本发明专利技术提供了稳定单一可变域的方法，尤其是在蛋白酶富集的环境(例如胃和肠)中。提供了包含单一可变域和甲磺酸卡莫司他的组合物(尤其是药物组合物)，以及所述组合物作为药物和在治疗方法中的用途。本发明专利技术的组合物尤其用于胃肠道病症(例如克罗恩病或溃疡性结肠炎)的局部治疗，或直接作用于肠黏膜免疫系统。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】包含单一可变域和甲磺酸卡莫司他（CM)的组合物
技术介绍
绝大多数生物药物（尤其是治疗性抗体及其片段）通过胃肠外途径（例如静脉或 皮下注射）进行给药。这些给药途径通常是不方便且痛苦的，这降低了患者的顺应性，尤其 是当需要每日多次注射时。对于保健医疗提供者而言，在工作人员的时间、储存和设备方 面，这些生物药物也是花费巨大的。 口服给药生物药物将克服许多的这些缺点，但也具有其自身的问题。具体地，这些 分子易在胃和肠的蛋白酶富集的环境中发生蛋白降解。 重点是，对治疗胃肠（GI)道疾病的口服药物存在需求。尤其是对以低剂量使用的 药物存在需求，以降低系统毒性的风险。 因此，迫切地需要稳定蛋白以便使它们抵御胃肠道的蛋白酶富集的环境，从而促 成成功口服给药生物药物。 专利技术概沐 本专利技术提供了组合物（任选地药物组合物），其包含甲磺酸卡莫司他（camostat mesylate)和单一可变域。 提供了用作药物的本专利技术的组合物。还提供了本专利技术的组合物在制备药物中的用 途。尤其是所述组合物是口服给药的。 本专利技术提供了治疗胃肠道病症的方法，其包括以下步骤：向有此需要的患者给药 (任选地口服给药）本专利技术的组合物。 本专利技术还提供了稳定在蛋白酶富集的溶液中的单一可变域的方法，其包括将该单 一可变域配制于包含甲磺酸卡莫司他的组合物中，在该组合物暴露于蛋白酶富集的溶液之 刖。【附图说明】 图1显示了在模拟肠液（SIF)中培养的一组具有不同转变中点（transition midpoint) (Tm)的 dAb(TM)的半衰期。 图2显示了在SIF中培养的一组高Tm的dAb(TM)的半衰期。 图3显示了在存在或不存在CM的模拟肠液（SIF)中培养的一组具有不同转变中 点（Tm)的dAb(TM)的半衰期。 图4显示了在存在或不存在CM的SIF中培养的一组高Tm的dAb(TM)的半衰期。 图5显示了具有相同的预期胰蛋白酶切割位点但是不同Tm的两个dAb(TM)的半衰 期。将该dAb(TM)用存在和不存在CM时的胰蛋白酶培养。 图6显示了在不存在（a)和存在（b)CM的十二指肠内给药后的不同时间点，从肠 组织回收的dAb(TM)D0M101的量。结果表示为纳克/克组织。 图7显示了在存在和不存在CM的结肠内给药后，从大肠回收的dAb(tm)D0M101的 量。结果表示为纳克/克组织。 专利技术详沐 本专利技术提供了对上述问题的解决方法。本专利技术提供了稳定单一可变域的方法。提 供了包含单一可变域和甲磺酸卡莫司他的组合物（尤其是药物组合物），以及所述组合物 作为药物和在治疗方法中的用途。本文的实施例表明，甲磺酸卡莫司他（CM)可用于在禁食 的模拟肠液以及在小肠和大肠中稳定单一可变域（例如域抗体(TM)或dAb (TM))，并因此支持 了 CM在口服递送生物药物以局部治疗GI病症（例如克罗恩病或溃疡性结肠炎）以及直接 作用于肠黏膜免疫系统中的用途。 甲磺酸卡莫司他（CAS号：59721-29-8)的化学名为4-苯甲酰基]氧基]苯乙酸2-(二甲基氨基）-2-氧代乙基酯甲磺酸盐且其可从例 如Sequoia Research Products获得。甲磺酸卡莫司他（CM)是有口服活性的丝氨酸蛋 白酶抑制剂，其在日本和韩国被批准用于治疗胰腺炎和术后食道反流（Foipan Product information sheet ；Takasugi 等人，Digestion 1982,24:36 - 41 ;Kono 等人，Am J Surg. 2005S印，190(3) :412-7)。CM具有广谱抑制，包括胰蛋白酶、凝血酶、激肽释放酶和纤 溶酶（Tamura 等人，1977, Biochimica et Biophysica Acta 484,417 - 422)。CM 在肠内的 代谢尚不明确，但是CM的代谢产物GBPA本身是有活性的（Beckh等人，Res Exp Med，1987， 187:401-406)。 术语"单一可变域"是指折叠的多肽域，其包含以抗体可变域为特征的序列。因此， 其包括完整的抗体可变域（例如VH、VHH和VL)和经修饰的抗体可变域（例如，抗体可变域 中的一个或多个环被不是以抗体可变域为特征的序列代替，或者抗体可变域已被截短或包 含N-或C-端延长），以及可变域片段，其至少保留了全长结构域的结合活性和特异性。单 一可变域能够独立地结合不同可变区或可变域的抗原或表位。"域抗体?"或"dAb(TM) "可被 认为与"单一可变域"相同。单一可变域可为人单一可变域，但也包括源自其他物种（例如 啮齿类动物（例如，如WO 00/29004所公开）、铰口鲨和骆驼科动物的VHH dAb?)的单一可 变域。骆驼科动物的VHH是免疫球蛋白单一可变域，其衍生自以下物种，包括：骆驼、美洲驼 羊、羊驼、单峰骆驼和大羊驼，其产生天然缺乏轻链的重链抗体。可根据本领域可用的标准 技术将该VHH结构域人源化，且这种结构域被认为是"单一可变域"。本文所用的VH包括骆 驼科动物的VHH结构域。 抗祀点（anti-target)单一可变域，例如抗-TNFa单一可变域，是指结合至所述 靶点（例如TNF a)的单一可变域。所述靶点可为任意合适的靶点。在一个实施方式中，本 专利技术的单一可变域靶向以下的任一种：TNF a、IL-23、LAG-3、IL-6、IL-13、IL-18、TSLP、CD3 或前述任一个的受体，例如TNF a受体（例如TNFR a RI或TNFR a RH)、IL-23受体、LAG-3 受体、IL-6受体、IL-13受体、IL-18受体、TSLP受体或CD3受体。在一个实施方式中，本发 明的单一可变域靶向趋化因子或趋化因子受体，例如谷氨酸-亮氨酸-精氨酸受体，即ELR 受体（例如包含SEQ ID NO : 12和19-22所示的氨基酸序列的受体）。 亲和力是一个分子（例如本专利技术的单一可变域）与另一个分子（例如其靶点）在 单一结合位点处结合的力。单一可变域与其靶点的结合亲和力可通过平衡方法（例如酶联 免疫吸附测定（ELISA)或放射免疫测定（RIA))或动力学（例如BIAC0RE?分析）进行测 定。 在一个实施方式中，所述单一可变域-靶点间的相互作用的平衡解离常数（KD)为 IOOnM或更小、IOnM或更小、2nM或更小或InM或更小。或者，该KD可在5至IOnM之间；或 1至2nM之间。该KD可在IpM至500pM之间；或500pM至InM之间。本领域技术人员将理 解，KD数值越小，结合越强。KD的倒数（即1/KD)为具有单位M4的平衡结合常数（KA)。本 领域技术人员将理解，KA数值越大，结合越强。 解离速率常数（kd)或"解离速率（off-rate) "描述了单一可变域-靶点复合物 的稳定性，即每秒发生衰变的复合物的比例。例如，〇. OlsH的kd等于每秒有1 %的复合物 发生衰变。在一个实施方式中，该解离速率常数（kd)为IxKT3iT1或更小、1x10 ΛΓ1或更小、 ΙχΙΟ?或更小，或1x10 Λ-1或更小。该kd可在1x10-Υ1至1x10 Λ-1之间；或1x10 ΛΓ1至 1x10 3S 1 之间。 在整个申请中所用的术语"中和"是指本文档来自技高网...
【技术保护点】
包含甲磺酸卡莫司他和单一可变域的组合物。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：SM克利夫兰，S萨洛蒙，C范克林克斯，
申请(专利权)人：葛兰素集团有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB
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