本实用新型专利技术公开了一种陷孔式单细胞克隆分离专用培养板所述培养板，包括培养板本体，所述培养板本体上表面设有若干培养孔，每个培养孔的底板上设有若干规则排列的凹陷的小陷孔，各个小陷孔的侧壁以及各小陷孔之间的间隔的表面覆盖有超疏水纳米层，各个小陷孔的底部聚苯乙烯表面进行亲水性改性处理。本实用新型专利技术所提供的陷孔式单细胞克隆分离专用培养板及单细胞克隆分离方法，细胞只能在小陷孔的底部经过表面亲水改性的表面上粘附生长，而不能在覆盖有超疏水纳米层的其它部位贴壁生长，方便进行单细胞克隆分离操作。
【技术实现步骤摘要】
本技术涉及细胞培养，特别涉及一种陷孔式单细胞克隆分离专用培养板及单细胞克隆分离方法。
技术介绍
单细胞克隆指的是分离单个细胞，其增殖产生的后代都是来源于同一个细胞，即为单细胞克隆。进行单细胞克隆分离可采用以下方法。1、口控毛细管单细胞分离方法:将玻璃吸管在火焰上烧红后拉伸呈毛细管，并折断，另一端与无菌塑料管连接建立口控单细胞分离毛细管。操作时，在显微镜下将毛细管口对准目的单细胞，用口轻轻一吸，即可见到单个细胞被吸入玻璃毛细管，完成单细胞分离，转移至96孔板中继续扩大培养。但是这种方法对操作人员的技术要求较高；2、荧光流式细胞技术分离法:荧光激活流式细胞分离技术能够有效获得单个细胞，但是对流式细胞仪的性能要求较高，且仪器价格昂贵；3、显微操控仪:采用显微操控技术从单细胞悬液中吸取单细胞，但精细的操作以及贵重的仪器使研宄者望而却步。
技术实现思路
为克服上述现有技术的缺陷与不足，本技术提供一种陷孔式单细胞克隆分离专用培养板及单细胞克隆分离方法。本技术的技术方案是:一种陷孔式单细胞克隆分离专用培养板，包括培养板本体，所述培养板本体上表面设有若干培养孔，每个培养孔的底板上设有若干规则排列的凹陷的小陷孔，培养板本体上方盖有培养板盖。优选的，所述培养板本体为聚苯乙烯板。优选的，所述小陷孔直径5~8mm，深2~4mm。优选的，所述培养板本体上表面设有6个正方形培养孔。优选的，所述培养孔的底板上的小陷孔按10 X 10、9 X 9、8 X 8或7 X 7的矩阵排列。优选的，各个小陷孔的侧壁以及各小陷孔之间的间隔的表面覆盖有超疏水纳米层O优选的，所述超疏水纳米层为具有超疏水表面的聚苯乙烯、聚L-乳酸或聚四氟乙烯材料层，或者是阵列碳纳米管薄膜或氟化PEDOT薄膜。优选的，各个小陷孔的底部表面进行过改性处理，接枝羟基，或者羧基，或者氨基等亲水基团。优选的，每个小陷孔的右上方标有字母和数字的组合编号。一种使用陷孔式单细胞克隆分离专用培养板的单细胞克隆分离方法，包括步骤:S1、将细胞悬液浓度稀释至30~50 cells/ml，在培养板的方形培养孔内加入定量的细胞稀释液，细胞只能在各个小陷孔底部经过表面亲水改性的表面上粘附生长，而不能在其它表面覆盖有超疏水纳米层的部位粘附生长；S2、每天在显微镜下观察细胞生长情况，记录有单细胞克隆生长的小陷孔，吸弃培养液，PBS漂洗I次，吸除PBS，在有单细胞克隆生长的小陷孔中加入少量0.25%的胰酶，待细胞脱落，收集细胞；S3、收集消化好的单细胞悬液，经PBS重悬，在100rpm转速下离心lOmin，获取细胞沉淀，再次在100rpm转速下离心lOmin，获取细胞沉淀，用完全培养液重悬，将细胞转移至新的24孔板中，继续扩大培养，所得即为单细胞克隆。本技术的优点是:本技术所提供的陷孔式单细胞克隆分离专用培养板及单细胞克隆分离方法，培养板本体上表面设有若干培养孔，每个培养孔的底板上设有若干规则排列的凹陷的小陷孔，各个小陷孔的侧壁以及各小陷孔之间的间隔的表面覆盖有超疏水纳米层，各个小陷孔的底部聚苯乙烯表面进行亲水性改性处理，细胞只能在小陷孔的底部经过表面亲水改性的表面上粘附生长，而不能在覆盖有超疏水纳米层的其它部位贴壁生长，方便进行单细胞克隆分离操作。【附图说明】下面结合附图及实施例对本技术作进一步描述:图1为本技术型所述的陷孔式单细胞克隆分离专用培养板的培养板本体的俯视图；图2为本技术所述的培养板的一个培养孔的纵剖面结构示意图；图3为本技术所述的陷孔式单细胞克隆分离专用培养板盖上培养板盖的整体结构示意图。【具体实施方式】如图1-3所示，本技术所揭示的陷孔式单细胞克隆分离专用培养板，包括由聚苯乙烯制成的培养板本体I，所述培养板本体上表面设有6个培养孔2，每个培养孔2的底板上设有按10X 10矩阵排列的凹陷的小陷孔3，所述小陷孔直径5~8mm，深2~4mm。每个小陷孔的右上方标有字母和数字的组合编号，字母代表该小陷孔所在行，数字代表该小陷孔所在列，方便区分。培养板本体上方盖有培养板盖4。各个小陷孔的侧壁以及各小陷孔之间的间隔的表面覆盖有超疏水纳米层。超疏水纳米层为具有超疏水表面的聚苯乙烯、聚L-乳酸或聚四氟乙烯材料，超疏水纳米层还可以为超疏水的阵列碳纳米管薄膜或氟化PEDOT薄膜。上述超疏水纳米层的制作方法为现有技术中采用的方法，例如在聚苯乙烯、聚L-乳酸或聚四氟乙烯材料表面蚀刻具有一定粗糙度的微观结构从而构建超疏水表面，采用气相沉积的方法制备超疏水的阵列碳纳米管薄膜或氟化PEDOT薄膜。各个小陷孔的底部聚苯乙烯表面进行改性处理，接枝羟基(OH)，或者羧基(COOH)，或者氨基(NH或NH2)等亲水基团。本技术的陷孔式单细胞克隆分离专用培养板的单细胞克隆分离方法，包括步骤:S1、将细胞悬液浓度稀释至30~50 cells/ml，在培养板的方形培养孔内加入2 ml的细胞稀释液，细胞只能在各个小陷孔底部经过表面亲水改性的表面上粘附生长，而不能在其它经过超疏水处理的部位粘附生长；S2、每天在显微镜下观察细胞生长情况，记录有单细胞克隆生长的小陷孔，吸弃培养液，PBS漂洗I次，吸除PBS，在有单细胞克隆生长的小陷孔中加入少量0.25%的胰酶，待细胞脱落，收集细胞；S3、收集消化好的单细胞悬液，经PBS重悬，在100rpm转速下离心lOmin，获取细胞沉淀，再次在100rpm转速下离心lOmin，用完全培养液重悬，将细胞转移至新的24孔中，继续扩大培养，所得即为单细胞克隆。上述实施例只为说明本技术的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人能够了解本技术的内容并据以实施，并不能以此限制本技术的保护范围。凡根据本技术主要技术方案的精神实质所做的修饰，都应涵盖在本技术的保护范围之内。【主权项】1.一种陷孔式单细胞克隆分离专用培养板，其特征在于:包括培养板本体，所述培养板本体上表面设有若干培养孔，每个培养孔的底板上设有若干规则排列的凹陷的小陷孔，培养板本体上方盖有培养板盖。2.根据权利要求1所述的陷孔式单细胞克隆分离专用培养板，其特征在于:所述培养板本体为聚苯乙烯板。3.根据权利要求1所述的陷孔式单细胞克隆分离专用培养板，其特征在于:所述小陷孔直径5~8_，深2~4mm。4.根据权利要求1所述的陷孔式单细胞克隆分离专用培养板，其特征在于:所述培养板本体上表面设有6个正方形培养孔。5.根据权利要求4所述的陷孔式单细胞克隆分离专用培养板，其特征在于:所述培养孔的底板上的小陷孔按10X10、9X9、8X8或7X7的矩阵排列。6.根据权利要求1所述的陷孔式单细胞克隆分离专用培养板，其特征在于:各个小陷孔的侧壁以及各小陷孔之间的间隔的表面覆盖有超疏水纳米层。7.根据权利要求6所述的陷孔式单细胞克隆分离专用培养板，其特征在于:所述超疏水纳米层为具有超疏水表面的聚苯乙烯、聚L-乳酸或聚四氟乙烯材料层，或者是阵列碳纳米管薄膜或氟化PEDOT薄膜。8.根据权利要求7所述的陷孔式单细胞克隆分离专用培养板，其特征在于:各个小陷孔的底部表面进行过改性处理，接枝羟基，或者羧基，或者氨基等亲水基团。9.根据权利要求1所述的陷孔式单细胞克隆分离专用培养板，其本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种陷孔式单细胞克隆分离专用培养板，其特征在于：包括培养板本体，所述培养板本体上表面设有若干培养孔，每个培养孔的底板上设有若干规则排列的凹陷的小陷孔，培养板本体上方盖有培养板盖。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：何向锋，王建红，施文，强福林，沈康，
申请(专利权)人：何向锋，南通市肿瘤医院，
类型：新型
国别省市：江苏;32
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