本发明专利技术公开了一种拟南芥糖基转移酶基因UGT76E11在提高植物耐盐性中的应用，其中所述糖基转移酶基因UGT76E11的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，其是通过RT-PCR技术从拟南芥中克隆获得。本发明专利技术利用基因UGT76E11构建植物过表达载体，进行植物转基因操作，获得转基因植物。检测表明转基因植物的耐盐性得到明显提高，预示本发明专利技术实施后将会创造新型耐盐植物，可用于后续的作物品种改良，对我国农业生产具有重大意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种糖基转移酶基因的应用，尤其涉及一种拟南芥糖基转移酶基因 UGT76E11在提高植物耐盐性中的应用，属于基因工程领域。
技术介绍
盐胁迫是影响植物生长和粮食产量的最主要的环境因素之一，也是植物需要适应 的逆境之一。一般情况下，土壤中含盐量超过0.2%时，就能引发盐胁迫。据不完全统计，全 世界有800多万平方公里的土地受到不同程度盐渍化的影响，约占世界陆地面积的6%，并 且这一数字正在逐步扩大（Munns and Tester, 2008)，而我国也有许多盐渍化土地，全国约 有1亿亩的盐碱耕地和3亿亩左右的盐碱荒地，严重制约着农作物产量的提高。因此，开发 利用盐碱地，提高盐渍化土地上的作物产量，对我国的农业发展有着极其重要的现实意义。 基因工程技术的应用可以获得具有耐盐性的农作物，有望缓解土壤的盐渍化对农作物产量 的影响。 糖基转移酶是专门负责催化糖基化修饰反应的酶类，拟南芥糖基转移酶家族1中 共有119个可能的糖基转移酶。虽然这些糖基转移酶基因的序列已公开于核酸序列数据 库中，但是这些糖基转移酶基因的特殊功能还远远没有被揭示，如拟南芥糖基转移酶家族1 中的UGT76E11基因能够增强转基因植物耐盐性的功能和应用目前未见报道。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术的目的是提供了 一种拟南芥糖基转移酶基因 UGT76E11在提高植物耐盐性中的应用。 本专利技术所述拟南芥糖基转移酶基因 UGT76E11在提高植物耐旱性中的应用。 其中：所述糖基转移酶基因 UGT76E11的核苷酸序列如SEQ ID No. 1所示。所述植 物优选是十字花科植物，所述十字花科植物优选是拟南芥、白菜、油菜、甘蓝或芥菜。 本专利技术利用SEQ ID No. 3和SEQ ID No. 4所示的引物序列，通过RT-PCR技术从拟 南芥中克隆糖基转移酶基因 UGT76E11，然后利用该基因构建植物过表达载体，进行植物转 基因操作，获得转基因植物。检测表明转基因植物的耐盐性得到显著提高（见图1、图2、图 3、图4)，证明拟南芥糖基转移酶家族1中的UGT76E11基因能够具有增强转基因植物耐盐性 的功能。 本专利技术实施后可能带来的有益效果： 实验证实，应用本专利技术所述拟南芥糖基转移酶基因 UGT76E11进行植物转基因操 作，可以显著提高转基因植物的耐盐性（见附图1、附图2、附图3和附图4)。预示本专利技术实 施后将会创造新型耐盐植物，可用于后续的作物品种改良，对我国农业生产具有重大意义。【附图说明】 图1.种子在含盐培养基上的萌发实验统计结果。 图中WT为拟南芥对照植物，OE-69和OE-87为UGT76E11的两个转基因过表达株 系。MS(-)表示不含盐的培养基，125mM NaCl表示含有125mM NaCl的MS培养基，其余类 推。统计结果显示两个过表达株系在含盐的培养基上，萌发率明显高于野生型对照。这说 明UGT76E11基因过表达之后明显增强了植株萌发期的耐盐性。 图2.在含盐培养基上根的生长实验结果统计。 图中WT为拟南芥对照植物，OE-69和OE-87为UGT76E11的两个转基因过表达株 系。MS(-)表示不含盐的培养基，IOOmM NaCl表示含有IOOmM NaCl的MS培养基，其余类推。 实验结果显示在含盐培养基上，两个过表达株系的根长明显高于野生型。因为在株系OE-87 中UGT76E11的表达水平高于OE-69,株系OE-87表现出更强的根系生长。这说明UGT76E11 基因过表达之后能够增强植株的抗盐性。 图3.伊文思蓝（Evans Blue)染色实验结果统计。 图中WT为拟南芥对照植物，OE-69和OE-87为UGT76E11的两个转基因过表达株 系。"Control"表示未经过盐水胁迫的叶片染色，" IOOmM NaCl"表示经过IOOmM NaCl胁 迫处理的叶片进行染色，其余类推。实验结果发现在盐胁迫处理以后，两个过表达株系的染 色比野生型对照浅很多，说明过表达株系经过盐处理之后细胞死亡比野生型对照少。证明 UGT76E11基因可用于增强植物耐盐性。 图4.植物苗期浇盐水实验。 图中WT为拟南芥对照植物，0E-69和0E-87为UGT76E11的两个过表达株系。浇 盐水之前转基因株系与对照生长状态一致，浇盐水之后发现野生型对照几乎全部死亡（叶 片变白），而两个过表达株系只有少量叶片出现死亡，这说明UGT76E11基因过表达之后明 显增强了植株的耐盐性。【具体实施方式】 实施例1克隆拟南芥糖基转移酶基因 UGT76E11 1.拟南芥糖基转移酶基因 UGT76E11的克隆 通过公开网站http://www. cazy. org获得UGT76E11基因的cDNA序列。根据cDNA 序列设计引物，正向引物为76E11-F: 5 ' -GGATCCATGGAGGAAAAGCCGGCGGG-3 '，反向引物为 76E11-R:5' -GTCGACTCATAGAGTCCTCATGTAGTGTACAAACTC-3'。利用 TRIzol 试剂盒提取拟南 芥RNA，RT-PCR方法扩增UGT76E11基因的全长cDNA序列。将cDNA克隆的过程是先经过 BamHI和Sal I酶切，之后连入相应酶切的pBluescript II SK(+)载体中，构建成测序中间 载体，称为PK76E11，然后用载体进行基因全长PCR扩增和BamHI和Sal I酶切验证，最后进 行序列测定，验证克隆序列的正确性。 2.拟南芥糖基转移酶基因 UGT76E11的序列信息与特性分析 UGT76E11基因的编码区cDNA为1356bp，编码451个氨基酸的57. 6kDa蛋白，C端 具有44个氨基酸的PSPG盒，为植物次生代谢物糖基转移酶所共同具有的保守序列。 3.拟南芥糖基转移酶基因 UGT76E11受逆境胁迫诱导表达 将两周大小的野生型拟南芥（Col-O)小苗用200mM NaCl (盐胁迫）、300mM甘露醇 (渗透胁迫）分别处理311、611、1211、2411，以蒸馏当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
拟南芥糖基转移酶基因UGT76E11在提高植物耐盐性中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：侯丙凯，李琴，李燕洁，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：山东;37
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