本发明专利技术公开一种通关藤的快速繁殖方法，属于植物无性繁殖技术领域。该方法包括选用通关藤当年新生梢为外植体，用流水冲洗、洗衣粉水浸泡、乙醇溶液浸泡及用质量分数浓度为0.1％氯化汞溶液浸泡11～12min后，进行诱导培养、增殖培养、壮苗培养及生根培养。本发明专利技术方法诱导率达88％以上，每月可增殖2.5倍左右，生根率达95％以上，整个繁殖周期仅需64天～72天，实现了通关藤有效快速的无性繁殖，适宜规模化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物无性繁殖
，具体涉及一种中药材通关藤的快速繁殖方 法。
技术介绍
通关藤（Marsdeniatenocissima(Roxb)WightetArm)为萝摩科牛奶菜属藤本植 物，又名乌骨藤。始载于《滇南本草》，广泛分布于亚洲的热带和亚热带地区。其全株都具 有清热解毒、消炎止痛和止咳平喘之功效。通关藤所含的乌骨消癌素（C21-留体甙和乌骨总 碱）对癌细胞分裂的根源_微管排列有很强的破坏作用，可阻断癌细胞的有丝分裂，从而有 效切断癌细胞扩散、转移，癌症因此萎缩直至完全消失。可用于晚期肺癌、急性白血病、食管 癌、胃癌、肝癌、喉癌、鼻咽癌等各种晚期恶性肿瘤的治疗。以通关藤为主要原料制备而成的 中药消癌平制剂，疗效良好。 目前，通关藤主要依靠自然繁育和有限的野生资源供给。由于通关藤野生资源遭 到严重破坏，而药材需求量仍逐年提高，通关藤自身花多果少的生物特性，其植物自然繁殖 力低。加之，高强度的砍伐采收，致使当前通关藤野生资源量急剧萎缩，人工繁育势在必行。 优质种苗的快速获取是通关藤栽培最为关键的基础环节。而种子繁殖得到的实生苗，品种 容易退化，并且生长周期长，结实率低；其次扦插繁殖虽然成活率高，但后期感病严重，很难 满足市场的需求。因此，探索一种具有快速、适宜规模化的通关藤优质种苗组培无性繁殖方 法，对保证通关藤原料药材的持续供应具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是要解决通关藤种子繁殖率低、生长周期长，变异性较大，扦插繁殖 苗容易感病的技术问题，提供一种适宜规模化生产、繁殖快、成活率高的通关藤的快速繁殖 方法。本专利技术所提供的的技术方案如下： (1)外植体的选择与灭菌处理 选取无病虫害的通关藤当年新生梢，剪成带一个芽的单芽茎段为外植体，按如下 顺序进行初步灭菌：用流水冲洗2. 5h，放入质量分数为5 %洗衣粉水中浸泡5min，流水条 件下冲洗25min;将经过初步灭菌处理过的通关藤茎段用体积分数为75%乙醇溶液浸泡 lmin，然后用质量分数为0. 1 %氯化采溶液浸泡11?12min后，再用无菌水洗绦3?5次， 用无菌纸吸干茎段表面水分备用； (2)诱导培养 将步骤（1)灭菌处理的外植体切成长度为0. 5cm?I.Ocm带有一个芽的茎段接种 于诱导培养基中，培养条件为：温度25°C士 2°C，光照强度2000-2500LX，光周期为12h/12h， 空气相对湿度保持在70%?80%;所述的诱导培养基为以5+6-84 2.011^/1+隱4 0.511^/1+ 蔗糖 25g/L+ 琼脂 7.lg/L，pH值 5. 8 ; ⑶增殖培养 诱导培养形成的芽长到2?3cm时，切取带有一个芽的茎段，接种于增殖培养基 中，培养条件与步骤（2)相同；所述的增殖培养基为：MS+6-BAI.Omg/L+NAA0. 3mg/L+蔗糖 25g/L+琼脂 7.lg/L，pH值 5.8 ; ⑷壮苗培养 将增殖培养形成的增殖苗分切成带一个芽的茎段，接种于壮苗培养基中，培养条 件与步骤（2)相同；所述的壮苗培养基为：MS+6-BAI.Omg/L+NAA0? 3mg/L++NH4N030 . 66g/ L+NaH2P040. 56g/L+K2S04l. 78g/L+ 香蕉 100g/L+ 蔗糖 25g/L+ 琼脂 7.lg/L，pH值 5. 8; (5)生根培养 步骤（4)的苗长到I. 5cm以上时，剪切成长为0. 8cm?I. 2cm、至少带一个芽的 茎段接种于生根培养基中，培养条件与步骤（2)相同；所述的生根培养基为：l/2MS+6-BA 0? 5mg/L+IAA0? 2mg/L+蔗糖25g/L+琼脂7.lg/L，pH值5. 8,待生根并长出4?5片新叶时 炼苗移栽。 本专利技术的有益效果是： 1、本专利技术为通关藤人工繁育提供了新的途径。 本专利技术通关藤组织培养的方法，使通关藤能保持亲本的优良性状，缩短繁育周期， 提高繁殖系数，提高产量和质量，缓解了市场用药压力，解决了通关藤由于花多果少而致的 结实率低，种子繁育周期长，易变异的缺陷。 2、本专利技术通过大量试验和研宄，筛选出通关藤各个生理时期生长所需营养的培养 基配方及各参数，达到诱导率高（88 %以上），增殖倍数高（每月可增殖2?2. 5倍），生根 率高，可达95%以上。各组培配方的协同配合，组培繁殖周期短，繁殖率高，整个繁殖周期仅 需64天?72天，实现了通关藤有效快速的无性繁殖，达到了适宜规模化生产、繁殖快、有抗 性、成活率高的目的，对加快通关藤优良无性系的推广和保证抗癌原料药持续稳定供应具 有非常重要的作用和意义。 3、本专利技术方法还能提高了通关藤苗木对病虫害的抗性，解决了由于通关藤植株藤 茎疏松多孔，内含大量乳汁，扦插繁殖后容易感病的缺点，为通关藤人工栽培提供了优质种 苗。【具体实施方式】 以下结合实施例对本专利技术作进一步的说明。以下各实施例按常规组培要求对各种 玻璃器皿、培养基进行灭菌，并在常规的组培无菌条件下进行快速繁殖。各实施例无特殊说 明为常规方法。 实施例1 (1)外植体的选择与处理 外植体来源于云南省蒙自县野外的通关藤植株，选取无病虫害通关藤的当年新生 梢，剪成带一个芽的单芽茎段为外植体，按如下顺序进行初步灭菌：用流水冲洗2. 5h，放入 质量分数为5%洗衣粉水中浸泡5min，流水条件下冲洗25min;将经过初步灭菌处理过的通 关藤茎段用体积分数为75%乙醇溶液浸泡lmin，然后用质量分数为0. 1%氯化汞溶液浸泡 12min后，再用无菌水洗涤3?5次，用无菌纸吸干所述通关藤茎段表面水分备用。 由于通关藤嫩枝密被淡黄色绒毛，上面会粘着许多的尘埃物，采用一般方法不能 达到好的灭菌效果，甚至造成整个组培的失败，本专利技术经过大量试验（见表1)，得出必须用 本专利技术所述的灭菌方法出现的污染率最低，成活率是最高的状况，再用无菌水洗涤3?5 次，用无菌纸吸干通关藤茎段水分，放在已经灭过菌的培养皿上备用。 表1 0. 1%氯化汞在不同消毒时间对外植体成活率及培养基污染率的影响【主权项】1. ，其特征在于： (1) 外植体的选择与灭菌处理 选取无病虫害的通关藤当年新生梢，剪成带一个芽的单芽茎段为外植体，按如下顺序 进行初步灭菌：用流水冲洗2. 5h，放入质量分数为5%洗衣粉水中浸泡5min，流水条件下冲 洗25min;将经过初步灭菌处理过的通关藤茎段用体积分数为75%乙醇溶液浸泡lmin，然 后用质量分数为〇. 1 %氯化汞溶液浸泡11?12min后，再用无菌水洗涤3?5次，用无菌纸 吸干茎段表面水分备用； (2) 诱导培养 将步骤（1)经灭菌处理的外植体切成长度为0. 5cm?I.Ocm带有一个芽的茎段接种于 诱导培养基中，培养条件为：温度25°C士 2°C，光照强度2000-2500LX，光周期为12h/12h，空 气相对湿度保持在70%?80%;所述的诱导培养基为以5+6-842.01^/1+隱40.511^/1+蔗糖 25g/L+琼脂 7.lg/L，pH5.8 ; (3) 增殖培养 诱导培养形成的芽长到2?3cm时，切取带有一个芽的茎段，接种于增殖培养基中，培 养条件与步骤（2)相同；所述的增殖培养基为：MS+6-BAl. 0mg本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种通关藤的快速繁殖方法，其特征在于：(1)外植体的选择与灭菌处理选取无病虫害的通关藤当年新生梢，剪成带一个芽的单芽茎段为外植体，按如下顺序进行初步灭菌：用流水冲洗2.5h，放入质量分数为5％洗衣粉水中浸泡5min，流水条件下冲洗25min；将经过初步灭菌处理过的通关藤茎段用体积分数为75％乙醇溶液浸泡1min，然后用质量分数为0.1％氯化汞溶液浸泡11～12min后，再用无菌水洗涤3～5次，用无菌纸吸干茎段表面水分备用；(2)诱导培养将步骤(1)经灭菌处理的外植体切成长度为0.5cm～1.0cm带有一个芽的茎段接种于诱导培养基中，培养条件为：温度25℃士2℃，光照强度2000‑2500Lx，光周期为12h/12h，空气相对湿度保持在70％～80％；所述的诱导培养基为：MS+6‑BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖25g/L+琼脂7.1g/L，pH5.8；(3)增殖培养诱导培养形成的芽长到2～3cm时，切取带有一个芽的茎段，接种于增殖培养基中，培养条件与步骤(2)相同；所述的增殖培养基为：MS+6‑BA1.0mg/L+NAA0.3mg/L+蔗糖25g/L+琼脂7.1g/L，pH5.8；(4)壮苗培养将增殖培养形成的增殖苗分切成带一个芽的茎段，接种于壮苗培养基中，培养条件与步骤(2)相同；所述的壮苗培养基为：MS+6‑BA1.0mg/L+NAA0.3mg/L+NH4NO30.66g/L+NaH2PO40.56g/L+K2SO41.78g/L+香蕉100g/L+蔗糖25g/L+琼脂7.1g/L，pH5.8；(5)生根培养步骤(4)的苗长到1.5cm以上时，剪切成长为0.8cm～1.2cm、至少带一个芽的茎段接种于生根培养基中，培养条件与步骤(2)相同；所述的生根培养基为：1/2MS+6‑BA0.5mg/L+IAA0.2mg/L+蔗糖25g/L+琼脂7.1g/L，pH5.8，待生根并长出4～5片新叶时炼苗移栽。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：韩俊，杨生超，颜秋燕，候建凯，龙光强，黄鹤，李连文，王自林，沈雪梅，杨丕琼，
申请(专利权)人：云南农业大学，
类型：发明
国别省市：云南;53
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