用于检测移植后患者免疫重建功能的试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种用于检测移植后患者免疫重建功能的试剂盒，其特征在于：包括盒体、盒盖和设置在盒体内的两个衬垫，两个衬垫上均设有小孔，分别装有荧光标记的单克隆抗体CD3、CD4、FoxP3、CD25、CD16、CD56、CD45、CD38、CD27、CD11c、CD19、CD10、CD123、CD45RA、CD62L、CD45RO、CD8的试剂管以及装有红细胞裂解液的试剂管、装有PBS缓冲液的试剂管、装有打孔固定液的试剂管被设置在所述小孔内。本实用新型专利技术的试剂盒结构简单、设计合理，方便携带、保存，不易受污染，相比较传统的检测方法程序简单，降低了检测工作的强度，检测精度更高。

【技术实现步骤摘要】

本技术属于免疫学
，涉及一种用于检测移植后患者免疫重建功能的 试剂盒。
技术介绍
免疫重建是造血干细胞移植（HSCT)后，机体免疫系统的各方面功能均受到损伤， 强烈的预处理（放疗或化疗）使受者免疫细胞损失殆尽，唯有受者浆细胞可在移植后持续 存在数个月到数年，在减低剂量预处理后各种类型的免疫细胞均可存在，恢复各类免疫细 胞数量和功能的过程，免疫重建所需时间不尽相同。影响免疫重建的因素有基础疾病、移植 前放化疗、预处理方案、干细胞来源、移植物组分、人类白细胞抗原（HLA)不和程度以及血 清巨细胞病毒（CMV)状态等；此外，移植物抗宿主病（GVHD)、免疫抑制剂（用于GVHD的预 防和治疗）、抗微生物药物或静脉静脉丙种球蛋白预防感染或供者淋巴细胞输注等均可影 响移植后的免疫重建。 造血干细胞移植后⑶4+T细胞恢复缓慢，其原因在于预处理、GVHD发生及其防治 可通过抑制胸腺输出功能或改变胸腺基质进而影响T细胞发育。造血干细胞移植后重建的 ⑶4+T细胞，高表达⑶45RA。初始T细胞移植物中⑶4+初始T细胞的数量与移植后1、3、6 个月重建的CD4+初始T细胞数量呈正相关；移植物中CD4+T细胞数量也影响T细胞受体库 恢复，T细胞受体库在移植后早期缺乏多样性，随着初始T细胞数量的恢复其受体库多样性 也逐渐增加。造血干细胞移植后重建的⑶4+T细胞，高表达⑶45R0,低表达⑶62L。 移植后⑶8+T细胞迅速上升，与⑶4+T细胞类似的是重建的⑶8+T细胞也主要是 记忆和效应细胞（⑶8+⑶45RA+)，而记忆⑶8+T细胞（⑶8+⑶45R0+)重建缓慢。大部分重 建CD8+T细胞为抑制、无能或终末分化细胞的表型，这些都提示记忆细胞和效应细胞增加， 而非初始细胞的扩增。外周血干细胞中含有的CD8+T细胞是BM或UCB的10倍，但是外周 血干细胞移植后CD8+T细胞重建与骨髓移植和脐血移植无明显差别，但是在移植后重建的 CD8+T细胞中至少有部分来源于移植物中的CD8+T细胞。在去除移植物中的CD8+T细胞移 植后，CD8+细胞的重建就明显慢于没有处理的骨髓移植。 移植后2个月左右的时间内外周血循环中的B细胞计数低或检测不到，它们随即 上升，1-2年后高于正常人。脐血移植移植后B细胞重建快于骨髓移植。供者B细胞外周血 干细胞采集物中的含量是骨髓的18倍，外周血干细胞移植后前3个月B细胞快速恢复与移 植物中含大量B细胞相关。3个月后，骨髓移植受者外周血循环中的B细胞数高于外周血干 细胞移植相当。浆细胞对放/化疗不敏感，因此抗体在移植数个月后很快出现。B细胞免疫 在移植数个月后主要为供者来源。 骨髓移植和外周血干细胞移植受者之间NK细胞重建速度无差异。NK细胞的功能 大约在移植后3-4周亦可恢复正常。人类NK细胞缺乏可导致病毒感染的发生率显著增高， 因此NK细胞在抗御病毒感染方面的作用不可或缺。移植物中NK细胞的高含量也与移植 后低感染率有关。除了抗病毒的作用外，NK细胞还可以杀死不表达某些HLA-I类分子（如 Cwl、Cw2、Bw3)的恶性肿瘤细胞，这一特征在去除T细胞的单倍体相合亲缘供者移植中显得 尤其重要，因为去T移植后，T细胞的重建明显迟于非去T的HSCT。NK细胞是造血干细胞移植后早期发挥抗病毒免疫和移植物抗白血病效应的主要 细胞亚群。造血干细胞移植后30天（+30天）的淋巴细胞主要由NK细胞组成，+30天NK细 胞即可恢复到正常水平，而且骨髓移植和外周血干细胞移植受者之间NK细胞重建速度无 差异。NK细胞的功能大约在移植后3-4周亦可恢复正常。人类NK细胞缺乏可导致病毒感 染的发生率显著增高，因此NK细胞在抗御病毒感染方面的作用不可或缺。移植物中NK细 胞的高含量也与移植后低感染率有关。除了抗病毒的作用外，NK细胞还可以杀死不表达某 些HLA-I类分子（如Cwl、Cw2、Bw3)的恶性肿瘤细胞，这一特征在去除T细胞的单倍体相合 亲缘供者移植中显得尤其重要，因为去T移植后，T细胞的重建明显迟于非去T的HSCT。NKT细胞能抑制GVHD，同时保留GVL效应，这种效应也存在于人类HSCT中，NKT细 胞在降低GVHD的同时也能减低淋巴系统肿瘤复发率。与NKT的调节功能相一致，GVHD患 者的NKT细胞数量显著低于未发生GVHD的患者；有研宄表明，接受Bu/Cy与处理方案的患 者移植物中低含量的NKT与低白血病复发率相关，这种差异可能缘于NKT细胞的多功能性。 NKT细胞于外周血干细胞移植后1个月恢复正常，而骨髓移植后需要6-12个月能恢复到正 常水平。 树突状细胞主要存在于粘膜和淋巴组织中，可分为浆样树突（⑶123+⑶11C-)与 髓样树突（CD123-CD1lc+)，其功能是提呈HLA抗原肽复合物给T淋巴细胞，并与共刺激分子 一起激活抗原特异T细胞耐受。在外周血循环中髓样树突在移植后3个月恢复正常，而浆 细胞样树突移植后1年仍未恢复正常。 目前常采用淋巴细胞亚群测定法和E花环实验法来检测免疫重建功能，淋巴细 胞亚群测定法是应用最广泛的检测免疫功能的方法，但该方法仅能提供T细胞（CD3+、 CD3+CD4+、CD3+CD8+)，B细胞（CD19+)，NK细胞（CD16+CD56+)占淋巴细胞的相对比例，不能 提供相应细胞群的绝对定量。而E花环实验法是一种体外检测人和动物细胞免疫功能的方 法，常用于T淋巴细胞计数，该方法操作繁琐，判断结果容易受主观因素影响，且只能给出T 细胞的数量。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本技术的目的在于提供用于检测移植后患者免疫重 建功能的试剂盒，可以快速、准确地检测T细胞及T细胞亚群、调节性T细胞、初始T细胞、 记忆T细胞、未成熟的B细胞、初始B细胞、记忆B细胞、NK细胞、浆样树突细胞及髓样树 突，利用细胞表面不同抗原表达的特性来计算以上各细胞群占淋巴细胞、有核细胞的百分 比，同时联合血细胞计数，可计算出各群细胞的绝对计数，从而对造血干细胞移植后患者免 疫重建功能进行评估。 为实现上述目的，本技术采取的技术方案是：一种用于检测移植后患者免疫 重建功能的试剂盒，包括盒体（1)、盒盖（2)和设置在盒体（1)内的衬垫（3)和衬垫（4)， 所述衬垫（3)在盒体中的下层，所述衬垫（4)在盒体中的上层，所述衬垫（3)和所述衬垫 (4)上均设有小孔，有荧光标记的单克隆抗体CD3的试剂管（5)、装有荧光标记的单克隆抗 体CD4的试剂管（6)、装有荧光标记的单克隆抗体FoxP3的试剂管（7)、装有荧光标记的单 克隆抗体CD25的试剂管（8)、装有荧光标记的单克隆抗体CD16的试剂管（9)、装有荧光标 记的单克隆抗体CD56的试剂管（10)、装有荧光标记的单克隆抗体CD45的试剂管（11)、装 有荧光标记的单克隆抗体CD38的试剂管（12)、装有荧光标记的单克隆抗体CD27的试剂管 (13)、装有荧光标记的单克隆抗体CDllc的试剂管（14)、装有荧光标记的单克隆抗体CD19 的试剂管（15)、装有荧光标记的单克隆抗体CD10的试剂管（16)、装有荧光标记的单克隆抗 体CD123的试剂管（17)、装有荧光标记的单克隆抗体CD45RA的试剂管（18)、装有荧光本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测移植后患者免疫重建功能的试剂盒，其特征在于：包括盒体(1)、盒盖(2)和设置在盒体(1)内的衬垫(3)和衬垫(4)，所述衬垫(3)在盒体中的下层，所述衬垫(4)在盒体中的上层，所述衬垫(3)和所述衬垫(4)上均设有小孔，有荧光标记的单克隆抗体CD3的试剂管(5)、装有荧光标记的单克隆抗体CD4的试剂管(6)、装有荧光标记的单克隆抗体FoxP3的试剂管(7)、装有荧光标记的单克隆抗体CD25的试剂管(8)、装有荧光标记的单克隆抗体CD16的试剂管(9)、装有荧光标记的单克隆抗体CD56的试剂管(10)、装有荧光标记的单克隆抗体CD45的试剂管(11)、装有荧光标记的单克隆抗体CD38的试剂管(12)、装有荧光标记的单克隆抗体CD27的试剂管(13)、装有荧光标记的单克隆抗体CD11c的试剂管(14)、装有荧光标记的单克隆抗体CD19的试剂管(15)、装有荧光标记的单克隆抗体CD10的试剂管(16)、装有荧光标记的单克隆抗体CD123的试剂管(17)、装有荧光标记的单克隆抗体CD45RA的试剂管(18)、装有荧光标记的单克隆抗体CD62L的试剂管(19)、装有荧光标记的单克隆抗体CD45RO的试剂管(20)、装有荧光标记的单克隆抗体CD8的试剂管(21)、装有红细胞裂解液的试剂管(22)、装有PBS缓冲液的试剂管(23)和装有打孔固定液的试剂管(24)被设置在所述小孔内。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王显凤，吴纯斌，刘丽媛，秦晓明，王绪华，梁超，陈忠，方国伟，黄士昂，
申请(专利权)人：北京海思特临床检验所有限公司，
类型：新型
国别省市：北京;11