重组融合蛋白制剂制造技术

本发明专利技术提供一种重组融合蛋白液体制剂，包含重组融合蛋白、缓冲盐、稳定剂和表面活性剂。本发明专利技术建立了能使重组融合蛋白稳定储存的液体制剂，可以提高重组融合蛋白的物理化学稳定性，液体制剂在高温加速、长期冷藏和反复冻融等条件下均能保持重组融合蛋白稳定性，可以提高临床使用安全性。

【技术实现步骤摘要】
重组融合蛋白制剂
本专利技术涉及生物技术药物制剂领域，具体涉及稳定的重组融合蛋白制剂及其制备方法和应用。
技术介绍
年龄相关性黄斑变性(AMD)又称老年黄斑变性，为视网膜黄斑区结构的衰老性改变，主要由视网膜色素上皮细胞和视网膜退行性病变引起的不可逆的视力下降或丧失。该病在临床上分为干性(萎缩性)AMD和湿性(渗出性)AMD两种，其中，湿性AMD约占AMD总病例数的20％，不过，在西方国家，湿性AMD却是老年人失明的首要原因。眼内异常血管增生是湿性AMD发生和发展的主要原因之一，阻断异常血管增生是湿性AMD的治疗基础，它有可能减缓甚至阻止疾病的进程。血管内皮生长因子(VEGF)是一种分泌性蛋白质，它可诱发血管生成，增加血管渗透性，引发炎症，而这些因素又与湿性AMD的发展进程密切相关。因此，在开发湿性AMD治疗药物时，都将VEGF当作潜在的治疗靶标。重组人血管内皮生长因子受体-抗体-人补体受体1融合蛋白(以下简称IBI302)就是根据以上机理而设计研发的针对AMD病症的大分子药物。它是申请人自主设计的具有全球知识产权的Ⅰ类新药，其给药途径设计为玻璃体内注射，剂量预计为0.5～2mg/眼。自1982年第一个重组药物——人工胰岛素上市以来，应用蛋白质工程技术制造的重组融合蛋白药物已经越来越多被开发出来，其中部分已经作为常规药品被人们所接受。但是由于该类药物均为分子量较大的多肽或蛋白质，其性能很不稳定，极易变质，而且蛋白质高浓度时容易发生自我聚集。这些不利因素使得将这类药物制成稳定、安全、有效的制剂提出了巨大挑战。重组融合蛋白为生物大分子，其结构非常复杂。在生产及储存过程中，表达的蛋白分子会发生各种物理和化学变化。物理变化有：吸附、去折叠变性、聚集和沉淀等。化学变化有：脱酰胺，异构化，氧化等。这些变化可能会对最终产品安全性和有效性产生影响。因此，建立一个合适的制剂处方以保障产品的稳定性和安全性非常重要。IBI302是双靶点特异性融合蛋白，为国家Ⅰ类新药。由于其结构的复杂性，导致其化学性质不稳定，蛋白容易发生聚集且电荷异构体易于从碱性组分转化为酸性组分。因此，本领域尚需研发重组蛋白制剂，保障产品的稳定性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种重组蛋白制剂，可以使融合蛋白在较高浓度下稳定保存，此外，制剂在高温加速、长期冷藏和反复冻融等条件下均能保持其稳定性，提高临床使用安全性。本专利技术的第一方面，提供一种重组融合蛋白液体制剂，所述液体制剂包含：重组融合蛋白、缓冲盐、稳定剂、表面活性剂和无菌注射用水，其中，所述重组融合蛋白的浓度为5～45mg/mL；所述缓冲盐为磷酸盐、醋酸盐中的一种或两种以上的组合，且所述盐的浓度为5-25mmol/L，较佳地为8-22mmol/L；所述稳定剂为氯化钠、氨基酸、多元醇中的一种或两种以上的组合，所述氨基酸为精氨酸、甘氨酸、组氨酸中的一种或两种以上的组合，所述多元醇为蔗糖、山梨醇、甘露醇中的一种或两种以上的组合，且所述氯化钠的浓度为100-200mmol/L，所述氨基酸的浓度为50-350mmol/L，所述多元醇的浓度为1重量％～15重量％，以所述液体制剂的总重量计；所述表面活性剂为聚山梨酯20、聚山梨酯80、泊洛沙姆188中的一种或两种以上的组合，且所述表面活性剂的浓度为0.01重量％～0.08重量％，以所述液体制剂的总重量计；且所述液体制剂的pH为4.5～7.5。在另一优选例中，所述重组融合蛋白为重组人血管内皮生长因子受体-抗体-人补体受体1融合蛋白，氨基酸序列如SEQIDNO.:1或SEQIDNO.:3所示。在另一优选例中，所述稳定剂为氨基酸、多元醇中的一种或两种以上的组合。在另一优选例中，所述氯化钠的浓度为120-180mmol/L。在另一优选例中，所述氨基酸的浓度为70-260mmol/L在另一优选例中，所述多元醇的浓度为3重量％～10重量％。在另一优选例中，所述多元醇的浓度为200-300mmol/L，较佳地，为220～270mmol/L。在另一优选例中，所述液体制剂的pH为5.0-7.2，较佳地，pH为5.5-7.0。在另一优选例中，所述缓冲盐为磷酸盐；所述氨基酸为精氨酸；所述多元醇为蔗糖；所述表面活性剂为聚山梨酯20。本专利技术中，所述缓冲盐为枸橼酸钠、磷酸钠盐、醋酸钠中的一种或两种以上的组合，所述磷酸钠盐为磷酸二氢钠、磷酸氢二钠两种的组合。本专利技术的第二方面，提供一种试剂盒，所述试剂盒含有第一方面所述的液体制剂，以及盛装所述液体制剂的容器。进一步地，所述试剂盒中还含有说明书。本专利技术的第三方面，提供第一方面所述的液体制剂的用途，用于制备预防和/或治疗年龄相关性黄斑变性的药物。在另一优选例中，所述年龄相关性黄斑变性为湿性年龄相关性黄斑变性。本专利技术的液体制剂，可使重组融合蛋白保持稳定，使得该重组蛋白能稳定存在于处方中，提高产品的质量，延长产品的货架期，提高临床使用安全性。液体制剂具有较佳的热稳定性，在高温加速、长期冷藏和反复冻融等条件下均能保持稳定。应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。具体实施方式本申请的专利技术人经过广泛而深入地研究，首次意外研发出一种重组融合蛋白制剂，在加速、长期和冻融等条件下，能保障产品的稳定性。本专利技术可应用的重组融合蛋白(VEGF抑制剂)还包括其他基因工程技术获得的重组融合蛋白(VEGF抑制剂)。在此基础上，完成了本专利技术。重组人血管内皮生长因子受体-抗体-人补体受体1融合蛋白本专利技术优选的重组融合蛋白是重组人血管内皮生长因子受体-抗体-人补体受体1融合蛋白(参见US61/629,932(PCT/US2012/067489)；专利名称：Proteininhibitorstocomplementandvegfpathwaysandmethodsofusethereof)，氨基酸序列如SEQIDNO.:1所示。本专利技术另一优选的重组融合蛋白是重组人血管内皮生长因子受体-抗体-人补体受体1融合蛋白氨基酸序列如SEQIDNO.:3所示。液体制剂本专利技术的重组融合蛋白液体制剂，包含：重组融合蛋白、缓冲盐、稳定剂、表面活性剂和无菌注射用水。在另一优选例中，所述液体制剂，包含：重组融合蛋白、缓冲盐、氯化钠、表面活性剂和无菌注射用水。在另一优选例中，所述液体制剂，包含：重组融合蛋白、缓冲盐、多元醇、表面活性剂和无菌注射用水。在另一优选例中，所述液体制剂，包含：重组融合蛋白、缓冲盐、氨基酸、表面活性剂和无菌注射用水。在另一优选例中，所述液体制剂，包含：重组融合蛋白、缓冲盐、多元醇、氨基酸、表面活性剂和无菌注射用水。所述重组融合蛋白的浓度为5～45mg/mL。所述缓冲盐为磷酸盐、醋酸盐中的一种或两种以上的组合，且所述盐的浓度为5-25mmol/L，较佳地为8-22mmol/L。所述稳定剂为氯化钠、氨基酸、多元醇中的一种或两种以上的组合。所述氨基酸为精氨酸、甘氨酸、组氨酸中的一种或两种以上的组合。所述氨基酸的浓度为50-350mmol/L，较佳地为70～260mmol/L。所述多元醇为蔗糖、山梨醇、甘露醇中的一种或两种以上的组合。所述多元醇的浓度为1重量％本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组融合蛋白液体制剂，其特征在于，所述液体制剂包含：重组融合蛋白、缓冲盐、稳定剂、表面活性剂和无菌注射用水，其中，所述重组融合蛋白的浓度为5～45mg/mL；所述缓冲盐为磷酸盐、醋酸盐中的一种或两种以上的组合，且所述盐的浓度为5‑25mmol/L，较佳地为8‑22mmol/L；所述稳定剂为氯化钠、氨基酸、多元醇中的一种或两种以上的组合，所述氨基酸为精氨酸、甘氨酸、组氨酸中的一种或两种以上的组合，所述多元醇为蔗糖、山梨醇、甘露醇中的一种或两种以上的组合，且所述氯化钠的浓度为100‑200mmol/L；所述氨基酸的浓度为50‑350mmol/L；所述多元醇的浓度为1重量％～15重量％，以所述液体制剂的总重量计；所述表面活性剂为聚山梨酯20、聚山梨酯80、泊洛沙姆188中的一种或两种以上的组合，且所述表面活性剂的浓度为0.01重量％～0.08重量％，以所述液体制剂的总重量计；且所述液体制剂的pH为4.5～7.5。

【技术特征摘要】
1.一种重组融合蛋白液体制剂，其特征在于，所述液体制剂包含：重组融合蛋白、缓冲盐、稳定剂、表面活性剂和无菌注射用水，其中，所述重组融合蛋白的浓度为5～45mg/mL；所述缓冲盐为磷酸盐、醋酸盐中的一种或两种以上的组合，且所述盐的浓度为5-25mmol/L；所述稳定剂为氯化钠、组氨酸、或精氨酸，或者所述稳定剂为精氨酸和蔗糖的组合；且所述氯化钠的浓度为100-200mmol/L；所述组氨酸的浓度为50-350mmol/L；所述精氨酸的浓度为50-350mmol/L；所述蔗糖的浓度为1重量％～15重量％，以所述液体制剂的总重量计；所述表面活性剂为聚山梨酯20，且所述表面活性剂的浓度为0.01重量％～0.08重量％，以所述液体制剂的总重量计；且所述液体制剂的pH为5.5～7.0；所述重组融合蛋白为重组人血管内皮生长因子受体-抗体-人补体受体1融合蛋白，氨基酸序列如SEQIDNO.:1或SEQIDNO.:3所示。2.如权利要求1所述的液体制剂，其特征在于，所述缓冲盐的浓度为8-22mmol/L。3.如权利要求1所述的液体制剂，其特征在于，所述稳定剂为精氨酸和蔗糖的组合。4.如权利要求1所述的液体制剂，其特征在于，所述氯化钠的浓度为120-180mmol/L。5.如权利要求3...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪音爵，李俊峰，黄小乐，
申请(专利权)人：信达生物制药苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32