小花山小橘中分离的抗虫成分制造技术

本发明专利技术涉及一种从植物小花山小橘中分离的抗虫成分。本发明专利技术还从小花山小橘提取分离出一种具有害虫拒食性的新化合物——式I。用小花山小橘的提取物或式I化合物可制备抗虫制品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种从植物小花山小橘中分离的抗虫成分，包括粗提物和一种新化合物。 
技术介绍
小花山小橘（G.parviflora（Sims）Kurz），芸香科山小橘属，为灌木或小乔木。小花山小橘的根及叶可以作草药，其味苦，微辛，气香，性平。其中根行气消积，化痰止咳；而叶则有散瘀消肿的功效。可用于感冒咳嗽，胃腹胀痛，消化不良，跌打瘀痛，风湿关节痛等。对于小花山小橘，不论该植物本身，或其分离出的化学成分的生物活性的研究，都少有报道。 
技术实现思路
本专利技术的目的是从天然植物中提取分离出具有害虫拒食性的新物质。 本专利技术发现小花山小橘的提取物具有害虫拒食性。 本专利技术采用硅胶柱层析方法，从小花山小橘提取分离出一种新化合物——式I，经鉴定，其化学结构式如下所示： 式I的化学命名是3-amino-6,8-dimethoxy-3-(2-oxopropyl)-[1,5]dioxocane-2,4,7-trione，（3-氨基-6,8-二甲氧基-3-(2-羰基丙基)-[1,5]二氧八环-2,4,7-三酮）。 将式I化合物进行赤拟谷盗成虫拒食实验证实，式I具有对害虫的拒食活性功能。 可将式I化合物制成各种药物可接受的盐和制剂，用于制备抗虫制品。 经试验证实，式I化合物对害虫拒食效果较为显著（见实施例）。 本专利技术优点： 式I化合物是从小花山小橘植物中提取，在自然条件下易分解，不会引起生物富集现象，并且对人畜安全，可以作为天然农药长期使用而不会产生环境污染的问题。 附图说明图1是式I化合物的1H-NMR谱图； 图2是式I化合物的COSY谱图； 图3是式I化合物的HSQC谱图； 图4是式I化合物的HMBC谱图； 图5是式I化合物的APT谱图； 图6是式I化合物的ESI谱图。 具体实施方式式I化合物的分离 仪器： Bruker ACF300和AMX500超导核磁共振仪，瑞士Bruker公司； 玻璃色谱柱：直径与长度85×550mm，40×400mm、35×400mm、30×400、25×400mm、20×350mm，购于北京博美玻璃有限公司。 材料与试剂： 层析硅胶（200-300目）采自青岛海洋研究所， 薄层层析硅胶GF254购于青岛海洋化工有限公司； 石油醚、乙酸乙酯、乙醇、丙酮等均购自北京化学试剂公司； 95%酒精采购自北京广达恒益有限公司。 分离方法 1小花山小橘乙醇提取物一级硅胶柱层析分离 首先采用薄层层析确定起始洗脱剂。将样品用丙酮稀释，用毛细管点样于GF254薄层板上，在层析缸中加入1ml按一定比例配比的石油醚：乙酸乙酯：无水乙醇洗脱剂。将点好样品的薄层板放入层析缸中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.3-0.5cm，盖上缸盖，待展开至距薄层板上沿0.5-1.0cm时，取出薄层板，用电吹风吹干溶剂，在紫外灯下观察展开情况，随后将薄层板放入碘缸中显色，当最前沿斑点的Rf值在0.2～0.3时，即可确定此展开剂为起始洗脱剂。 采用湿装法装柱，将玻璃色谱柱（85×550mm）垂直固定在铁架台上，在柱的下端塞少许脱脂棉花，倒入一药匙石英砂，防止硅胶泄漏。将200～300目硅胶放入烧杯中，加入适当量的洗脱剂，经充分搅拌，将硅胶内的气泡除去后再加入柱内，一边沉降一边添加。硅胶加完后，仍使洗脱剂流滴一段时间，然后使色谱柱中高于硅胶面上的洗脱剂几乎全部流入接受瓶内。然后用橡皮塞在色谱柱外敲打，将硅胶柱内的气泡赶净。色谱柱装好后，使其静置过夜，以压实硅胶，提高分离效果。 样品的加入，采用干法加样。待硅胶柱静置过夜后，先将色谱柱中硅胶面上的多余洗脱剂放出，丙酮溶解样品加入适当量的200-300目硅胶拌匀，搅拌或者在用吹风机吹干溶剂成粉末状，用小勺将拌匀后的样品缓慢加入色谱柱中。样品加入后，用滴管吸取少量洗脱剂缓缓冲洗色谱柱壁，打开活塞将洗脱剂慢慢放出，待柱面上没有洗脱剂时，将一块脱脂棉平铺于柱面，压上玻璃棒，防止加入洗脱剂时破坏色谱柱面，加入洗脱剂后，开始分离。 洗脱剂采用石油醚-乙酸乙酯-乙醇，按极性从小到大梯度洗脱，采用等馏分收集法（500mL）收集，使用旋转蒸发仪回收溶剂，在回收过程中将馏分经薄层层析（TLC）检验后将成分相同或相似者合并。洗脱时先加起始洗脱剂，每个洗脱剂梯度一般收集5-6个500mL馏分，按从小到大增加洗脱剂（石油醚：乙酸乙酯：无水乙醇）极性。加到50%无水乙醇后，当收集5-6个收集瓶后，洗脱剂不再倒回色谱柱内，待到柱内表面没有溶剂时，加入无水乙醇洗脱，收集5-6个收集瓶时，洗脱剂不再倒回色谱柱内，待到柱内表面没有溶剂时，加入水洗脱，洗脱下来的溶液用三氯甲烷萃取，萃取液经旋转蒸发仪回收试剂。小花山小橘乙醇提取物经一级柱层析分离，并通过薄层层析检测合并后相同的组分，然后继续进行二级硅胶柱层析分离。 2小花山小橘乙醇提取物二级硅胶柱层析分离 采用薄层层析检验，确定各部分起始洗脱剂。方法同3.2.1。 采用湿法装柱，玻璃色谱柱规格为35×400mm，30 ×400mm，40×400mm，其余同3.2.1方法。 样品的加入，采用干法加样。方法同3.2.1。 二级柱层析分离采用等梯度洗脱，按等馏分收集法（150mL）收集，使用旋转蒸发仪回收溶剂，经薄层层析（TLC）检验后将成分相同或相似者合并。当活性成分成功洗脱后，洗脱液不再倒回色谱柱内，待到柱内表面没有溶剂时，加入无水乙醇洗脱，收集4-5个收集瓶后，洗脱液不再倒回色谱柱内，直到没有洗脱液可收集。 3NMR和MS分析 将样品用氘代氯仿（CDCl3）溶解，加入核磁管，由北京师范大学分析测试中心核磁共 振实验室应用Bruker DRX500核磁共振波谱仪测定1H-NMR，13C-NMR，COSY，HSQC，HMBC和APT。由北京师范大学放射性药物教育部重点实验室应用Quattro Micro串联四级杆质谱仪测定EI和ESI。 4结果与分析 通过NMR和MS测定，分析鉴定出新结构化合物生物碱，为无色油状物，结构见式I，分子式为C11H15NO8，改良碘化铋钾反应为良性，说明结构中含N。 （+）ESI-MS m/s：290.6[M+H]+。1H-NMR（500MHz,CDCl3）δ（ppm）:5.45（2H,s,6,8-H），3.78（6H,s,6,8-OCH3），3.03（2H,s,9H），2.22（3H,s,11H）；13C-NMR（125MHz,CDCl3）δ（ppm）:207.3（C-10），186.7（C-7），170.2（C-2,4）100.5（C-6,8），71.2（C-3），56.4（8-OCH3）,56.2（6-OCH3）,47.3（C-9），31.8（C-11）。13C-NMR结合APT谱，有11个碳信号，其中δ170.2，δ186.7和207.3为四个羰基的碳信号，δ56.2和δ本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有害虫拒食性的化合物，其结构如式I：

【技术特征摘要】
1.一种具有害虫拒食性的化合物，其结构如式I：
2.权利要求1所述的式I化合物，包括其药物可接受的盐。
3.权利要求1或2所述的式I化合物在制备抗虫制品中的应用。
4.含权利要求1或2所述的式I化...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘志龙，刘昕超，周立刚，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11