺激素生物活性为2158国际单位/毫克。尽管结合优选实施方案具体展示和介绍了本专利技术,但所属领域的技术人员应该明白,在不脱离所附权利要求书所限定的本专利技术的精神和范围内,在形式上和细节上对本专利技术做出各种变化,均为本专利技术的保护范围。【主权项】1.,其特征在于,包括如下步骤: 步骤I调节pH值析出杂质:用碱调节原料液的pH值至8.0?9.0 ; 步骤2过滤除杂、超滤浓缩:调节pH值后,向原料液中加入硅藻土或高岭土进行过滤,然后将滤液通过截留分子量为8000-15000的超滤膜进行浓缩,得超滤浓缩液; 步骤3离子交换柱层析:超滤浓缩液上CM Sepharose Fast Flow离子交换柱,先以pH4.0-5.0的NaAc进行洗涤,后以含0.3M本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种从人尿中提取促性腺激素的方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤1调节pH值析出杂质:用碱调节原料液的pH值至8.0~9.0;步骤2过滤除杂、超滤浓缩:调节pH值后,向原料液中加入硅藻土或高岭土进行过滤,然后将滤液通过截留分子量为8000‑15000的超滤膜进行浓缩,得超滤浓缩液;步骤3离子交换柱层析:超滤浓缩液上CM Sepharose Fast Flow离子交换柱,先以pH 4.0‑5.0的NaAc进行洗涤,后以含0.3M NaCl的溶液进行洗脱,收集洗脱液;步骤4沉淀除杂:在搅拌下,先向洗脱液中加入10%乙酸铵,以及有机溶剂使有机溶剂浓度达到50‑60%,离心,收集清液;步骤5沉淀与干燥:向清液中加入有机溶剂,使有机溶剂浓度达到80‑85%,搅拌均匀后静置沉淀5‑8小时,离心收集沉淀物,有机溶剂洗涤2‑3遍,脱水干燥后即可得到促性腺激素粗品。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:张样柏
申请(专利权)人:厦门欧瑞捷生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:福建;35

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