本发明专利技术公开了一种防治大豆根腐病的芽孢杆菌菌株，该菌株为芽孢杆菌(BaciLLus.sp)；保藏名称为芽孢杆菌JSCX-1；保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2015年01月07日；保藏编号：CGMCC No.10284。所述芽孢杆菌菌株的单菌落为圆形，乳白色，长期培养菌落偏棕黄色，边缘整齐，不透明，表面略褶皱。所述芽孢杆菌菌株革兰氏染色呈紫色，为阳性；芽孢染色中芽孢呈绿色，菌体呈红色；芽孢杆菌菌株在需氧型试验结果为沿培养基表面生长，为好氧菌。本发明专利技术不易使大豆疫霉产生抗性、不污染环境的防治大豆根腐病的芽孢杆菌菌株及其芽孢杆菌菌剂。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种微生物领域，具体涉及一种防治大豆根腐病的芽孢杆菌菌株及其 芽孢杆菌菌剂。
技术介绍
大豆疫霉侵染大豆植株引起的大豆根腐病对于大豆生产是一种毁灭性的的病害， 此病害最早于1948年在美国发现，后不断蔓延到亚、非、欧、美洲近二十个国家的大豆产 区，每年带来的直接经济损失高达几十亿美元，是大豆生产中最严重的病害之一。80年代 末，该病害首次在我国东北地区发现，已成为东北地区大豆生产上的头号病害，造成了巨大 的经济损失。 大豆疫霉病菌可以在大豆的各个生育期对大豆造成危害。在大豆出苗前可以引起 种子腐烂、出苗前腐烂，出苗后可以引起植株枯萎。一般苗期感病植株表现为出苗差、近地 表茎部出现水浸状病斑、叶片变黄萎蔫，严重进植猝倒死亡。成株期植株受侵染后下部叶 片变黄，随后上部叶片逐渐变黄并很快萎蔫；近地表茎部病斑褐色，并可向上扩展，茎皮层 及髓变褐；根腐烂，根系发育不良；未死亡病株的结荚数明显减少，空荚、瘪荚较多，籽粒皱 缩。由于在潮湿条件下，根部侵染的病菌可以产生大量游动孢子，孢子随雨水飞溅，危害茎 部和叶片，甚至出现病荚，其症状为绿色豆荚基部出现水浸状斑，病斑逐渐变褐并从荚柄蔓 延至荚尖，最后整个豆荚呈黄褐色干枯，种子失水干瘪。 目前大豆疫病主要是通过化学防治。虽然化学防治效果显著，但由于其作用位点 单一，长期使用使大豆疫霉产生的抗药性问题日益突出。比如最常用的药剂甲霜灵（商品 名称Ridomil)的生物活性强，有持久的杀菌效果。但甲霜灵对大豆疫霉的作用位点单一， 在此作用位点发生的大豆疫霉的突变会都有可能对药剂产生抗性。此外化学防治的选择性 差，破坏农作物的生态环境，不易降解，对人畜极不安全。这些因素使得化学防治的试剂使 用范围受到的限制。因此，开发非化学防治的措施目前已成为大豆疫霉治理的重点，而用芽 孢杆菌菌剂来进行生物防治是其中最有前途的方法。 目前，缺乏一种不易使大豆疫霉产生抗性、不污染环境的防治大豆根腐病的芽孢 杆菌菌株及其芽孢杆菌菌剂。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供了一种不易使疫霉产生抗性、不污染环境的防 治大豆根腐病的芽孢杆菌菌株及其芽孢杆菌菌剂。 为了实现上述目的，本专利技术通过如下技术方案实现：一种防治大豆根腐病的芽孢 杆菌菌株，该菌株为芽孢杆菌（BaciLLus. sp);保藏名称为芽孢杆菌JSCX-I ;保藏于中国微 生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1 号院3号；保藏日期：2015年01月07日；保藏编号：CGMCC No. 10284。 进一步地，所述芽孢杆菌菌株的单菌落为圆形，乳白色，长期培养菌落偏棕黄色， 边缘整齐，不透明，表面略褶皱。 进一步地，所述芽孢杆菌菌株革兰氏染色呈紫色，为阳性；芽孢染色中芽孢呈绿 色，菌体呈红色；芽孢杆菌菌株在需氧型试验结果为沿培养基表面生长，为好氧菌。 本专利技术所述的芽孢杆菌制备的防治大豆根腐病的芽孢杆菌菌剂。 进一步地，所述的防治大豆根腐病的芽孢杆菌菌剂，其活性成分为如下（a)、（b)、 (c)和（d)中的至少一种： (a)权利要求1所述芽孢杆菌的发酵培养物； (b)权利要求1所述芽孢杆菌； (c)权利要求1所述芽孢杆菌的芽孢； (d)权利要求1所述芽孢杆菌的发酵上清。 本专利技术所述的防治大豆根腐病的芽孢杆菌菌剂的制备方法，包括如下步骤： (1)将所述芽孢杆菌菌株JSCX-I为芽孢杆菌属，芽孢杆菌菌种在NB培养基中上生 长，温度为29-31°C，在转速为150-180r/min下振荡进行培养，培养时间为16-20h，然后在 超净工作台中分别取样测0D600值，测定过程中以未接菌的NB培养基来进行比对； (2)当芽孢杆菌菌种培养至0D600值为0. 5-0. 8时，将芽孢杆菌菌种溶液与蒸馏水 按照1 :1〇〇的体积比加入NB培养基中，温度为28-30°C、转速为150-180r/min下振荡培养 20-24h， 然后在转速为6000-8000r/min下进行离心分离9-llmin，制得芽孢杆菌菌剂。 进一步地，在步骤（2)中，将芽孢杆菌菌剂的浓度稀释至lX108-lX10 1(lCFU/ml。 进一步地，在步骤⑴中，所述NB培养基由牛肉浸膏2. 9-3. lg，蛋白胨 9. 9-10. lg，氯化钠4. 9-5. Ig组成；pH为6. 8-7. 0,用蒸馏水将上述组分定容至1000ml，在 温度为120_121°C下灭菌19-21min。 本专利技术所述芽孢杆菌菌剂在防治大豆根腐病的应用。 有益效果：本专利技术不易使大豆疫霉产生抗性、不污染环境的防治大豆根腐病的芽 孢杆菌菌株及其芽孢杆菌菌剂。芽孢杆菌菌剂属于生物制剂，完全没有因化学药剂的使用 所带来的化学抗药性等问题，因而有利于大豆的无公害生产。农民可以不用或减少其他防 治大豆疫霉的农药的用量。减少农民节省开支。同时，该芽孢杆菌菌剂的防治效果可达 50%以上，还有增产功能，可为农民增加收入。芽孢杆菌菌剂对大豆根腐病的防治效果为 55-64%，农业增产可达23 %以上。【附图说明】 图I :JSCX-1基因组与同源性较高的菌株序列所构建的系统进化树图。【具体实施方式】 下面将通过具体实施例对本专利技术做进一步的具体描述，但不能理解为是对本专利技术 保护范围的限定。 实施例1 菌株的生理生化试验以及16S rDNA分子的鉴定 如图1所示，芽孢杆菌菌株JSCX-I在NA平板上在温度为29-31°C下进行活化培 养，NA培养基：牛肉浸膏（Beef Extract)3g，蛋白胨（Peptone)lOg，氯化钠（NaCl)5g，琼脂 粉（Agar) 15g，ρΗ7· 0。 培养时间为20_24h后观察发现，JSCX-I的单菌落近圆形，乳白色，长期培养菌落 偏棕黄色，边缘整齐，不透明，表面略褶皱。菌株JSCX-I革兰氏染色呈紫色，为阳性；芽孢染 色中芽孢呈绿色，菌体呈红色。菌株JSCX-I在需氧型试验结果为沿培养基表面生长，表明 菌株JSCX-I为好氧菌。 生理生化试验为氧化酶试验、过氧化氢试验、明胶液化试验、柠檬酸盐试验、H2S产 生试验的结果均为阳性；苯丙氨酸解氨酶试验、淀粉水解试验、吲哚试验、甲基红试验、乙酰 甲基甲醇试验、硝酸盐还原试验，在耐盐性试验中结果均为阴性。 芽孢杆菌菌株JSCX-I能在含2%、5%、8% NaCl的NA培养基中生长，在含10% NaCl的NA培养基中无法生长，在葡萄糖、甘露醇发酵试验中糖发酵液体培养基变黄色且倒 置的德汉氏小管有气体产生。菌株JSCX-I的形态特征和生理生化特征与常见细菌系统鉴 定手册中芽孢杆菌属细菌（Bacillus sp.)最为相似。 以JSCX-I基因组总DNA为模板，PCR扩增16SrDNA得到长度约I. 5Kb的扩增产物， 这与16SrDNA在所有细菌中大多高度保守并且长度恒定为I. 5Kb左右的报道吻合。整理测 序结果可得到进行系统发育分析的16SrDNA序列的总长度为1419bp，将测序结果在NCBI网 站GenBank数据库中Blast搜索，与已登录的16SrDNA序列进行核苷酸同源性比较，发现菌 株JSCX-I的16SrDNA序列与多株芽孢杆菌属细菌（Bacillus本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种防治大豆根腐病的芽孢杆菌菌株，其特征在于：该菌株为芽孢杆菌(BaciLLus.sp)；保藏名称为芽孢杆菌JSCX‑1；保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2015年01月07日；保藏编号：CGMCC No.10284。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：魏利辉，陈曦，黄慧文，卢晓雪，冯辉，张金凤，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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