密封剂组合物制造技术

本发明专利技术提供包含凝血酶、纤维蛋白原和脂化的组织因子的组合，以及包含所述组合的密封剂组合物以及它们作为密封剂以及在治疗出血中的用途。本发明专利技术的组合和组合物表现出提高的止血性质，同时，所形成的凝块的性质是一致的，使得密封剂效率优于现有技术的密封剂组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】密封剂组合物 本专利技术涉及密封剂组合物领域。
技术介绍
在损伤后，被触发来止住出血的一系列生理机制被称为止血。止血是非常复杂的 过程，其涉及多种分子和细胞类型。为了便于研宄，止血可被再分为四个重叠的步骤：i)血 管收缩，ii)伤口区域中的最初血小板栓的形成，iii)形成纤维蛋白抵抗凝块（凝血级联） 和iv)凝块溶解步骤或纤维蛋白溶解，伤口愈合过程从该步骤开始。 通过在血浆中处于溶解的和无活性的形式的因子VII(FVII)与它的被称为组织 因子（下文也称为"TF"）的特异性受体的相互作用来启动凝血级联的外源通路。在它的天 然形式中，TF主要位于围绕血管的多种细胞类型的表面上。因此，在正常条件下，当发生损 伤或伤口时，它与血浆分子特有地接触。血管破裂后，凝血级联由TF与FVII的相联而启动， 触发多种凝血因子之间随后的相互作用。最终结果是形成凝血酶（Flla)，凝血酶（Flla)随 后将在血浆中丰度很高的纤维蛋白原（FI)转化为纤维蛋白纤维。这些纤维蛋白纤维是不 溶的，并且形成网，其与血小板一起，导致被称为纤维蛋白凝块的形成。 如果发生大量出血，出于促进快速止血的目的，各种各样的方法已经使用了几个 世纪，如直接按压、纱布包扎、缝合线和止血带。尽管这些技术是有效的，但它们被称为"非 主动"止血手段，并且当与不同类型的敷料使用时帮助止血过程。 为了试图提高外科止血效果，过去几十年期间，在开发含有"活性"成分的新产品 上已经作出大量的努力，除了传统技术之外，这样的"活性"成分可帮助提高止血。在这方 面，组织胶或纤维蛋白密封剂（后文也称为FS)代表快速发展的止血/粘合剂产品行业的 新策略。使用FS密封伤口边缘的概念是一种相对新的理念。事实上，FDA在1998年批准 第一次认可的FS(Tisseel,Baxter)的使用。自从那时起，商业化制备的纤维蛋白密封剂， 如Tiseel(Immuno，Vienna，Austria)、Beriplast(BehringwerkeAG)、Tissucol(Baxter) 和Biocol(CRTS)已经在全世界广泛地使用了近15年。 FS有许多的外科应用，并且主要由FI、FIIa、氯化钙组成，偶尔包含激活因子 XIII(FXIIIa)。在一些制剂或在选定的适应症中，包括抗纤维蛋白溶解剂（抑肽酶，氨甲环 酸），以阻止凝块的溶解。FS被设计为模拟凝血级联的最后阶段，在该阶段期间，由于Flla 的催化作用，FI被转化为纤维蛋白。所形成的纤维蛋白纤维与血小板紧密联合，并且引起 纤维蛋白凝块的形成。在这种相互作用中，FXIIIa发挥重要作用，因为它的存在允许产生 的纤维蛋白网的排列，以取得在抗性和弹性方面最佳的结构构象。 FS提供的FI和Flla的浓度大大高于它们在血液中自然存在的浓度，从而允许快 速形成固体凝块。因此，它们的聚合与其他血液组分无关，并且甚至在不存在血液时工作地 最好。 因为FI和Flla的聚合是非常快的（少于5秒），两种组分应该保存在分开的小瓶 中直至它们使用。因此，市售FS呈现为两个独立的注射器中，其内容物在施用的位置混合。 FS的作用机制通过在施用位置产生坚固的凝块作为密封屏障来支持。FS被指示 为用于发生体液（如血液、胆汁等等）流失的伤口区域上。它们也可用于预防肺部伤口中 的空气泄漏。除了它们作为密封剂的功能外，FS能用在不同的医学应用中，如：i)用于伤口 愈合的基质，ii)用于组织粘附的基底和iii)药物递送。 本领域公知的是，密封剂组合物必须是双重的，表现出止血和密封活性。 与双重分离组分（Flla和FI)组成的传统FS相比，W097/29792描述了无Flla的 单组分密封剂组合物FI。TF和FI的组合不诱导形成稳定的凝块。因此，除了TF和FI外， 需要数种凝血因子。该文件公开了需要包括？11、？￥、？￥11、？乂和？乂111以诱导凝块。因此， 为了有效，W097/29792中所描述的密封剂组合物施用于健康血液，或可选地也应该含有缺 失的生理浓度的凝血因子（FII、FV、FVII、FX和FXIII)。 因此，尽管已做出努力，仍需要能有效地阻止液体迀移出或迀移进组织中的另外 的组合物，表现出合适的止血和密封活性。 专利技术概述 本专利技术的专利技术人发现，通过将脂化TF加入到已知的包含凝血酶和纤维蛋白原的 FS组合物中，在止血特性上存在明显改善。此外，由本专利技术的组合的应用产生的凝块表现 出较高的均一性，指示它在密封出血伤口 /损伤中的功效。这意味着至少包含凝血酶、纤维 蛋白原和脂化TF的组合是有前景的密封剂组合物，其克服/改善了已知FS组合物的止血 /密封的双重功效。 止血特性的明显改善主要由于凝块组合在它的施用位置附近的蔓延能力。蔓延作 用极其重要，这不仅在健康血液中，而且在关键止血组分（如Flla和FX)的活性受损的血 液中，止血组分的受损可由外科手术中广泛使用的某些药物的施用造成，如肝素。出人意料 地，用本专利技术的组合所观察到的凝块蔓延克服了用肝素处理过的血液的抗凝血阶段。 公开密封剂组合物的现有技术文献中，没有一篇描述它们基于凝块向它的施用位 置附近范围蔓延能力的功效。这意味着至少包含凝血酶（Flla)、纤维蛋白原（FI)和脂化TF的组合是有前景的 密封剂组合物，其克服/提高已知FS组合物的止血/密封双重功效。 因此，一方面，本专利技术提供包含脂化的组织因子、凝血酶和纤维蛋白原的组合。 图1 (A)中显示，当脂化的组织因子加入到市售的密封剂组合物Tissucol? (包 含凝血酶和纤维蛋白原）中时，血浆中所诱导的凝结（通过在施用位置3cm外的距离，健 康血浆中凝块的蔓延）发生的时间明显低于当只使用Tissucol?:时所需的时间。事实上， 如由数据得到的，当用本专利技术的组合的凝结为约50%时（黑色三角形），现有技术的组合 (Tissuco丨?，灰色正方形）刚开始凝结血浆样品。值得注意的是并且本文中首次描述，这 种差异在较低治疗剂量的肝素处理血浆的情况中更明显（图1B)，并且当使用较高治疗剂 量的肝素时，差异最大（图1C)。在后者的情况中，FS施用后7min时，肝素处理的血浆甚至 不开始凝固。因此，通过将脂化的TF加入到包含Flla和FI的FS中，实现止血性质上的明 显改善。 这意味着施用本专利技术所描述的组合，止住出血需要的时间更少。如果发生在肝素 治疗的患者，这是种相关性更为特别，在肝素治疗的患者中，用凝血酶或其他止血产品按压 不能足够有效的止住出血，存在患者死亡的尚风险。 此外，专利技术人发现包含纤维蛋白原、凝血酶和组织因子的组合表现出意想不到的 密封剂效果。如下面所解释的，实施例4中，包含凝血酶、脂化的组织因子和纤维蛋白原的 组合，当施用于肝素化的血浆样品中时，扩散穿过血浆样品的速度明显快于不包括脂化TF 的密封剂组合。此外，已观察到，用包括组织因子、凝血酶和纤维蛋白原的组合所获得的凝 块比用Tissucol? (即，不包括脂化的组织因子）所获得的凝块有更高的均一性。在不受 理论束缚的情况下，专利技术人认为，组织因子嵌入所形成的纤维蛋白网（由于组合中包括凝 血酶和纤维蛋白原）中，并且由于组织因子在纤维蛋白网内的这种分布，发生凝块的扩张 效应，引起损伤或本文档来自技高网...

【技术保护点】
组合，其包含脂化的组织因子、凝血酶和纤维蛋白原。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡安·拉蒙·罗德里格斯费尔南德斯阿尔瓦，杰西·穆莱特·莫莱诺，
申请(专利权)人：斯洛柏塔盖兹欧洲有限公司，
类型：发明
国别省市：西班牙;ES