本发明专利技术涉及一种从酒药中提取的鲁氏淀粉霉菌株。本发明专利技术还涉及所述鲁氏淀粉霉发酵生产凝乳酶的方法，所述方法包括：分别配制质量百分比为8～12％的江米面培养基和麸皮培养基；按体积比1～3：1～3混合，高温灭菌，即得基础培养基；在所述基础培养基中加入可溶性淀粉18～22g/L、酪蛋白水解物8～12g/L、碳酸钙0.1～0.3g/L；搅拌混合均匀后，高温灭菌，即得发酵培养基；取浓度为8～12×107个孢子/ml的鲁氏淀粉霉孢子液，以体积比0.4～0.6:100接种于所述发酵培养基中，摇床培养，离心收集上清液，即得凝乳酶。本发明专利技术提供的方法操作工艺简单，成本低廉，发酵周期短，适合推广于工业化生产，制备而成的凝乳酶活性高，凝乳酶的组织状态良好，具有浓香的甜酒味，用于奶酪生产具有广阔的前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及凝乳酶的制备方法，具体涉及一种从酒药中提取的鲁氏淀粉霉，以及 所述鲁氏淀粉霉发酵生产凝乳酶的方法。
技术介绍
凝乳酶是一种天冬氨酸蛋白酶，特异性地水解κ -酪蛋白Phel05_Metl06之间的 肽键，导致牛奶凝结，广泛用于奶酪与干酪素生产中，传统的凝乳酶来源于小牛皱胃，但随 着我国干酪产量的不断增加，小牛皱胃酶供应不足，人们开始不断寻找小牛皱胃酶代用品， 而微生物凝乳酶成本较低、酶容易提取、经济效益高，且受限制小，是凝乳酶最有前途的发 展方向，因此，在世界范围内，开发微生物凝乳酶替代小牛皱胃酶已经成为乳品科学研宄的 热点。 微生物凝乳酶与小牛皱胃酶相比仍然存在很多问题，如菌株凝乳活性不高，蛋白 水解活性强及耐热性高等，目前微生物凝乳酶的研宄主要集中在微小毛霉、米黑毛霉和栗 疫霉等真菌，国外已实现规模化生产，而国内大部分凝乳酶主要依赖进口。毛霉属和根毛霉 属是研宄最为广泛的产凝乳酶种属，刘振民等人研宄了酒药中产凝乳酶的微生物，发现根 霉可以产凝乳酶，并从中筛选出一株产凝乳酶的菌株，经过优化凝乳活性可达80Su/mL ;李 子木等人从酒曲中分离得到一株产凝乳酶活性强、蛋白水解活性弱的根霉菌株，通过优化 后，凝乳酶活性可达133. 3Su/mL，国内外有许多类似的真菌发酵产凝乳酶的研宄，但目前， 天然菌株筛选的凝乳酶活性都不高，且文献中未见鲁氏淀粉霉（Amylomyces rouxii)发酵 生产凝乳酶的研宄报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的缺陷，提供一种可以用于制备高活性凝乳酶的鲁 氏淀粉霉，并进一步提供所述鲁氏淀粉霉发酵制备高活性凝乳酶的方法。 本专利技术提供了一种鲁氏淀粉霉菌株，即鲁氏淀粉霉SY-F-01，该菌株分离筛选自酒 药。该菌株已于2015年03月16日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 (地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研宄所，邮政编码：100101)， 保藏号为CGMCC No. 10630 ;该菌种的分类命名为：鲁氏淀粉霉Amylomyces rouxii。 本专利技术还提供了一种所述鲁氏淀粉霉发酵制备凝乳酶的方法，具体包括以下步 骤： (1)以蒸馏水为溶剂，分别配制质量百分比8~12%的江米面培养基和质量百分 比8~12%的麸皮培养基；将江米面培养基和麸皮培养基以体积比1~3 :1~3混合，高 温灭菌，即得基础培养基； (2)在所述基础培养基中加入包含以下成分的辅料：可溶性淀粉18~22g/L，酪蛋 白水解物8~12g/L，碳酸钙0. 1~0. 3g/L ;搅拌混合均匀后，高温灭菌，即得发酵培养基； (3)取浓度为8~12X IO7个孢子/ml的鲁氏淀粉霉孢子液，以体积比0.4~ 0. 6:100接种于所述发酵培养基中，在25~30°C、150~250r/min条件下摇床培养3~5d， 即得发酵液； (4)将所述发酵液于9000~11000r/min、4°C条件下离心3~7min，收集上清液， 即得凝乳酶。 本专利技术步骤（1)中：所述江米面培养基和麸皮培养基的质量百分比浓度均优选为 10% ;二者的体积比优选为1 :1。 本专利技术步骤（2)中：所述可溶性淀粉、酪蛋白水解物和碳酸钙均为常规的市售原 料，其中，酪蛋白水解物可购自Sigma公司。所述辅料优选包含以下浓度的成分：可溶性淀 粉20g/L，酪蛋白水解物10g/L，碳酸钙0. 2g/L。所述高温灭菌的条件优选为：121°C，灭菌 20min〇 本专利技术步骤（3)中：所述鲁氏淀粉霉孢子液与培养基的体积比优选为0.5:100; 所述摇床培养的条件优选为：29°C，200r/min ;培养时间优选为4d。在该步骤中，优选使用 250mL三角瓶作为培养瓶，培养瓶中培养基的装入量优选为100mL。 本专利技术步骤（4)中：所述离心的条件优选为：10000r/min、4°C条件下离心5min。 本专利技术所述鲁氏淀粉霉孢子可采取以下方法获得：将健康的鲁氏淀粉霉菌株在 PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）平板上划线活化，28~32°C下培养至培养基上长 满孢子；取长有健康孢子的培养基，用无菌水清洗，移入装有适量无菌水和玻璃珠的三角瓶 中，振荡使孢子散开，用无菌纱布过滤至另一无菌三角瓶中，即得鲁氏淀粉霉孢子的孢子悬 液（简称鲁氏淀粉霉孢子液）。所述鲁氏淀粉霉孢子液的浓度优选为8~12X IO7个孢子 /mL，进一步优选为IO8个孢子/mL。 作为一种优选方案，本专利技术提供的方法包括以下步骤： (1)以蒸馏水为溶剂，配制质量百分比为10%的江米面培养基和质量百分比为 10%的麸皮培养基；将江米面培养基和麸皮培养基以体积比1:1混合，即得基础培养基； (2)在所述基础培养基中加入包含以下原料的辅助成分：可溶性淀粉20g/L，酪蛋 白水解物l〇g/L和碳酸钙0. 2g/L ;搅拌混合均匀后，121°C下灭菌20min，即得发酵培养基； (3)取浓度为IO8个孢子/mL的鲁氏淀粉霉孢子液0. 5ml，接种于装有100mL所述 发酵培养基的250ml培养瓶中，在29°C、200r/min条件下摇床培养4d，即得发酵液； ⑷将所述发酵液于10000r/min、4°C离心5min，取上清液，即得凝乳酶。 本专利技术进一步保护采用所述方法制备而成的凝乳酶。 本专利技术所述方法获得的凝乳酶为粗酶液，通过进一步纯化后，可以应用于奶酪等 乳制品的生产中。 本专利技术所述凝乳酶活性（milk-clotting activity, MCA)采用如下定义：40min凝 固ImL浓度为100g/L的脱脂乳所需的凝乳酶量，即为1个酶活性单位（Soxhelt Unit, SU); 溶液中凝乳酶活性可采用如下公式计算得到：MCA= (2400X5XDV(TX0. 5)，式中：MCA为 凝乳酶活性，单位为Su/mL ;T为凝乳时间，单位为s ;D为凝乳酶的稀释倍数。 本专利技术中，测定凝乳酶活性的方法具体包括以下步骤：取浓度为100g/L的脱脂乳 5mL，40°C下保温5min，加入0. 5mL本专利技术所得凝乳酶的溶液，加入的同时振荡混合，准确记 录从加入凝乳酶到脱脂乳凝固的时间，即凝乳时间T ;所述含有凝乳酶的溶液在加入前可 进行稀释，记录稀释倍数为D。 与现有技术相比，本专利技术提供的方法制备而成的凝乳酶活性高，最高可达1500SU/ mL以上，凝乳酶的组织状态良好，且操作工艺简单，成本低廉，发酵周期短，适合推广于工业 化生产。采用从酒药中提取的鲁氏淀粉霉为原料制备而成的凝乳酶，具有浓香的甜酒味，用 于奶酪生产具有广阔的前景。【具体实施方式】 以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。 本专利技术各实施例采用的鲁氏淀粉霉孢子液按照以下方法获得：取健康的鲁氏淀粉 霉SY-F-Ol菌株，在PDA培养基平板上划线活化，30°C下培养至培养基上长满孢子；取长有 健康孢子的培养基，用无菌水清洗，移入装有适量无菌水和玻璃珠的250ml三角瓶中，振荡 使孢子散开，用无菌纱布过滤至另一无菌三角瓶中，调整鲁氏淀粉霉的孢子数为IO 8个孢子 /ml，即得鲁氏淀粉霉孢子液。 实施例1 按照以下方法生产凝乳酶： (1)以蒸馏水为溶剂，配制质量百分比为本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种鲁氏淀粉霉菌株，其特征在于，所述菌株的分类命名为鲁氏淀粉霉Amylomyces rouxii，保藏号为CGMCC No.10630。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈历俊，姜铁民，李建涛，张咚咚，周伟明，
申请(专利权)人：北京三元食品股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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