转化生长因子β1调控蛋白P311的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医学治疗技术领域，具体涉及一种转化生长因子β1(TGFβ1)调控蛋白P311的应用。本发明专利技术提供了调控蛋白P311在制备调控转化生长因子β1表达的药物中的用途。本发明专利技术还提供了特异调控转化生长因子β1合成的药物，其主要活性成分为P311蛋白。P311蛋白是一种理想的用于调控TGFβ1的小分子药物。本发明专利技术发现并证实了P311蛋白可以促进TGFβ1的合成，并发挥与TGFβ1类似的生物学效应。本发明专利技术为治疗以TGFβ1为主要发病机制的相关疾病提供一种新选择。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医学治疗
，具体涉及一种转化生长因子β UTGFβ 1)调 控蛋白Ρ311的应用。
技术介绍
β型转化生长因子（TGF-β)超家族属于调节型细胞因子家族，包含至少30个 成员，大致可分为 TGF β/Activin/Nodal 亚家族和 BMP (bone morphogenetic protein)/ GDF(growth and differentiation factor)/MIS(muellerian inhibiting substance) 亚家族。哺乳动物TGF0分为TGF0 1、TGF0 2和TGF0 3三种异构体，其中TGF01的含 量最多，其研宄最为广泛而透彻。生物体内至少存在三种形式的TGF0 1蛋白：同源二聚 体存在的超大前体 TGF β I (proTGF β 1)、与 latent-associated protein (LAP)结合的 TGF0 1(LAP-TGF0 1)、活性 TGF0 1。只有活性 TGF0 I 可以与 TGF0 II 型受体结 合并使其激活，之后激活TGF β I型受体（Τ β RI)，后者可以使Smad2和Smad3磷酸化，进而 入核调控相关基因表达，这就是经典的TGF β /Smad通路。研宄表明，TGF β 1在调节细胞增 殖、分化、凋亡、自噬、粘附、细胞外基质合成与分泌、胚胎发生、组织修复、炎性反应、纤维化 和肿瘤中起着重要的作用。因此，调控TGF β 1的合成和生物学功能可能是各种以TGF β 1 为主要发病机制的相关疾病的另一治疗策略。 目前关于TGF β 1的相关临床治疗主要为针对TGF β /Smad通路不同环节的的抑制 剂。这种治疗策略的缺点在于治疗时机偏晚，多在TGFM明显升高激活下游通路后，而此 时多种病理改变已经发生，甚至不可逆。因此，寻找一种TGF β 1的上游调控蛋白，对于及早 控制和抑制TGF β 1的合成，将TGF β 1消灭在"萌芽"阶段，从而减慢和改善病情进展具有 重要的临床意义。研宄表明，TGFM的合成和生物学功能受到多种因素的共同调节。这些 因素主要包括各种细胞因子（TGF^ 1、TNFa、INFy、INFa、TOGF-BB、bFGF等）、转录因子 (SPUAP1等）、化学物质（全反式维甲酸等）。但他们本身也可以产生其他生物学效应，甚 至引发过度炎症反应，因此并未在临床广泛应用。P311基因于1993年最初在小鼠脑和肌肉 组织中发现，表达产生8kDa大小的胞浆蛋白，N末端含有PEST结构域，并且其生物学功能 不明确，未能归入任何已知蛋白家族。最近研宄表明，P311可能参与了神经系统和呼吸系 统发育以及血压维持。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是为治疗以TGFf3 1为主要发病机制的相关疾病提供一 种新选择。 本专利技术提供了调控蛋白P311在制备调控转化生长因子β 1表达的药物中的用途。 具体的，所述的调控蛋白Ρ311具有如SEQ ID No. 1所示的氨基酸序列。 具体的，编码调控蛋白P311的基因具有如SEQ ID No. 2所示的核苷酸序列。 本专利技术还提供了特异调控转化生长因子β 1合成的药物，其主要活性成分为P311 蛋白。 具体的，所述的P311蛋白具有如SEQ ID No. 1所示的氨基酸序列。 具体的，编码P311蛋白的基因具有如SEQ ID No. 2所示的核苷酸序列。 SEQ ID No. 1P311蛋白的氨基酸序列： mvyypelfvw vsqepfpnkd megrlpkgrl pvpkevnrkk ndetnaaslt plgsseIrsp risylhff SEQ ID No. 2编码P311蛋白的核甘酸序列： atggtttatta cccagaactc tttgtctggg tcagtcaaga accatttcca aacaaggaca tggagggaag gcttcctaag ggaagacttc ctgtcccaaa ggaagtgaac cgcaagaaga acgatgagac aaacgctgcc tccctgactc cactgggcag cagtgaactc cgctccccaa gaatcagtta cctccacttt ttttaa 本专利技术的P311蛋白可通过常规的蛋白表达和纯化技术获得。可以常规制成胶囊、 喷雾，也可交联于各种生物材料，也可搭载于经过基因改造后的细胞和生物载体，这些制作 工艺可通过商业化途径或标准的制作流程获得。搭载所述P311蛋白的各种药物载体，只需 按照常规使用，无需特殊操作，本领域的临床医生能够结合本产品特点正确使用。 首先，通过P311腺病毒转染使表皮干细胞高表达P311，发现P311蛋白可以降低 TGFI3 ImRNA的水平，但升高LAP-TGFI3 1和活性TGFI3 1蛋白水平（图1)。然后通过分子 生物学技术，发现P311可以通过结合于TGF β 13' -UTR区来促进TGF β 1的蛋白翻译（图 2)。然后，体外证实Ρ311可以发挥类似于TGFf3 1的促进表皮干细胞向肌成纤维细胞转分 化的作用，并且可被TGF β 1的特异抑制剂所抑制（图3)。最后，通过恢复实验发现，外源性 TGFf3 1可以恢复Ρ311敲除引起的细胞功能缺陷（图4)。综上，专利技术人发现并证实了 Ρ311 蛋白可以促进TGFf3 1的蛋白表达，并可发挥类似于TGFf3 1的生物学效应。 本专利技术的有益效果： 本专利技术发现了一种新的TGFf3 1调控蛋白Ρ311，高表达于增生性瘢痕的小分子蛋 白。Ρ311蛋白仅有8kda，易于进行药物搭载。Ρ311分子结构中含有PEST结构，易于在发 挥效应后及时降解，避免过度刺激引发的副反应。因此，P311蛋白是一种理想的用于调控 TGFf3 1的小分子药物。本专利技术发现并证实了 P311蛋白可以促进TGFf3 1的合成，并发挥与 TGF β 1类似的生物学效应。本专利技术从调控具有多种生物学特性的TGF β 1入手，发现了新的 特异调控蛋白Ρ311蛋白。本专利技术发现的Ρ311蛋白将会为各种以TGFf3 1为主要发病机制 的疾病尤其是纤维化和肿瘤提供一种新的治疗策略，将为各种纤维化患者和肿瘤患者等带 来福音，具有广阔的应用和市场前景。【附图说明】 图1、Ρ311对小鼠表皮干细胞中TGFβ 1的影响。Α、免疫印迹检测细胞内TGFβ 1 前体和活性TGFf3 1蛋白的水平。Β、活性TGFf3 1蛋白灰度值分析。**，Ρ〈0. 01，与空载体组 相比。C、前体TGFM蛋白灰度值分析。**，Ρ〈0. 01，与空载体组相比。D、酶联免疫法检测 细胞培养上清内总TGFI3 1水平。*，Ρ〈0. 05,与野生型组相比。Ε、实时定量PCR检测TGF0 1 mRNA水平。*，Ρ〈0. 05,与空载体组相比。F、实时定量PCR检测TGF0I型受体mRNA水平。 *，P〈0. 05,与空载体组相比。G、实时定量PCR检测TGF0II型受体mRNA水平。**，P〈0. 01， 与空载体组相比。 图2、P311调控TGF0 1合成的机制。A、P311对TGF0 1启动子活性的影响。*， P〈0. 05,与空本文档来自技高网...

【技术保护点】
调控蛋白P311在制备调控转化生长因子β1表达的药物中的用途。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李海胜，罗高兴，吴军，贺伟峰，张路，杨思思，谭江琳，周峻峄，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：重庆;85