microRNA‑326的抑制剂在制备治疗白内障的药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及microRNA‑326的抑制剂在制备治疗白内障的药物中的应用。本发明专利技术通过实验证明microRNA‑326可以抑制FGF1的表达，从而下调betaB2晶体蛋白的表达，而betaB2晶体蛋白含量的变化是白内障发生的关键性因素，betaB2晶体蛋白表达量的下调将导致白内障。本发明专利技术提示可通过抑制microRNA‑326来治疗白内障，同时microRNA‑326可作为白内障诊断的标志物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学
，具体地说，涉及microRNA-326的抑制剂在制备 治疗白内障的药物中的应用。
技术介绍
凡是各种原因如老化、遗传、局部营养障碍、免疫与代谢异常、外伤、中毒、辐射等， 都能引起晶状体代谢紊乱，导致晶状体蛋白质变性而发生混浊，称为白内障，此时光线被混 浊晶状体阻扰无法投射在视网膜上，导致视物模糊。多见于40岁以上，且随年龄增长而发 病率增多。 microRNAs(miRNAs)是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码 RNA。成熟的miRNAs是由较长的初级转录物经过一系列核酸酶的剪切加工而产生的，随后 组装进RNA诱导的沉默复合体（RNA-inducedsilencingcomplex，RISC)，通过碱基互补 配对的方式识别靶mRNA，并根据互补程度的不同指导沉默复合体降解靶mRNA或者阻遏靶 mRNA的翻译。研宄表明miRNAs参与各种各样的调节途径，包括发育、病毒防御、造血过程、 器官形成、细胞增殖和凋亡、脂肪代谢等等。 microRNA-326在调控多种肿瘤的发病中起重要作用，有文献报道，microRNA-326 的表达与食管癌的预后相关；在结直肠癌、神经胶质瘤等肿瘤中也发挥重要作用，在多发性 硬化病人中表达上调且通过作用于CD47发挥作用，在肺纤维化病人中调控TGF-0因子的 促纤维化作用，也有报道microRNA-326能作为临床药物治疗的候选检测靶点。 betaB2晶状体蛋白（CRYBB2)与白内障的产生关系密切，有研宄表明，在白 内障病人晶状体中其表达下降（HuangCH,WangYT,TsaiCF,ChenYJ,LeeJS,Chiou SH.Phosphoproteomicscharacterizationofnovelphosphorylatedsitesoflens proteinsfromnormalandcataractoushumaneyelenses.MolecularVision2011 ； 17:186-198.)，CRYBB2基因突变常发生在外显子6上，造成氨基酸折叠异常，从而造成晶状 体结构异常，减弱了在其水溶状态下的稳定性，引起晶状体透明性发生改变，最终导致先天 性白内障的发生（ChenW，ChenX，HuZ，LinH，ZhouF，LuoL，ZhangX，ZhongX，YangY，Wu CjLinZjYeSjLiuY.AMissenseMutationinCRYBB2LeadstoProgressiveCongenital MembranousCataractbyImpactingtheSolubilityandFunctionofbB2-Crystallin. PLoS0ne.2013;8(ll):e81290.)。本课题组构建了CRYBB2基因敲除小鼠模型（张军， 黄才国，李闻捷，WeiWeng，汪佳祺.0B2晶体蛋白基因敲除小鼠模型的建立.第二军 医大学学报.2006 ;27 (11) : 1246-1248.)，并一直进行CRYBB2的相关研究，且在研究中发 现CRYBB2基因敲除小鼠在出生后数月内发生皮质性白内障，其程度随年龄增长而加重 (ZhangJ,LiJ,HuangC，XueL，PengY，FuQ，GaoL，ZhangJ，LiW.TargetedKnockout oftheMouse0B2_crystallinGene(BetaB2)InducesAge-RelatedCataract.Invest OphthalmolVisSci，2008 ;49 (12):5476-5483.)。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供microRNA-326的抑制剂的用途。 本专利技术的再一的目的是，提供一种用于治疗白内障或晶状体浑浊的DNA序列。 本专利技术的另一的目的是，提供一种用于治疗白内障或晶状体浑浊的基因载体。 本专利技术的第四个目的是，提供用于检测microRNA-326含量的试剂的用途。 为实现上述第一个目的，本专利技术采取的技术方案是： 第一方面，。 第二方面，microRNA-326的抑制剂在制备治疗晶状体浑浊的药物中的应用。 第三方面，microRNA-326的抑制剂在制备药物中的应用，所述的药物用于治疗 betaB2晶状体蛋白下调引起的疾病。 所述的microRNA-326的抑制剂选自可以降低microRNA-326含量的小干扰RNA、 dsRNA、shRNA、微小RNA、反义核酸；或能表达或形成所述小干扰RNA、dsRNA、微小RNA、反义 核酸的构建物。 优选地，所述的microRNA-326 的抑制剂为SEQIDNO. 10 第 6-25bp或SEQID NO. 11第6-25bp所示的DNA序列。 优选地，所述的microRNA-326的抑制剂为包含SEQIDNO. 10第6-25bp或SEQID NO. 11第6-25bp所示DNA序列的基因载体。 为实现上述第二个目的，本专利技术采取的技术方案是： 一种用于治疗白内障或晶状体浑浊的DNA序列，所述的DNA序列如SEQIDNO. 10 第 6-25bp或SEQIDNO. 11 第 6-25bp所示。 为实现上述第三个目的，本专利技术采取的技术方案是： 一种基因载体，所述的基因载体含有如SEQIDNO. 10第6-25bp或SEQIDNO. 11 第6-25bp所示的DNA序列。 为实现上述第四个目的，本专利技术采取的技术方案是： 用于检测microRNA-326含量的试剂在制备诊断白内障或晶状体浑浊的试剂中的 应用。 本专利技术优点在于： 1、本专利技术通过实验证实microRNA-326可以抑制FGFl的表达，从而下调betaB2 的表达，而betaB2晶体蛋白含量的变化是白内障发生的关键性因素，betaB2晶体蛋白表 达量的下调将导致白内障。本专利技术提示可通过抑制microRNA-326来治疗白内障，同时 microRNA-326可作为白内障诊断的标志物； 2、本专利技术提供了一种microRNA-326的抑制剂，其抑制作用十分显著，可用于白内 障或晶体浑浊的治疗。【附图说明】 图1.双荧光素酶报告基因载体pmirGLO图谱。 图2?表达载体pLKO. 1图谱。 图3.绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-Nl图谱。pEGFP-Nl载体的限制性酶切图和多 克隆位点（MCS)。（单一的限制性位点被加粗）。NotI位点位于EGFP终止子之后。XbaI位点（*)的DNA被CL0NTECH公司甲基化。如果你想要用酶消化该载体，你需要将该载体转 化入dam-型大肠杆菌制备新的DNA。 图4.1^1?隱芯片筛选图，图片显示11111?-326、11111?-204、11111?-330-5口在新生鼠中特异 性低表达，而在成年鼠中高表达，且与小鼠视觉系统相关。 图5.betaB2基因敲除小鼠血清中miRNA筛查，结果显示CRYBB2基因敲除后 miR-326和miR-204的表达均下降，miR-326表达差异最明显。 图6.转基因小鼠基因型鉴定，ABC三条片段均扩增出来的为杂合子，仅扩增出B条 带的为野生型，仅扩增出A、C两条片段的为纯合子。 本文档来自技高网...

【技术保护点】
microRNA‑326的抑制剂在制备治疗白内障的药物中的应用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：高谦，任含笑，陶海波，李闻捷，牛紫光，贾音，沈炜，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：上海;31