本发明专利技术公开了一种基于WDR5基因用于结直肠癌辅助诊断的试剂盒，包括试剂A和/或试剂B；试剂A是用于检测WDR5基因表达水平的引物对；试剂B是用于检测WDR5蛋白含量的试剂，优选抗WDR5蛋白的抗体。本发明专利技术通过对结直肠正常组织和癌组织中的WDR5基因mRNA及编码蛋白的表达水平进行检测，发现WDR5在癌组织中显著高表达。在肠癌细胞中过表达WDR5能检测到，癌细胞表现出更强的迁移能力。基于以上发现开发得到一种用于结直肠癌辅助诊断的试剂盒，其对于更好的了解结直肠癌的发生发展机理，制定结直肠癌风险评估和早期检测的有效措施具有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子诊断领域，具体涉及基于与结直肠癌相关的基因 WDR5而开发得 到的一种用于结直肠癌辅助诊断的试剂盒。
技术介绍
大肠癌（CRC)是胃肠道常见的恶性肿瘤。在西方发达国家，CRC的发病率处于第 2位。据国际癌症研宄组织（IARC)提供的数据显示，亚洲地区，尤其是经济发达区，CRC的 发生率也迅速增长。美国国家癌症数据库（US hospital-based oncology database)的研 宄结果表明，50岁以下成年人的CRC发病率在过去10年内增加了 2. 1%。美国安德森癌 症研宄中心（M.D. Anderson Cancer Center)的 Yi Qian Nancy You 等人 2011 年 12 月 12 日在《内科学文献》（Archives of Internal Medicine)上发表《Young-Onset Colorectal Cancer: Is It Time to Pay Attention》称，年轻型的CRC的中位发病年龄为44岁，其中 72. 5%在40岁至49岁发病。 种种现实表明CRC如今已成为常见病。随着经济发展，发病率越来越高，且趋于年 轻化，对人类的健康有着极大的影响。而影响结直肠癌死亡率最重要的因素是发生转移，且 针对转移性结直肠癌的治疗效率很有限。 肿瘤分子标志物是肿瘤细胞在癌变过程中由于基因的表达水平的变化而增加或 减少的抗原和其他生物活性物质，可用于肿瘤的诊断、分期、检测肿瘤进程，和评定药物的 治疗效果；它对肿瘤的临床治疗带来了巨大的影响，尤其当它能够在临床病症出现之前被 检测到，或者用于治疗效果实时监测时，具有更大的意义。同时，肿瘤分子标志物具有敏感， 方便，经济、无创的特征，成为大规模筛查的重要手段。 目前已发现的结直肠癌分子标志物有CEA、CA-199等，但是尚无理想的分子标志 物能够预测肠癌的转移。因此，寻找找到能够对结直肠癌特异的，具有提示作用的肿瘤标志 物具有重要的意义。 WDR5 基因 （WD r印eat domain 5, Gene ID :11091)能编码含 7 个 WD 模体的蛋白 质，文献报道其编码蛋白能够参与多种细胞功能的调节，包括细胞凋亡和转录抑制等。WDR5 蛋白能够促进异源三聚体的形成，对脊椎动物的生长，hox基因的激活等具有十分重要的意 义。在成骨细胞、软骨细胞、骨髓基质细胞中表达并加速骨细胞分化，同时它能够参与细胞 自我更新和重编程的过程。因此，它的异常表达可能引起肿瘤的发生发展，在临床上，也许 能够应用WDR5的表达特征进行诊断预测。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于结直肠癌辅助诊断的试剂盒，该试剂盒能特异性 地检测WDR5基因的表达水平有无上调，作为结直肠癌诊断的依据。 本专利技术的目的通过下述技术方案实现： -种用于结直肠癌辅助诊断的试剂盒，包括试剂A和/或试剂B ; 试剂A是用于检测WDR5基因表达水平的引物对，也即用于在QRT-PCR中定量扩增 WDR5特异片段的QRT-PCR引物对，所述引物对为以下引物中的任意一对： 引物对1 :其序列如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示； 引物对2 :其序列如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示； 引物对3 :其序列如SEQ ID NO:9和SEQ ID NO: 10所示； 引物对4 :其序列如SEQ ID NO: 11和SEQ ID NO: 12所示； 引物对5 :其序列如SEQ ID NO: 13和SEQ ID NO: 14所示； 引物对6 :其序列如SEQ ID NO: 15和SEQ ID NO: 16所示； 引物对7 :其序列如SEQ ID NO: 17和SEQ ID NO: 18所示； 引物对8 :其序列如SEQ ID NO: 19和SEQ ID NO: 20所示； 引物对9 :其序列如SEQ ID NO: 21和SEQ ID NO: 22所示； 引物对10 :其序列如SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24所示； 引物对11 :其序列如SEQ ID N0:25和SEQ ID N0:26所示； 引物对12 :其序列如SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28所示； 引物对13 :其序列如SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30所示； 引物对14 :其序列如SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32所示； 引物对15 :其序列如SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34所示； 引物对16 :其序列如SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36所示； 引物对17 :其序列如SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38所示； 引物对18 :其序列如SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40所示； 引物对19 :其序列如SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42所示； 引物对20 :其序列如SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:44所示； 试剂B是用于检测WDR5蛋白含量的试剂，优选抗WDR5蛋白的抗体。 通过实验发现：与正常肠上皮组织相比，WDR5 (WD Repeat Domain 5，Gene ID : 11091)蛋白在肿瘤组织中呈高水平表达；因此，对肠上皮组织中WDR5表达水平的检测可作 为结直肠癌诊断的依据； 所述的高水平表达是指肿瘤组织内WDR5mRNA及蛋白表达水平高于正常对照；所 述的肿瘤细胞为TNM I-IV期结直肠癌病人肿瘤组织细胞。 本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果： 本专利技术通过对结直肠正常组织和癌组织中的WDR5基因 mRNA及编码蛋白的表达水 平进行检测，发现WDR5在癌组织中显著高表达。在肠癌细胞中过表达WDR5能检测到癌细 胞表现出更强的迀移能力。基于以上发现开发得到一种用于结直肠癌辅助诊断的试剂盒， 其对于更好的了解结直肠癌的发生发展机理，制定结直肠癌风险评估和早期检测的有效措 施具有重要意义。【附图说明】 图1是定量PCR检测WDR5在结直肠癌组织中mRNA水平。 图2是免疫组织化学染色检测WDR5在结直肠癌组织中蛋白水平。 图3是免疫组织化学染色示例WDR5肿瘤组织（箭头所示）和癌旁组织（箭头所 示）的表达量。 图4是在HCT116细胞中过表达WDR5进行细胞划痕实验。【具体实施方式】 下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限 于此。 下述实施例中的实施方法，如无特别说明，均为常规方法。 以下是实施例所用到的部分实验材料来源： 结直肠癌细胞株HT-29、HCT116购自美国菌种保藏委员会（American Type Culture Collection，ATCC)〇 细胞培养基DMEM，McCoy5A、胎牛血清购自Gibco公司。 实时焚光定量PCR试剂盒SYBR Green PCR Kit购自Invitrogen公司。抗体 anti-WDR5(AF5810)购自 R&D System 公司。 逆转录用dNTP混合物（IOmM)、RNA酶抑制剂（40u/uI)、MMLV逆转录酶购买自 Invitrogen 公司。 克隆用 P本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于结直肠癌辅助诊断的试剂盒，其特征在于：包括试剂A和/或试剂B；试剂A是用于检测WDR5基因表达水平的引物对，所述引物对为以下引物中的任意一对：引物对1：其序列如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示；引物对2：其序列如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示；引物对3：其序列如SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10所示；引物对4：其序列如SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示；引物对5：其序列如SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14所示；引物对6：其序列如SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16所示；引物对7：其序列如SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示；引物对8：其序列如SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20所示；引物对9：其序列如SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22所示；引物对10：其序列如SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24所示；引物对11：其序列如SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26所示；引物对12：其序列如SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28所示；引物对13：其序列如SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30所示；引物对14：其序列如SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32所示；引物对15：其序列如SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34所示；引物对16：其序列如SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36所示；引物对17：其序列如SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38所示；引物对18：其序列如SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40所示；引物对19：其序列如SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42所示；引物对20：其序列如SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:44所示；试剂B是用于检测WDR5蛋白含量的试剂。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黄文林，谈辛，
申请(专利权)人：黄文林，
类型：发明
国别省市：广东;44
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