本发明专利技术公开了一种检测大黄酸的酶联免疫试剂盒及其应用。本发明专利技术的试剂盒所使用的抗大黄酸的单克隆抗体是由杂交瘤细胞株RH1F8分泌产生的。通过实验证明：本发明专利技术所提供抗大黄酸的单克隆抗体特异性强，与芦荟大黄素的交叉反应率为27.039％；与大黄素的交叉反应率为0.887％；与大黄酚的交叉反应率为0.114％；与大黄素甲醚的交叉反应率为0.310％；与番泻苷A的交叉反应率为0.005％；与番泻苷B和土大黄苷无交叉反应。利用该单克隆抗体制备得到的间接竞争酶联免疫试剂盒可用于定性或定量检测样品中大黄酸，线性检测范围在0.02～0.11ng/mL，具有快速、灵敏的优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及，属于生物
技术介绍
大黄酸（Rhein)是常用中药材大黄（Rhein Radix et Rhizoma)的主要活性成分 之一，具有抗炎、抗肿瘤、肾脏保护等多种药理活性。目前，大黄酸检测方法有薄层色谱法、 高效液相色谱法和毛细管电泳法等。 酶联免疫吸附检测法具有操作简便、灵敏度高、通量高、检测快速、成本低廉等特 点，在中药材的品质鉴定等方面已经获得了广泛的应用，但大黄酸的免疫检测方法还未见 报道，加上市场上所售大黄质量参差不齐，所以建立一种简便、快速、高通量的大黄酸免疫 检测方法具有非常重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种抗大黄酸的单克隆抗体。 本专利技术提供的抗大黄酸的单克隆抗体是由保藏号为CGMCC No. 10582的杂交瘤细 胞株产生的。 本专利技术的另一个目的是提供一株分泌抗大黄酸的单克隆抗体的杂交瘤细胞株 RH1F8。 本专利技术提供的分泌抗大黄酸的单克隆抗体的杂交瘤细胞株RH1F8的保藏号为 CGMCC No. 10582。 本专利技术保护保藏号为CGMCC No. 10582的杂交瘤细胞株RH1F8,保藏号为CGMCC No. 10582的杂交瘤细胞株RH1F8的分类命名为小鼠杂交瘤细胞系，该杂交瘤细胞株已于 2015年4月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCCJft 址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研宄所，邮编100101)，保藏号为 CGMCC No. 10582。 本专利技术还有一个目的是提供上述单克隆抗体或上述杂交瘤细胞株RH1F8的用途。 本专利技术提供了上述单克隆抗体或上述杂交瘤细胞株RH1F8在制备检测或辅助检 测待测样品中大黄酸含量的试剂或试剂盒中的应用。 本专利技术还提供了上述单克隆抗体或上述杂交瘤细胞株RH1F8在检测或辅助检测 待测样品中大黄酸含量中的应用。 本专利技术还提供了上述单克隆抗体或上述杂交瘤细胞株RH1F8在制备检测或辅助 检测待测样品中大黄酸含量的胶体金试纸条中的应用。 本专利技术的最后一个目的是提供一种检测或辅助检测待测样品中大黄酸含量的酶 联免疫试剂盒。 本专利技术提供的检测或辅助检测待测样品中大黄酸含量的酶联免疫试剂盒包括独 立包装的上述单克隆抗体。 本专利技术提供的检测或辅助检测待测样品中大黄酸含量的酶联免疫试剂盒还可含 有分别为独立包装的大黄酸标准品和/或用于标记所述单克隆抗体的标记酶； 所述大黄酸标准品可为大黄酸或由所述大黄酸配制成的一系列不同浓度的大 黄酸溶液；所述一系列不同浓度的大黄酸溶液的浓度具体可为：〇. 5ng/mL、0. 25ng/mL、 0· 125ng/mL、0. 0625ng/mL、0. 03125ng/mL、0. 015625ng/mL 和 0· 0078125ng/mL，所述大黄酸 溶液的溶剂具体可为PBS缓冲液；所述PBS缓冲液的溶剂为水，溶质为Na2HP0 4、KH2POjP NaCl，溶质Na2HP04、KH 2POjP NaCl在所述PBS缓冲液中的浓度分别为0. 02M、0. 0015M和 0· 14M，pH 值为 7. 5 ; 所述标记酶具体可为辣根过氧化物酶。 本专利技术提供的检测或辅助检测待测样品中大黄酸含量的酶联免疫试剂盒还可含 有分别为独立包装的包被缓冲液和/或洗涤液和/或底物缓冲液和/或终止缓冲液和/或 封闭液； 所述包被缓冲液的溶剂为水，溶质为Na2COjP NaHCO 3;溶质Na 20)3和NaHCO 3在所 述包被缓冲液中的浓度分别为〇. OlM和0. 04M ;所述包被缓冲液的pH值为9. 6 ; 所述洗涤液的溶剂为水，溶质为Na2HPCV KH2P04、NaCl和吐温-20 ;溶质Na2HP04、 KH2P04、NaCl和吐温-20在所述洗涤液中的浓度分别为0. 02M、0. 0015M、0. 14M和0. 1% (体 积百分含量）；所述洗涤液的pH值为7. 5 ; 所述底物缓冲液的溶剂为水，溶质为柠檬酸三钠和Na2HPO4;溶质柠檬酸三钠和 Na2HPO4在所述底物缓冲液中的浓度分别为0.0 lM和0. 03M ;所述底物缓冲液的pH值为 5. 5 ； 所述终止缓冲液为2M的硫酸水溶液； 所述封闭液的溶剂为水，溶质为Na2HP04、KH 2P04、NaCl和脱脂牛奶；溶质Na2HP04、 KH2P04、NaCl和脱脂牛奶在所述封闭液中的浓度分别为0· 02Μ、0· 0015Μ、0· 14M和3% (质量 百分含量）；所述封闭液的pH值为7. 5。 上述酶联免疫试剂盒中，所述样品为大黄；所述大黄具体为掌叶大黄、唐古特大 黄、药用大黄、土大黄或华北大黄。 上述酶联免疫试剂盒在检测或辅助检测待测样品中大黄酸含量中的应用也属于 本专利技术的保护范围。 上述应用中，所述样品为大黄；所述大黄具体为掌叶大黄、唐古特大黄、药用大黄、 土大黄或华北大黄。 本专利技术提供了一种检测大黄酸的的酶联免疫试剂盒。本专利技术所提供的抗大黄酸的 单克隆抗体是以大黄酸-OVA(大黄酸和卵清白蛋白的偶联物）为包被抗原，通过间接竞争 ELISA方法对杂交瘤细胞RH1F8进行筛选得到的。通过实验证明：本专利技术所提供抗大黄酸 的单克隆抗体特异性强，与芦荟大黄素的交叉反应率为27. 039% ;与大黄素的交叉反应率 为0. 887% ;与大黄酚的交叉反应率为0. 114% ;与大黄素甲醚的交叉反应率为0. 310% ;与 番泻苷A的交叉反应率为0.005% ;与番泻苷B和土大黄苷无交叉反应。利用该单克隆抗 体制备得到的间接竞争酶联免疫试剂盒可用于定性或定量检测样品中大黄酸，线性检测范 围在0. 02~0. llng/mL，具有快速、灵敏的优点。【附图说明】 图1为大黄酸化学结构。 图2为间接竞争ELISA中大黄酸的抑制曲线。【具体实施方式】 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。 弗氏完全佐剂是Sigma公司的产品，产品目录号为F5881。 弗氏不完全佐剂是Sigma公司的产品，产品目录号为F5506。 包被缓冲液：溶剂为水，溶质为Na2COjP NaHCO 3;溶质Na 20)3和NaHCO 3在包被缓冲 液中的浓度分别为0.0 lM和0. 04M ;pH值为9. 6。 洗涤液：溶剂为水，溶质为 Na2HP04、KH2P04、NaCl 和吐温-20 ;溶质 Na2HP04、KH2P04、 NaCl和吐温-20在洗涤液中的浓度分别为0. 02M、0. 0015M、0. 14M和0. 1 % (体积百分含 量）；pH值为7. 5。 样品稀释液：溶剂为水，溶质为Na2HPO4、KH 2POjP NaCl、吐温-20和明胶；溶质 Na2HP04、KH2POjP NaCl在所述样品稀释液中的浓度分别为0. 02M、0. 0015M和0. 14M ;所述 吐温-20在所述样品稀释液中的体积百分含量为0. 1 % ;所述明胶在所述样品稀释液中的 质量百分含量为〇. 5%。 底物缓冲液：溶剂为水，溶质为柠檬酸三钠和Na2HPO4;溶质柠檬酸三钠和Na 2ΗΡ04 在底物缓冲液中的浓度分别为〇.本文档来自技高网...
【技术保护点】
抗大黄酸的单克隆抗体，由保藏号为CGMCC No.10582的杂交瘤细胞株产生的。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黄璐琦，张波，南铁贵，袁媛，詹志来，康利平，
申请(专利权)人：中国中医科学院中药研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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