本发明专利技术涉及一种配体取代的基质在抗体或抗体片段亲和纯化中的应用，所述配体取代的基质包括一种支撑材料和至少一种与所述支撑材料共价键合的配体，所述配体由结构式(I)表示L-(Sp)v-Ar1-Am-Ar2(I)其中L是支撑材料上配体附连的连接点；Sp是间隔基团；v为0或1；Am是酰胺基-NR1-C(O)-，其中要么NR1与Ar1附连且-C(O)-与Ar2附连，要么-C(O)-与Ar1附连且NR1与Ar2附连；以及R1是氢或C1-C4烷基，更优选为氢或甲基；最优选为氢；Ar1是一个通过化学键与Sp或L相连的5-、6-或7-元单核芳香环或部分饱和芳香环，且其还可选择地(a)通过化学键与一个进一步的5-或6-元单核芳香环附连；或(b)作为一个多核环体系的一部分，与一个单核或双核芳香环融合；其中Ar1通过化学键直接与Am相连，所述化学键存在于构成Ar1的所述5-、6-或7-元芳香环上，或通过化学键间接相连，所述化学键要么存在于与Ar1附连的进一步的5-或6-元芳香环上，要么存在于与Ar1融合的进一步的5-或6-元芳香环上；且其中Ar1要么没有被进一步取代，要么附连至至少一个取代基上，所述取代基选自C1-C4烷基、C3和C4环烷基、C2-C4链烯基、C2-C4炔基、卤素、C1-C4卤代烷基、羟基取代的C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羟基取代的C1-C4烷氧基、卤代C1-C4烷氧基、C1-C4烷氨基、C1-C4烷硫基、-NO2、＝O、＝S、＝NH、-OH以及它们的组合；Ar2是一个未被取代的5-或6-元单核芳香环，或通过化学键附连至至少一个取代基上，所述取代基选自C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C2-C6链烯基、C5和C6环烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羟基取代的C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷氧基、C1-C6烷氨基、C1-C6烷硫基、氨甲酰基、C1-C4亚烷二氧基(优选为亚甲二氧基和亚乙二氧基)、-OH、-SH、5-或6-元单核芳香环以及它们的组合；且其中Ar2除了可通过化学键连接到上述取代基上，还可选择地作为多核环体系的一部分，与一个5-或6-元单核芳香环融合。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术涉及一种配体取代的基质在抗体或抗体片段亲和纯化中的应用，所述配体取代的基质包括一种支撑材料和至少一种与所述支撑材料共价键合的配体，所述配体由结构式(I)表示L-(Sp)v-Ar1-Am-Ar2(I)其中L是支撑材料上配体附连的连接点；Sp是间隔基团；v为0或1；Am是酰胺基-NR1-C(O)-，其中要么NR1与Ar1附连且-C(O)-与Ar2附连，要么-C(O)-与Ar1附连且NR1与Ar2附连；以及R1是氢或C1-C4烷基，更优选为氢或甲基；最优选为氢；Ar1是一个通过化学键与Sp或L相连的5-、6-或7-元单核芳香环或部分饱和芳香环，且其还可选择地(a)通过化学键与一个进一步的5-或6-元单核芳香环附连；或(b)作为一个多核环体系的一部分，与一个单核或双核芳香环融合；其中Ar1通过化学键直接与Am相连，所述化学键存在于构成Ar1的所述5-、6-或7-元芳香环上，或通过化学键间接相连，所述化学键要么存在于与Ar1附连的进一步的5-或6-元芳香环上，要么存在于与Ar1融合的进一步的5-或6-元芳香环上；且其中Ar1要么没有被进一步取代，要么附连至至少一个取代基上，所述取代基选自C1-C4烷基、C3和C4环烷基、C2-C4链烯基、C2-C4炔基、卤素、C1-C4卤代烷基、羟基取代的C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羟基取代的C1-C4烷氧基、卤代C1-C4烷氧基、C1-C4烷氨基、C1-C4烷硫基、-NO2、＝O、＝S、＝NH、-OH以及它们的组合；Ar2是一个未被取代的5-或6-元单核芳香环，或通过化学键附连至至少一个取代基上，所述取代基选自C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C2-C6链烯基、C5和C6环烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羟基取代的C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷氧基、C1-C6烷氨基、C1-C6烷硫基、氨甲酰基、C1-C4亚烷二氧基(优选为亚甲二氧基和亚乙二氧基)、-OH、-SH、5-或6-元单核芳香环以及它们的组合；且其中Ar2除了可通过化学键连接到上述取代基上，还可选择地作为多核环体系的一部分，与一个5-或6-元单核芳香环融合。【专利说明】用于抗体和Fc-融合蛋白亲和色谱IV纯化的配体
本专利技术涉及蛋白分离领域，尤其涉及通过亲和分离技术对含有免疫球蛋白化区 段的单克隆和多克隆抗体及融合蛋白的提纯，特别是利用小分子配体的色谱。
技术介绍
免疫球蛋白是在人类和其他脊椎动物体液内发现的一类可溶性蛋白。它们也称作 "抗体"，并在细胞识别、结合和粘着的过程中发挥关键作用。抗体是低聚物的糖蛋白，其通 过识别和消灭抗原而在免疫系统中扮演着重要角色，抗原一般是指细菌和病毒。 抗体聚合链的构造包括所谓的重链和轻链。基本的免疫球蛋白单元含有通过二硫 键连接的两条相同的重链和两条相同的轻链。重链有五种类型（a, Y，6, ￡，y)，它们决 定了免疫球蛋白的类型。轻链组包括两种亚型，入和K。 IgG是在血液和其它体液内发现的可溶性抗体。它们由B细胞衍生的浆细胞构成， W对细菌或其它病原体作出反应并压制它。IgG是一种分子量约为150kDa的Y形糖蛋白， 包括两个重链和两个轻链。每个链都区别于一个恒定区和一个可变区。重链的两个駿基末 端域形成化片段（"恒定片段"），重链和轻链的氨基末端域识别抗原，并被称为Fab片段 ("抗原结合片段"）。 抗体的化片段和蛋白或蛋白域结合形成化融合蛋白，为一个给定药物的标祀提 供特异性。例如域抗体-化融合蛋白，其中化片段的两个重链只与特定抗体的重链（VH) 可变区或轻链（VL)可变区中的一个相连。其它Fc融合蛋白是Fc片段与任意类型的治疗 性蛋白或蛋白域的结合。Fc部分可增加蛋白药物的稳定性和传递性。 治疗性抗体和化融合蛋白用于治疗各种疾病，突出性的例子包括风湿性关节炎、 银屑病、多发性硬化症和多种形式的癌症。治疗性抗体可W是单克隆抗体或多克隆抗体。 单克隆抗体是由一种单一的抗体产生的细胞系，显示出针对一种单一抗原的相同的特异 性。癌症的可能治疗方法包括可压制肿瘤细胞特异性抗原的抗体。贝伐单抗（Avastin， Genentech公司）是一种单克隆抗体，其可压制血管内皮生长因子（VEGF)，从而防止新血管 生长至肿瘤组织内。 治疗性融合蛋白，如依那西普巧nbrel，Amgen公司，与化片段连接的TNF-受体 域）或阿法赛特（Amevive，Biogen Idee公司，与人IgGl的化部分连接的LFA-3)被利用 或开发作为抵抗自身免疫性疾病的药物。 蛋白的生物分离是指从各种生物的原料流中恢复和纯化蛋白产品，它是食品、制 药和生物技术工业中的重要操作单元。越来越多的治疗性单克隆抗体（Mgb,)和融合蛋白 正在进入市场，或处于临床开发中。该种蛋白需要特别高的纯度，并由复杂的多步骤纯化实 现。下游加工和提纯构成约50%至80%的制造成本，因此，开发新的或改进现有的提纯策 略（1)仍需相当大的努力。 亲和色谱是一种最有效的用于纯化蛋白的方法。它基于蛋白与配体相互作用的高 度特异性。配体与固定相共价结合，而固定相用于从原料溶液中捕获祀蛋白。亲和配体能 够高特异性和选择性地结合它们的标祀，从而从复杂混合物中获取多达千倍的富集产率。 通常，大多数单克隆抗体和化融合蛋白的纯化方案的第一步是蛋白A的亲和色 谱。蛋白A是暴露于细菌金黄色葡萄球菌的表面上的，与细胞壁相关的蛋白。其W纳摩尔 级的亲和力与不同物种的免疫球蛋白的恒定部分（化域）结合，尤其是人的IgGi、IgGs和 IgG4(2)亚型。然而，蛋白A的应用受到会渗入产物和在应用于W适当的程序进行消毒和清 洁的苛刻条件下稳定性差的限制。蛋白A的化学稳定性可W通过利用基因工程蛋白A的变 体的单克隆抗体纯化加 W改善。然而，蛋白A树脂的高成本致使需要寻找合适的替代品，特 别是小分子替代品。 Mabsorbent A2P(Prometic Biosciences公司）是一种用于纯化免疫球蛋白的小 分子配体。但是该配体没有适当的选择性（3)，不能应用在色谱处理中。 另一种方法是将混合模式色谱作为抗体纯化的基本捕捉步骤。最常用的材料基于 固定的2-琉基己基化巧（MEP HyperCel，化11公司），其可有效地从发酵肉汤中捕捉IgG， 但与蛋白A相比具有较低的宿主细胞蛋白化(P)清除率。（4) 合成的小分子亲和配体是在纯化治疗性蛋白中特别令人感兴趣的，因为它们普遍 具有较高的化学稳定性和较低的生产成本。合成的亲和配体更加容易获得，比基于蛋白的 配体尤为便宜，其在严格条件下更坚固，并具有可与蛋白A相媳美甚至高于蛋白A的选择 性，可能为抗体和Fc融合蛋白的纯化提供合适的方案。取决于祀蛋白，该种亲和配体最好 是可提供与蛋白A相同的广泛适用性的，能识别IgG型免疫球蛋白和化融合蛋白的恒定化 区。 本专利技术要解决的问题是提供一种与抗体和化融合蛋白的化区相结合的小分子亲 和配体（化合物）。优选地，小分子配体本身必须可与基质结合。本专利技术进一步的问题是， 提供一种基质，包括与抗体和化融合蛋白的化区相结本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种配体取代的基质在抗体或抗体片段的亲和纯化中的应用，所述配体取代的基质包括一种支撑材料和至少一种与所述支撑材料共价键合的配体，所述配体由结构式(I)表示L‑(Sp)v‑Ar1‑Am‑Ar2(I)其中L是支撑材料上配体附连的连接点；Sp是间隔基团；v为0或1；Am是酰胺基‑NR1‑C(O)‑，其中要么NR1与Ar1附连且‑C(O)‑与Ar2附连，要么‑C(O)‑与Ar1附连且NR1与Ar2附连；以及R1是氢或C1‑C4烷基，更优选地为氢或甲基；最优选为氢；Ar1是一个通过化学键与Sp或L相连的5‑、6‑或7‑元单核芳香环或部分饱和芳香环，且其还可选择地(a)通过化学键与一个进一步的5‑或6‑元单核芳香环附连；或(b)作为一个多核环体系的一部分，与一个单核或双核的芳香环融合其中Ar1通过化学键直接与Am相连，所述化学键存在于构成Ar1的所述5‑、6‑或7‑元芳香环或部分饱和芳香环上，或通过化学键间接相连，所述化学键要么存在于与Ar1附连的进一步的5‑或6‑元芳香环上，要么存在于与Ar1融合的进一步的5‑或6‑元芳香环上；且其中Ar1要么没有被进一步被取代，要么附连至至少一个取代基上，所述取代基选自C1‑C4烷基、C3和C4环烷基、C2‑C4烯基、C2‑C4炔基、卤素、C1‑C4卤代烷基、羟基取代的C1‑C4烷基、C1‑C4烷氧基、羟基取代的C1‑C4烷氧基、卤代C1‑C4烷氧基、C1‑C4烷氨基、C1‑C4烷硫基、‑NO2、＝O、＝S、＝NH、‑OH以及它们的组合；Ar2一个是未被取代的5‑或6‑元单核芳香环，或通过化学键附连至至少一个取代基上，所述取代基选自C1‑C6烷基、C3‑C6环烷基、C2‑C6烯基、C5和C6环烯基、C2‑C6炔基、卤素、C1‑C6卤代烷基、羟基取代的C1‑C6烷基、C1‑C6烷氧基、羟基取代的C1‑C6烷氧基、卤代C1‑C6烷氧基、C1‑C6烷氨基、C1‑C6烷硫基、氨甲酰基、C1‑C4亚烷二氧基，优选为亚甲二氧基和亚乙二氧基、‑OH、SH、5‑或6‑元单核芳香环以及它们的组合；且其中Ar2除了可通过化学键附连至上述取代基上，还可选择地作为一个多核环体系的一部分，与一个5‑或6‑元单核芳香环融合。...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：比特曼·霍尔格，阿诺德·马克，诺伊曼·托马斯，奥特·英奇，施密特·克里斯汀娜，塞库拉·雷纳特，
申请(专利权)人：努艾利克斯德国股份有限公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE
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