本发明专利技术涉及一株猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)菌种，S株，该菌株为猪肺炎支原体新分离株，可在无细胞培养基上稳定生长，生长滴度可达到109～1010CCU/mL，经家兔和仔猪免疫试验证实其免疫原性良好；该菌株P97基因的R1区氨基酸含有11个AA(V/T)PKE/V的连续氨基酸序列，可作为其独特的分子生物学标记，该株猪肺炎支原体菌种可用于制备猪肺炎支原体灭活疫苗。
【技术实现步骤摘要】
【专利说明】
本专利技术涉及，属于兽医微生物学领域。
技术介绍
猪支原体肺炎又称猪喘气病，是由猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae， Mhp)引起的一种猪的接触性慢性呼吸道疾病，呈世界普遍流行。据资料报道，世界各地 分离的猪肺炎支原体均属于同一血清型，但不同分离株之间基因组间有较大差异。1992 年 Frey 等(Frey, J. , Haldimann, A. &Nicolet, J. (1992). Chromosomal heterogeneity of various Mycoplasma hyopneumoniae field strains. Int J Syst Bacteriol 42, 275-280)首次证实了猪肺炎支原体不同分离株间基因组的差异，Artiushin和 Minion (1996^) (Artiushin, S. Minion, F. C. (1996). Arbitrarily primed PCR analysis of Mycoplasma hyopneumoniae field isolates demonstrates genetic heterogeneity. Int J Syst Bacteriol 46, 324-328.)进一步证实了 Frey 的观点，Kokotovic 等（1999 年)(Kokotovic, B. , Friis, N. F. , Jensen, J. S. Mhrens, P. (1999). Amplif ied-fragment length polymorphism fingerprinting of Mycoplasma species. J Clin Microbiol 37, 3300-3307.)的研宄结果也得出了同样的结论。 支原体是可以自我复制的最小原核生物，生长缓慢，对培养基的要求较高。与其他 普通支原体相比，Mhp生长更为缓慢，对体外培养的要求显得更苛刻，被称为"挑剔的微生 物"。国内外专家学者通过长期研宄，研制了多种类型的营养培养基用于Mhp的分离、培养， 如A26支原体体形培养基、KM2培养基、Friis培养基和牛心汤培养基等。不过，这些培养依 然存在或多或少的不足，培养效果仍然不能令人满意。因此分离出抗原性、免疫原性好的疫 苗株具有十分重要的意义。 猪肺炎支原体基因组含有稀有密码子，至今被鉴定的抗原蛋白只有少数几种。目 前认为猪肺炎支原体的主要抗原蛋白有P97、P65、P46、P36等，其中P46是Mhp具有很强种 属特异性的膜蛋白，其能够引起机体早期免疫反应。1995年，Futo等（Futo, S.，Seto, Y.，Mi tsuse, S. , Mori, Y., Suzuki, Τ. &Kawai, Κ. (1995). Molecular cloning of a 46-kilodalton surface antigen(P46)gene from Mycoplasma hyopneumoniae: direct evidence of CGG codon usage for arginine. J Bacteriol 177,1915-1917·)发现 P46 基因（1257bp)，在其 ORF中包含I个CGG(在Mhp中编码精氨酸，在其他支原体中为无义密码子）和3个TGA密 码子（在支原体中编码色氨酸，在通用密码子中为终止密码子）。P97是Mhp的主要粘附因 子，不同的毒株其Rl区包含不同个数的AAKPV/E基元（Hsu, T.，Artiushin, S.&Minion，F. C. (1997). Cloning and functional analysis of the P97 swine cilium adhesin gene of Mycoplasma hyopneumoniae. J Bacteriol 179,1317-1323)。因此 P46 蛋白和 P97 蛋白 基因组的序列测定，可作为猪肺炎支原体不同毒株鉴定的分子生物学标记。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株猪肺炎支原体菌种，该菌株在无细胞培养基上生长良 好，而且免疫原性强。经猪肺炎支原体16s RNA特异性引物鉴定为猪肺炎支原体菌株，将其 命名为猪肺炎支原体S株，经猪肺炎支原体P46引物和M7 Rl引物特异性扩增后也再次鉴 定为猪肺炎支原体，其碱基和氨基酸序列与其他猪肺炎支原体菌株如232株和JN F65株在 某些位置不同，可为该菌株的分子生物学鉴定做分子标记；该菌株可用于制备猪支原体灭 活疫苗。 本专利技术的技术方案 1. 一种猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae) S株，该菌株已于2014年12 月1日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保 藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号CGMCC No. 10095。 2.本专利技术所述猪肺炎支原体疫苗株S株，其P46基因的部分碱基序列为： AGTAATGATT CTATTCGAAT AGCACTAACC GATCCGGATA ATCCTCGATG AATTAGTGCC 60 CAAAAAGATA TTATTTCTTA TGTTGATGAA ACAGAGGCAG CAACTTCAAC AATTACAAAA 120 AACCAGGATG CACAGAATAA CTGACTCACT CAGCAAGCTA MtTTAAGCCC AGCGCCAAAA 180 GGATTTATTA TTGCGCCTGA AAATGGAAGT GGAGTTGGAA CTGCTGTTAA TACAATTGCT 240 GATAAAGGAA TTCCGATTGT TGCCTATGAT CGACTAATTA CTGGATCTGA TAAATATGAT 300 TGGTATGTTT CTTTTGATAA TGAAAAAGTT GGCGAATTAC AAGGTCTTTC ACTTGCGGCG 360 GGTCTATTAG GAAAAGAAGA TGGTGCTTTT GATTCAATTG ATCAAATGAA TGAATATCTA 420 AAATCACATA TGCCCCAAGA GACAATTTCT TTTTATACAA TCGCGGGTTC CCAAGATGAT 480 AATAATTCCC AATATTTTTA TAATGGTGCA ATGAAAGTAC TTAAAGAATT AATGAAAAAT 540 TCGGGAAATA AAATAATTGA TTTATCTCCT GAAGGCGAAA ATGCTGTTTA TGTCCCAGGA 600 TGAAATTATG GGACTGCCGG TCAAAGAATC CAATCTTTTC TAACAATTAA CAAAGATCCT 660 CAAGGCGGTA ATAAAATCAA AGCTGTTGGT TCAAAACCAG CTTCTATTTT CAAAGGATTT 720 CTTGCCCCAA ATGATGGAAT GGCCGAA本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株猪肺炎支原体菌种，其特征在于该株猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp)命名为S株，已于2014年12月1日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号CGMCC No.10095。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：沈青春，冯忠泽，吴金，孙晔，李秋菊，李聪研，魏晶晶，宋潇婷，孙亚波，史文艳，
申请(专利权)人：北京中海生物科技有限公司，吉林和元生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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