中药覆盆子中指标成分含量的测定方法技术

本发明专利技术实施例公开了一种中药覆盆子中指标成分含量的测定方法，包括以下步骤：(1)制备供试品溶液；(2)制备混合对照品溶液；(3)超高效液相色谱检测；(4)建立N种指标成分各自的标准曲线；(5)确定N种指标成分在供试品中各自的含量。本发明专利技术构建的中药覆盆子中指标成分含量的测定方法，准确高效，可用于对中药覆盆子的质量控制，并且该方法可同时检测中药覆盆子中多种指标成分，相对于针对不同指标成分分别检测的方法，缩短检测总时间，节省试剂成本。并且检测结果准确，精密度高，重复性好，稳定性高，专属性强。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及中药质量控制领域，特别涉及中药覆盆子中指标成分含量的测定方法。
技术介绍
中药覆盆子为蔷薇科悬钩子属植物华东覆盆子(Rubus chingii Hu)的干燥果实。夏初果实由绿变绿黄时采收，除去梗、叶，置沸水中略烫或略蒸，取出，干燥，即得中药覆盆子。中药覆盆子具有益肾固精缩尿、养肝明目之功效，临床用于治疗遗精滑精、遗尿尿频、阳痿早泄、目暗昏花等。现代药理研究表明覆盆子具有抗氧化、抗炎、抗血栓、抗癌等活性，其化学成分主要有黄酮类、萜类、甾体类、酚酸类等。《中国药典》2010年版一部收录了中药覆盆子性状和粉末鉴别，未收录薄层鉴别和含量测定项。但是，只通过性状和粉末的鉴别难以科学评价和控制中药覆盆子的品质质量。只有进一步的测定中药覆盆子中指标成分的含量，才能从根本上保证中药覆盆子的药效。
技术实现思路
为了更好地评价和控制中药覆盆子的品质，本专利技术实施例公开了中药覆盆子中指标成分含量的测定方法。技术方案如下：中药覆盆子中指标成分含量的测定方法，包括以下步骤：(1)制备供试品溶液将质量为M的中药覆盆子与V体积0～100％甲醇混合，得到二者混合液，在确定混合液的重量M1后，对其进行提取操作，然后用0～100％甲醇将所述混合液的重量补足至M1，取上清液，即得供试品溶液；(2)制备混合对照品溶液分别称取中药覆盆子中N种指标成分的对照品，分别用0～100％甲醇溶解，>定容，得到具有已知浓度的各指标成分的对照品溶液；再分别量取各指标成分的对照品溶液，混合，用0～100％甲醇定容，得到混合对照品储备液，所述混合对照品储备液中各指标成分具有已知浓度；将对照品混合储备液用0～100％甲醇逐级稀释成一系列分别具有不同已知浓度的混合对照品溶液；(3)超高效液相色谱检测色谱条件包括：固定相：采用十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱；流动相：A相为乙腈，B相为0.1％甲酸，A相:B相为(3～70):(97～30)；流速为0.2～1.0mL/min，柱温为30～50℃，PDA检测器，检测波长为253～344nm；在所述色谱条件下，将V1体积的供试品溶液及各浓度的混合对照品溶液分别注入超高效液相色谱仪中，获得供试品溶液的超高效液相色谱图及各浓度混合对照品溶液的超高效液相色谱图；(4)建立N种指标成分各自的标准曲线以各混合对照品溶液的超高效液相色谱图中各指标成分的色谱峰峰面积为纵坐标或横坐标，以混合对照品溶液中各指标成分的浓度为横坐标或纵坐标，分别建立各指标成分的标准曲线；(5)确定N种指标成分在供试品中各自的含量根据供试品溶液超高效液相色谱图中N种指标成分各自的色谱峰峰面积，及已建立的各指标成分的标准曲线，分别计算出N种指标成分各自的浓度C浓，并按照下列公式分别计算出供试品中N种指标成分各自的含量：含量＝C浓*V/M。在本专利技术的一种优选实施方式中，所述提取为超声提取。在本专利技术的一种优选实施方式中，在将所述混合液的重量补足至M1后，离心，再取上清液。在本专利技术的一种优选实施方式中，所述0～100％甲醇为70～85％甲醇。在本专利技术的一种优选实施方式中，所述流速为0.4mL/min。在本专利技术的一种优选实施方式中，所述流动相：A相为乙腈，B相为0.1％甲酸，A相:B相为18:82。在本专利技术的一种更优选实施方式中，所述的指标成分为鞣花酸，即N＝1时，所述色谱条件包括：固定相：采用十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱；流动相：A相为乙腈，B相为0.1％甲酸，A相:B相为18:82；流速0.4mL/min；柱温40℃；PDA检测器；检测波长为253nm。在本专利技术的一种更优选实施方式中，所述指标成分为鞣花酸和山柰酚-3-O-芸香糖苷，即N＝2时，所述色谱条件包括：固定相：采用十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱；流动相：A相为乙腈，B相为0.1％甲酸，A相:B相为18:82；流速0.4mL/min；柱温40℃；PDA检测器；检测波长为253nm和265nm。在本专利技术的一种更优选实施方式中，所述指标成分为腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷、椴树苷，即N＝8时，所述色谱条件包括：固定相：采用十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱；流动相：乙腈:0.1％甲酸比为0～2min，3:97～5:95；2～8min，5:95～11.5:88.5；8～13.5min，11.5:88.5～15.5:84.5；13.5～15min，15.5:84.5～18:82；15～18min，18:82～20:80；18～23min，20:80～38:62；23～25min，38:62～70:30；柱温为30℃；PDA检测器；检测波长为256nm、265nm、271nm和344nm。本专利技术构建的中药覆盆子中指标成分含量的测定方法，准确高效，可用于对中药覆盆子的质量控制，并且该方法可同时检测中药覆盆子中多种指标成分，相对于针对不同指标成分分别检测的方法，缩短检测总时间，节省试剂成本。并且检测结果准确，精密度高，重复性好，稳定性高，专属性强。当然，实施本专利技术的任一产品或方法并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1A为253nm波长下鞣花酸对照品溶液超高效液相色谱图；图1B为253nm波长下中药覆盆子(浙江)供试品溶液的色谱图；图2A为253nm波长下鞣花酸和山柰酚-3-O-芸香糖苷混合对照品溶液色谱图；图2B为265nm波长下鞣花酸和山柰酚-3-O-芸香糖苷混合对照品溶液色谱图；图2C为253nm波长下中药覆盆子(浙江)供试品溶液色谱图；图2D为265nm波长下中药覆盆子(浙江)供试品溶液色谱图；图3A为256nm波长下8种混合对照品溶液色谱图；图3B为265nm波长下8种混合对照品溶液色谱图；图3C为271nm波长下8种混合对照品溶液色谱图；图3D为344nm波长下8种混合对照品溶液色谱图；图3E为256nm波长下中药覆盆子(浙江)供试品溶液的色谱图；图3F为265nm波长下中药覆盆子(浙江)供试品溶液的色谱图；图3G为271nm波长下本文档来自技高网...

【技术保护点】
中药覆盆子中指标成分含量的测定方法，包括以下步骤：(1)制备供试品溶液将质量为M的中药覆盆子与V体积0～100％甲醇混合，得到二者混合液，在确定混合液的重量M1后，对其进行提取操作，然后用0～100％甲醇将所述混合液的重量补足至M1，取上清液，即得供试品溶液；(2)制备混合对照品溶液分别称取中药覆盆子中N种指标成分的对照品，分别用0～100％甲醇溶解，定容，得到具有已知浓度的各指标成分的对照品溶液；再分别量取各指标成分的对照品溶液，混合，用0～100％甲醇定容，得到混合对照品储备液，所述混合对照品储备液中各指标成分具有已知浓度；将对照品混合储备液用0～100％甲醇逐级稀释成一系列分别具有不同已知浓度的混合对照品溶液；(3)超高效液相色谱检测色谱条件包括：固定相：采用十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱；流动相：A相为乙腈，B相为0.1％甲酸，A相:B相为(3～70):(97～30)；流速为0.2～1.0mL/min，柱温为30～50℃，PDA检测器，检测波长为253～344nm；在所述色谱条件下，将V1体积的供试品溶液及各浓度的混合对照品溶液分别注入超高效液相色谱仪中，获得供试品溶液的超高效液相色谱图及各浓度混合对照品溶液的超高效液相色谱图；(4)建立N种指标成分各自的标准曲线以各混合对照品溶液的超高效液相色谱图中各指标成分的色谱峰峰面积为纵坐标或横坐标，以混合对照品溶液中各指标成分的浓度为横坐标或纵坐标，分别建立各指标成分的标准曲线；(5)确定N种指标成分在供试品中各自的含量根据供试品溶液超高效液相色谱图中N种指标成分各自的色谱峰峰面积，及已建立的各指标成分的标准曲线，分别计算出N种指标成分各自的浓度C浓，并按照下列公式分别计算出供试品中N种指标成分各自的含量：含量＝C浓*V/M。...

【技术特征摘要】
1.中药覆盆子中指标成分含量的测定方法，包括以下步骤：
(1)制备供试品溶液
将质量为M的中药覆盆子与V体积0～100％甲醇混合，得到二者混合液，在
确定混合液的重量M1后，对其进行提取操作，然后用0～100％甲醇将所述混合液
的重量补足至M1，取上清液，即得供试品溶液；
(2)制备混合对照品溶液
分别称取中药覆盆子中N种指标成分的对照品，分别用0～100％甲醇溶解，
定容，得到具有已知浓度的各指标成分的对照品溶液；
再分别量取各指标成分的对照品溶液，混合，用0～100％甲醇定容，得到混
合对照品储备液，所述混合对照品储备液中各指标成分具有已知浓度；
将对照品混合储备液用0～100％甲醇逐级稀释成一系列分别具有不同已知
浓度的混合对照品溶液；
(3)超高效液相色谱检测
色谱条件包括：固定相：采用十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱；流动相：
A相为乙腈，B相为0.1％甲酸，A相:B相为(3～70):(97～30)；流速为0.2～1.0mL/min，
柱温为30～50℃，PDA检测器，检测波长为253～344nm；
在所述色谱条件下，将V1体积的供试品溶液及各浓度的混合对照品溶液分
别注入超高效液相色谱仪中，获得供试品溶液的超高效液相色谱图及各浓度混
合对照品溶液的超高效液相色谱图；
(4)建立N种指标成分各自的标准曲线
以各混合对照品溶液的超高效液相色谱图中各指标成分的色谱峰峰面积为
纵坐标或横坐标，以混合对照品溶液中各指标成分的浓度为横坐标或纵坐标，
分别建立各指标成分的标准曲线；
(5)确定N种指标成分在供试品中各自的含量
根据供试品溶液超高效液相色谱图中N种指标成分各自的色谱峰峰面积，及

\t已建立的各指标成分的标准曲线，分别计算出N种指标成分各自的浓度C浓，并按
照下列公式分别计算出供试品中N种指标成分各自的含量：
含量＝C浓*V/M。
2.如权利要求1所述的中药覆盆子中指标成分含量的测定方法，其特征在
于，所述提取为超声提取。
3.如权利要求1所述的中药覆盆子中指标成分含量的测定方法，其特征在
于，在将所述混合液的重量补足至M1后，离心，再取上清...

【专利技术属性】
技术研发人员：柴欣，杨静，杜龙飞，江振作，李洁，朱彦，王跃飞，贺英，
申请(专利权)人：天津中医药大学，
类型：发明
国别省市：天津;12