聚胺衍生物制造技术

本发明专利技术公开了用于生物活性分子的系统和局部递送的化合物、组合物和方法。

【技术实现步骤摘要】
聚胺衍生物本申请是申请日为2010年3月19日、申请号为201080022046.3、专利技术名称“聚胺衍生物”的专利申请的分案申请。专利
本专利技术涉及对称聚胺衍生物及包含这种化合物的制剂，更具体的说，涉及部分丙烯酰化并任选载有辅助基团的聚胺衍生物。这种化合物可用于向细胞中引入siRNA，使目标序列的表达沉默，在体内递送siRNA，以及治疗疾病和/或失调。
技术介绍
本专利技术的化合物、组合物和方法可用于依靠生物活性分子向细胞、组织和器官中的有效转移的治疗、研究和诊断用途。以下讨论仅提供用于理解本专利技术。各种治疗化合物诸如抗病毒剂和化学治疗剂的细胞递送通常会妥协于两项限制。首先，许多治疗剂的选择性通常很低，导致对正常组织具有高毒性。其次，很多化合物进入活细胞中的输运则受限于复杂的细胞膜系统。特定的转运子允许营养物质或调节分子的选择性进入，而排除了大多数外源分子，诸如核酸和蛋白。许多策略可用于改善化合物向细胞的输送，包括使用脂质载体、生物可降解的聚合物以及各种轭合物系统。大多数已被充分研究的用于改善外源核酸向细胞内的输送的方法涉及使用病毒载体或阳离子脂质以及相关的细胞转染剂。病毒载体可用于有效地将基因输送到一些细胞类型中，但它们通常不能用于向细胞中引入化学合成的分子。一种替代方法是使用加入阳离子脂质的递送制剂，所述递送制剂通过一端与核酸相互作用并通过另一端与脂质或膜系统相互作用。合成核酸以及质粒可使用细胞转染剂来递送，尽管这种化合物的效用通常受细胞类型特异性、转染期间对低血清的要求以及毒性的限制。递送生物活性分子的另一种方法涉及轭合物的使用。轭合物通常根据特定分子被选择性地输送到特定细胞中的能力来选择，例如经由受体介导的细胞内吞作用。通过将所关注的化合物连接到可被主动输送穿过细胞膜的分子，可实现该化合物到细胞或特定细胞器官中的有效递送。可选地，能穿透细胞膜但不具有活性输送机制的分子(诸如各种亲脂性分子)可用于递送所关注的化合物。能用作轭合物的分子的例子包括但不限于肽、激素、脂肪酸、维生素、黄酮、糖、报道分子、报道酶、螯合剂、卟啉、嵌入剂以及能够通过主动输送或被动输送穿透细胞膜的其他分子。向特定细胞类型(例如癌细胞或对特殊组织和器官具有特异性的细胞)递送化合物可通过利用与特定细胞类型有关的受体来进行。特殊受体在特定癌细胞中过度表达，包括高亲和力的叶酸受体。例如，高亲和力的叶酸受体是在多种瘤(neoplastic)组织(包括乳腺、卵巢、脑、结肠直肠、肾和鼻咽部肿瘤)中过度表达、但在正常组织中表达程度非常有限的肿瘤标记物。使用叶酸类轭合物输送外源化合物穿过细胞膜能为疾病治疗和诊断提供靶向递送方法，并且能提供治疗化合物所需剂量的减少。此外，治疗生物可利用度、药效学和药代动力学参数可通过使用生物轭合物(包括叶酸生物轭合物)来进行调控。生物活性的蝶酰基低聚-L-谷氨酸盐的合成已有报道。特定寡核苷酸-叶酸轭合物以及用特定轭合物基团修饰的寡核苷酸的固相合成方法已有描述。使用生物素和叶酸轭合物来增强外源分子(包括特定寡核苷酸)的跨膜输送已见报道。一些叶酸轭合物(包括带有连接到轭合物核酸部分的亚磷酰胺的特定核酸叶酸轭合物)以及合成这些叶酸轭合物的方法已见描述。可用于合成特定类型的叶酸-核苷酸轭合物的中间体，α-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧羰基]叶酸的合成已有报道。化合物向其它细胞类型的递送可通过利用与特定类型的细胞(诸如肝细胞)相关的受体来进行。例如，利用受体介导的细胞内吞作用的药物递送系统已被用于实现药物寻靶以及药物摄取增强。脱唾液酸糖蛋白受体(ASGPr)是只有肝细胞才有的，并且其结合支化的半乳糖-终端的糖蛋白，诸如脱唾液酸血清类粘蛋白(ASOR)。这种糖蛋白或合成糖轭合物与受体的结合发生时的亲和力强烈取决于低聚糖链的支化程度，例如，三天线型结构比两天线型或单天线型链的结合具有更大的亲和力(这种高特异性的例子通过使用N-乙酰基-D-氨基半乳糖作为糖部分，其与半乳糖相比对受体具有更高的亲和力)。这种“聚类效应(clusteringeffect)”也已被描述用于甘露糖基-封端的糖蛋白或糖轭合物的结合与摄取。使用半乳糖和氨基半乳糖类轭合物来输送外源化合物穿过细胞膜可提供治疗诸如HBV和HCV感染的肝疾病或肝细胞癌的靶向递送方法。使用生物轭合物也可提供治疗所需的治疗化合物的所需剂量的减少。此外，治疗生物可利用度、药效学和药代动力学参数可通过生物轭合物的使用来进行调控。若干研究组已开发出多种肽类细胞转运蛋白。这些肽能够在体内和体外高效地跨越细胞膜。这样的融合肽(fusogenicpeptide)的例子包括ANTENNAPEDIA同源域的16-氨基酸片段，果蝇转录因子；表达带有或不带NLS域的卡波济成纤维细胞生长因子的信号序列的疏水区的17-mer片段；凯门鳄属窄吻鳄(caimancrocodylus)的Ig(5)轻链的17-mer信号肽序列；HIV包膜糖蛋白gp4114的17-氨基酸融合序列；HIV-1Tat49-57片段；由神经肽甘丙肽(neuropeptideglanine)的N-终端片段和膜相互作用黄蜂毒液肽胡蜂蜂毒肽(mastroporan)组成的转运肽(transportan)A–无嵌合(achimeric)27-mer；以及衍生自流感病毒血凝素包膜糖蛋白的24-mer。这些肽被成功地用作反义寡去氧核糖核苷酸-肽轭合物的部分以用于不带有脂质的细胞培养转染。在许多情况中，这样的轭合物显示了比使用脂质递送转染的母本寡核苷酸更好的细胞培养功效。另外，使用噬菌体展示技术已鉴定了若干在体内器官寻靶和肿瘤寻靶肽。肿瘤寻靶肽与阿霉素的轭合已显示显著改善了毒性曲线，并显示了阿霉素在体内鼠类癌症模型MDA-MB-435乳腺癌中的功效提高。生物活性分子的细胞内递送的另一种方法涉及阳离子聚合物的使用(例如，已描述了使用高分子量赖氨酸聚合物来提高多种分子跨越细胞膜的输送)。已披露了用于输送药物和大分子跨越生物膜的特定方法和组合物，其中所述药物或大分子共价连接到由6到25个子单位构成的输送聚合物上，所述子单位中的至少50％包含胍或脒侧链。所述输送聚合物优选为由全部D-、全部L-或D-与L-精氨酸混合物组成的聚精氨酸肽。还描述了用于递送药物和其它药剂跨越上皮组织(包括皮肤、胃肠道、肺上皮组织和血脑屏障)的某些聚赖氨酸和聚精氨酸化合物。还已公开了用于药物的眼内递送的某些聚精氨酸化合物和某些聚赖氨酸与聚精氨酸化合物。还已公开了某些环糊精聚合物组合物，其包括交联的阳离子聚合物组分以及特定的脂质类制剂。生物活性分子的细胞内递送的另一种方法涉及脂质体或其它颗粒形成组合物的使用。自从在1965年首次描述了脂质体之后，已持续关注和致力于开发用于药学活性化合物的脂质类载体系统的领域。脂质体是有吸引力的药物载体，因为它们保护生物分子免于降解同时改善其细胞摄取。最常用于递送聚阴离子(例如DNA)的脂质体制剂种类之一是含有阳离子脂质的那些。脂质聚集体可用单独使用阳离子脂质或包含其它脂质及两性分子(诸如磷脂酰乙醇胺)的大分子形成。本领域中公知脂质制剂组合物以及其制备方法对所得的阴离子大分子-阳离子脂质聚集体的结构和尺寸有影响。这些因素可进行调控以优化聚阴离子在体外和体本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含式A的化合物和式B的化合物的组合物：其中式A和式B中的n1、n2和n3独立地是1、2、3或4；式A和式B中的X和X’独立地是化学键、氧或氮；式A和式B中的R1和R2独立地是任选含有1‑4个双键或三键的C8‑C25烃基团；且在式A中，G是氢；且在式B中，G是聚合物部分。

【技术特征摘要】
2009.03.20 US 61/161,8281.包含式A的化合物和式B的化合物的组合物：其中式A和式B中的n1、n2和n3独立地是1、2、3或4；式A和式B中的X和X’独立地是化学键、氧或氮；式A和式B中的R1和R2独立地是任选含有1-4个双键或三键的C8-C25烃基团；且在式A中，G是氢；且在式B中，G是选自聚氧化烯、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、聚二甲基丙烯酰胺、聚乙烯醇、葡聚糖、聚(L-谷氨酸)、苯乙烯马来酸酐、聚-N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺或聚二乙烯醚马来酸酐的聚合物部分。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述聚合物是聚氧化烯。3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述聚氧化烯是聚氧乙烯。4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述式A的化合物是二油酰基单胺而所述式B的化合物是mPEG-二油酰基单胺。5.根据权利要求1所述的组合物，其中式A和式B中的n1、n2和n3都是1，且式A和式B中的X和X’都是化学键。6.根据权利要求1所述的组合物，其中式A和式B中的R1和R2独立地是含有1个双键的C14-C20烃基团。7.根据权利要求1所述的组合物，其中式A和式B中的-C(O)X-R1和-C(O)X’-R2均表示油酰基团。8.根据权利要求1所述的组合物，其中所述式A的化合物与所述式B的化合物在制剂中的比率为1:1，2:1，4:1或10:1。9.一种制剂，包含如权利要求1所述的组合物以及选自下组的分子：(a)核蛋白体RNA；RNA或DNA的反义多核苷酸；适配体；核酶；siRNA；shRNA；miRNA；以及编码治疗有效蛋白的遗传DNA、cDNA或mRNA的多核苷酸；或(b)蛋白、肽、胆固醇、激素、小分子药物化合物、维生素和辅因子。10.包含生物活性分子、式A的化合物和式B的化合物的制剂：其中式A和式B中的n1、n2和n3独立地是1、2、3或4；式A和式B中的X和X’独立地是化学键、氧或氮；式A和式B中的R1和R2独立地是任选含有1-4个双键或三键的C8-C25烃基团；且在式A中，G是氢；且在式B中，G是选自聚氧化烯、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、聚二甲基丙烯酰胺、聚乙烯醇、葡聚糖、聚(L-谷氨酸)、苯乙烯马来酸酐、聚-N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺或聚二乙烯醚马来酸酐的聚合物部分；以及其中所述生物活性分子选自核蛋白体RNA；RNA或DNA的反义多核苷酸；适配体；核酶；siRNA；shRNA；miRNA；以及编码治疗有效蛋白的遗传DNA、cDNA或mRNA的多核苷酸。11.根据权利要求10所述的制剂，其中所述聚合物是聚氧化烯。12.根据权利要求11所述的制剂，其中所述聚氧化烯是聚氧乙烯。13.根据权利要求10所述的制剂，其中所述式A的化合物是二油酰基单胺而所述式B的化合物是mPEG-二油酰基单胺。14.根据权利要求10所述的制剂，其中式A和式B中的n1、n2和n3都是1，...

【专利技术属性】
技术研发人员：G斯洛伯德金，R康戈，M玛塔，J费威尔，K安沃，BJ斯帕克斯，
申请(专利权)人：CLSN实验室股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US