提供了特异性结合到人肿瘤坏死因子(TNF)的解离单体的表位上的分离的或合成的抗体或配体。这样的结合破坏该单体组装成生物活性三聚体人可溶性TNF(sTNF)。另外提供了含有一种或多种的这些分离的抗体或配体的药物组合物。另外披露了使用抗体的组合来治疗患有由人TNF介导的疾病(例如，类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、幼年型类风湿性关节炎、银屑病关节炎、动脉粥样硬化、代谢综合征、阿尔茨海默病、HIV、II型糖尿病)的受试者的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】用于选择性减少循环的生物活性可溶性TNF的组合物以及 用于治疗TNF介导的疾病的方法 以电子形式提交的材料的通过引用结合 申请人特此通过引用结合与此同时以电子形式提交的序列表材料。这个文件被标 记为GGPllPCT_ST25.txt〃，建立于2014年1月23日，并且大小为2KB。 专利技术背景 肿瘤坏死因子（TNF ;先前称为肿瘤坏死因子-a )是一种在类风湿性关节炎和相 关炎性疾病如强直性脊柱炎、幼年型类风湿性关节炎、和银肩病关节炎的发病中起主要作 用的促炎细胞因子。人类原形式（proform)，跨膜结合的TNF (tmTNF)，是一种包含三个非共 价结合单体的26-kDa的同源三聚体，每个单体具有嵌入细胞膜中的N末端序列。tmTNF的 每个单体具有一个233个氨基酸的序列（UniProtKB/Swiss-Prot登录号P01375)。可溶性 TNF(sTNF)是由其原形式tmTNF经过酶切形成的同源三聚体。sTNF三聚体的每个单体具有 一个157个氨基酸的序列（SEQ ID N0:1)，其与公开的登录号P01374的aa77到233的序列 相同。 活性TNF的两种形式（tmTNF和sTNF)作为同源三聚体15=13存在并且接合三聚体受 体，所述三聚体受体识别在组装的同源三聚体中的TNF单体之间的沟中的受体结合部位。 在这些单体之间的沟包括来自两个连续单体的氨基酸序列im。两种形式的TNF的受体结 合区域是相同的。 三聚体完整性对于生物学功能是必需的。对于tmTNF，三聚体结构是在tmTNF插入 到细胞膜中之前建立的 1"并且通过穿过该膜的蛋白质茎的锚定加上在膜边界处的棕榈酰 化氨基酸侧链的进一步脂质销定而被维持在tmTNF中&相比之下，sTNF活性三聚体自由 解离成无活性单体SEQ ID NO: 1和二聚体，这些二聚体重新形成在这三种形式之间处于稳 态平衡中的活性sTNF同源三聚体' 抗TNF生物制品已经提供了在用抗TNF单克隆抗体瑞米凯德（REMICADE)(英利 昔单抗；杨森生物科技集团（Janssen Biotech, Inc.))和HUMIRA(阿达木单抗，雅培公司 (Abbott Laboratories))、以及一种广泛使用的融合到Fc上的嵌合的溶解的TNF受体，即， ENBREL(依那西普，百健艾迪公司（Biogen，Inc.彡） 1'1处理上述炎性疾病上的重大进步。这 种治疗和销售成功被严重感染和恶性肿瘤的罕见但是统计学上显著的事件破坏w，这很可 能与损害免疫防御的tmTNF s'&的伴随阻滞相关。这些不良事件包括主要由于细胞内病原体 如结核分枝杆菌、单核细胞增多性李斯特菌和荚膜组织胞浆菌所致的结核病、全身性真菌 感染和其他细胞内感染、以及某些形式的癌症的产生。这些结果并不出人意料，因为这些因 子阻断了促炎性sTNF但也阻断了对于这种细胞内感染和恶性肿瘤的邻分泌细胞控制是必 需的 tmTNF3'7'9。 由于两种形式的TNF的受体结合区域是相同的，开发出一种形式相对于另一种形 式选择性地阻断受体接合的新的单克隆抗体没什么希望。针对TNF的短序列的抗体未曾产 生过有用的治疗剂。例如，在1987年，索赫尔（Socher)等人 26在开发针对TNF的完全或部 分合成序列的抗体中观察到针对TNF片段1-15的高度多克隆抗体反应，其显现出阻断TNF 的生物活性和受体结合。然而，这一 16年之久的观察并未产生另外的治疗试剂的开发，这 很可能是由于TNF受体是不与TNF氨基酸1-15相关的不连续表面区域。后续研宄者在2001 年使TNF氨基酸4-23结合到乳头瘤病毒样颗粒上，并且观察到多克隆抗体的诱导、以及实 验性关节炎的减轻其他研宄者在2007年使用了相同的偶联到基于病毒样颗粒的组合 物上的片段TNF aa4-23并且诱导了减轻实验性关节炎的抗体。与全长TNF免疫相比，没有 发生针对感染的抗性的抑制M。由于这些TNF片段不是针对TNF的受体结合区域，这些出 版物没有显示进一步的这些生成的多克隆抗体的治疗用途的教导或建议；并且从那时起未 曾公开过进一步的研宄。 -项更近的选择性地抑制sTNF的促炎活性同时保留先天免疫所需要的tmTNF功 能的尝试涉及形成无活性的三聚体的合成的显性阴性TNF单体变体的设计 ' 这些变体显 示出减轻实验性关节炎而不抑制针对感染的先天免疫 ' 强调了 sTNF在关节炎发病机制中 的重大作用。另一个途径已经寻求与单体间接触区域相互作用的小分子药物。一种分子， SP304,以yM亲和力结合这样一个接触区域，从而引起三聚体的体外破坏^'气 尽管在针对多种炎性病症的抗TNF治疗领域中的文献很多，在本领域中对于新颖 且有用的组合物以及用于产生针对这些疾病的治疗性或预防性免疫原性组合物的方法仍 然存在着需要，这些组合物并不导致由于细胞免疫的抑制所致的不良副作用。 专利技术概述 如本文所述，本专利技术人提供了选择性抗TNF单体特异性生物组合物及其不同使用 方法，所述方法不影响tmTNF的结构或生物活性或者不增加被治疗的受试者对由于细胞内 病原体所致的感染的易感性。 在一个方面，提供了一种特异性结合到人TNF的解离单体的表位上的分离的或 合成的抗体或配体。抗体或配体与该单体的结合破坏或阻止该单体组装成生物活性三聚 体人sTNF。在一个实施例中，该抗体或配体特异性地结合SEQ ID NO: 1的氨基酸8-15的 PSDKPVAH或SEQ ID N0:1的氨基酸8-16的PSDKPVAHV序列的单体特异性表位A2。在又另 一个实施例中，该抗体或配体特异性地结合SEQ ID N0:1的氨基酸116到124的EPHLGGVF 序列的单体特异性表位F。在一个实施例中，该抗体是针对表位A2和F的双特异性抗体。 在另一个方面，一种药物组合物包含特异性地结合人TNF的解离单体的表位的一 种或多种分离的或合成的抗体或配体、以及一种药学上可接受的载体或稀释剂，该结合破 坏或阻止该单体组装成生物活性三聚体人sTNF。在某些实施例中，该组合物含有上述抗体 的一种或两种。 在又一个另外的方面，提供了用于制备或产生特异性地结合人TNF的解离单体的 表位的分离的或合成的抗体或配体的方法。 在又另一个方面，一种用于治疗患有由可溶性人TNF(sTNF)介导的疾病的受试者 的方法包括减少患有该疾病的受试者的血液中的sTNF的量、浓度或生物活性，而不影响 tmTNF的量、浓度或生物活性。这是通过破坏、阻止或减少TNF的解离单体在体内组装或再 组装成生物活性三聚体人sTNF而不影响tmTNF的量、浓度或生物活性来完成的。在某些实 施例中，这种方法采用了在上文和在此描述的单体特异性抗体、双特异性抗体、配体和组合 物。在一个实施例中，该疾病是类风湿性关节炎（RA)、幼年型类风湿性关节炎、强直性脊柱 炎（AS)、银肩病关节炎或银肩病。 在又另一个方面，sTNF升高还在初发HIV感染、以及潜伏HIV感染和II型糖尿病 的复发中涉及。因此，在又另一个方面，一种用于预防感染有HIV-1并且用抗逆转录病毒药 物进行治疗的受试者发生新的感染（或由于HIV所致的反弹感染）的方法包括在中断ART 之后向该用抗本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种异性地结合人TNF的解离单体的表位的分离的或合成的抗体或配体，所述结合破坏该单体组装成生物活性三聚体人sTNF。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：G·戈尔茨坦，
申请(专利权)人：西蒙有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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