一种替考拉宁在抗埃博拉病毒中的应用制造技术

本发明专利技术发现了替考拉宁在抗埃博拉病毒中的应用。所述的替考拉宁抑制埃博拉病毒的包膜蛋白GP。所述的包膜蛋白GP为2014年爆发的埃博拉病毒扎伊尔型包膜蛋白。所述的替考拉宁类抑制埃博拉病毒进入宿主细胞发挥作用。

【技术实现步骤摘要】
一种替考拉宁在抗埃博拉病毒中的应用
本专利技术涉及抗病毒药物的新应用，更具体地，涉及一种替考拉宁在抗埃博拉病毒中的应用。
技术介绍
2014年，埃博拉病毒在西非多个国家的肆虐爆发，已经夺去了成千上万无辜人民的生命。这是近四十年以来，埃博拉疫情有史以来最重大、最严峻以及最复杂的一次爆发。在埃博拉病疫情爆发之前，该病毒于1976年就曾发现于非洲，后来又快速地退回到丛林。直到现在，这个不起眼的埃博拉病毒，仍然以极其罕见的速度吞噬受感染者的生命，几乎没有任何阻力，药物开发显得如此迫切，甚至还没有批准的药物和疫苗都上阵了。埃博拉病毒是一类具有包膜和单链反义RNA基因组的丝状病毒，其感染可使人类和非人灵长目动物体内产生严重的病毒性出血热，并造成高达50-90％的病死率。然而，目前世界上却缺乏有效的抗埃博拉病毒的疫苗和药物。因此，面对如此严峻的埃博拉危机，有目的、有计划、有组织地尽快推进抗埃博拉病毒药物的研发工作，开发出经济方便且无副作用的药物，已经成为目前整个社会预防和抵抗埃博拉病毒入侵的紧迫任务，具有极其重要的意义。
技术实现思路
目前针对埃博拉病毒，市场没有现成的抗病毒药物可以使用。本专利技术提供一种老药新的应用，一种替考拉宁在抗埃博拉病毒中的应用，所述的替考拉宁的结构式如式I所示：所述的R为，目前市场上卖的替考拉宁实际上就是一种混合物，R为侧链脂肪酸。所述的替考拉宁类抑制埃博拉病毒的包膜蛋白GP，尤其是可以抑制2014年大爆发的扎伊尔型包膜蛋白。所述的考拉宁类抑制埃博拉病毒进入宿主细胞。更具体地，提供一种替考拉宁在制备抑制包膜蛋白GP的药物中的应用。本专利技术的优点在于：1.本专利技术利用pHIV-luc、pCMV-deltaR8.2和EBOV-GP质粒转染至293T细胞，包装出可以表达埃博拉病毒包膜蛋白的假病毒，再用这些假病毒来感染293T细胞，从而模拟埃博拉病毒感染宿主细胞的一种状态。2.本专利技术运用此种假病毒包装的细胞模型，筛选上千个已经上市使用的库，从而发现了抗菌素替考拉宁可以有效的抑制埃博拉病毒感染293T细胞的现象，经多个实验证实，该抗菌素替考拉宁具有良好的抗病毒作用，IC50为200nM。3.此药物对人体的安全性早已经过了临床实践的检验，我们目前确定了替考拉宁抗埃博拉病毒的明显药效，即可在国家药监局紧急备案和批准后，直接用于临床治疗的第一线，避免了新药研发的漫长周期，这为我们进一步的研发抗埃博拉病毒药物提供的强有力的理论基础和实践基础，具有重要的开发价值和推广意义。4.根据本专利技术的研究发现替考拉宁对埃博拉病毒包膜蛋白GP，尤其是2014年西非大爆发的扎伊尔型包膜蛋白有明显的抑制作用。附图说明图1为不同浓度的抗菌素替考拉宁对水疱性口炎病毒包膜EBOV-G的抑制效果。图2为不同浓度的抗菌素替考拉宁对水疱性口炎病毒包膜VSV-G的抑制效果。图3为抗菌素替考拉宁在293T细胞中的CC50。图4为抗菌素替考拉宁在293T细胞中的IC50。图5为不同浓度的抗菌素替考拉宁在人肺癌细胞系A549细胞中的抑制作用。图6为不同浓度的抗菌素替考拉宁在人宫颈癌细胞系Hela细胞中的抑制作用。图7为不同浓度的抗菌素替考拉宁在人单核巨噬细胞THP-1细胞中的抑制作用。图8为不同浓度的抗菌素替考拉宁在人脐静脉内皮细胞HUVEC细胞中的抑制作用。具体实施方式下面结合附图和具体实施例进一步详细说明本专利技术。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、设备和方法为本
常规市购的试剂、设备和常规使用的方法。埃博拉病毒扎伊尔型包膜蛋白GP序列如SEQIDNO.1所示，附图中显示的ZaireEBOV-GP2014即为埃博拉病毒扎伊尔型包膜蛋白。实施例1不同浓度的抗菌素替考拉宁对埃博拉病毒包膜蛋白GP的抑制效果(1)包病毒：将pHIV-luc、pCMV-deltaR8.2和EBOV-GP质粒转染至293T细胞(10cmdish)，48小时后，收集病毒上清，测p24。(2)感染：将p24-normalizedHIV-luc/EBOV-GPpseudotypeviruscontaining8ug/mlPolybrene感染96孔板中的293T细胞，同时加入不同浓度的抗菌素替考拉宁。(3)换液：感染12小时后，换新鲜的DMEM培养基。(4)检测luciferase活性：感染48小时后，每孔用PBS洗一次，然后加入100ullysisbufer，震荡30min,取10ul裂解液检测luciferase活性。实施例2不同浓度的抗菌素替考拉宁对水疱性口炎病毒包膜VSV-G的抑制效果(1)包病毒：将pHIV-luc、pCMV-deltaR8.2和VSV-G质粒转染至293T细胞(10cmdish)，48小时后，收集病毒上清，测p24。(2)感染：将p24-normalizedHIV-luc/VSV-Gpseudotypeviruscontaining8ug/mlPolybrene感染96孔板中的293T细胞，同时加入不同浓度的抗菌素替考拉宁。(3)换液：感染12小时后，换新鲜的DMEM培养基。(4)检测luciferase活性：感染48小时后，每孔用PBS洗一次，然后加入100ullysisbufer，震荡30min,取10ul裂解液检测luciferase活性。根据实施例1和实施例2的结果说明，抗菌素替考拉宁可以特异性的作用于埃博拉病毒的包膜蛋白EBOV-GP，抑制埃博拉病毒的进入，而对水疱性口炎病毒包膜VSV-G的包膜蛋白没有任何抑制作用。实施例3毒性CC50测试MTS(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfopheny)-2H-tetrazolium,innersalt)是一种新合成的四唑类，它与MTT的应用原理相同，即被活细胞线粒体中的多种脱氢酶还原成各自有色的甲瓒产物，其颜色深浅与某些敏感细胞株的活细胞数在一定范围内呈高度相关。根据测得的490n的吸光度值(OD值)，来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强，则表示药物毒性越小。(1)接种细胞，用含10％胎小牛血清的DMEM培养液将293t配成单个细胞悬液，以每孔1000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul(2)24h贴壁后加入抗菌素替考拉宁，每孔2μl，终浓度分别为50μM(3)培养48h后，每孔加MTS溶液20ul，继续在培养箱中孵育2～4h(4)选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，观察对293t细胞的细胞毒性。从图3可以看出，替考拉宁毒性较低，在293t细胞中50uM浓度均呈现成无细胞毒现象。实施例4(1)包病毒：将pHIV-luc、pCMV-deltaR8.2和EBOV-GP质粒转染至293T细胞(10cmdish)，48小时后，收集病毒上清，测p24。(2)感染：将p24-normalizedHIV-luc/EBOV-GPpseudotypeviruscontaining8ug/mlPolybrene感染96孔板中的293T细胞，同时加入不同浓度的抗菌素替考拉宁，终浓度分别为50μM，5μM，0.5μM，0.05μM，0.005μM，0μM；(3)换液：感染12小时后，换新鲜的DME本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种替考拉宁在抗埃博拉病毒中的应用。

【技术特征摘要】
1.一种替考拉宁在制备抑制埃博拉病毒中包膜蛋白GP药物的应用。2.根据权利要求1所述的替考拉宁在制备抑制埃博拉病毒中包膜蛋白GP药物的应用，其特征在于，包膜蛋白GP为20...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘婷，张辉，周南，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东;44