检测动物源食品中残留药物的方法及液质数据库技术

本发明专利技术涉及一种用于检测动物源食品中残留药物的液质数据库及其使用方法，该数据库的制备包括如下步骤：(1)标准工作溶液的制备；(2)分析前处理，采用快速酶解+快速固相萃取(SPE)的提取净化技术进行待测样本分析前处理工作；(3)一次性进样色谱分析；(4)构建液质谱库。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物检测领域，具体而言，设及一种用于检测动物源食品中残留药物 的液质数据库及其使用方法。
技术介绍
动物源食品在国际农产品贸易中占相当比重，针对动物源食品中药物残留的法规 限制越来越严格，W日本06年5月实施的"肯定列表"制度为例，其对236种兽药和饲料添 加剂制定了具体限量标准，而在国内食品安全领域，从早期的"氯霉素、硝基快喃"到后来的 "孔雀石绿、瘦肉精"，因药物残留导致的食品安全事件频发凸显我国食品安全监管控制体 系技术支撑能力不足，迫切需要建立多种类残留快速筛选方法。目前，针对动物源食品中药 物残留检测技术和方法已由单残留分析发展到了单种类多残留分析，03年W来，W物质种 类界分的多残留检测标准占据了残留分析国家和行业标准的70%W上。同时期，质谱分析 已经成为多残留检测的主要技术手段，W欧盟2002/657/EC法规为藍本的技术指标规则也 为国际上所承认和接受。随着残留分析技术的发展，多种类残留分析在信息量、检测效率等 多方面具有优势使其成为研发热点，且质谱设备领域如Q-T0F，Q-Trap等串联质谱仪的实 用化，W高级质谱技术为基础的谱库比对分析逐渐成熟也为多种类残留快速分析提供了技 术可能。然而，无论是在方法开发、验证和标准化还是在法规完善等方面，同时检测多种类 残留都存在较多困难： (1)不同种类兽药物化性质差别很大，极性覆盖范围宽，在不同基质中残留形态不 一，个别兽药尚需衍生化方能有效检测，因此在通用前处理方法和色谱一次进样分析上难 W实现有效突破； (2)法规对不同兽药（禁用药物和限用药物）的限量要求和使用规定不一，多种类 残留检测验证规则尚未完善； (3)方法开发需要的空白基质难W获得，混合标准溶液制备困难； (4)仪器的分析能力。在构建液质谱库方面，尽管有商业化谱库如AB公司法医毒 物数据库（1250种目标分析物）、兽药数据库（139种目标分析物）；化eiburg大学医院的 小分子药物数据库等，但存在如下应用局限： 1)仅有MS/MS数据，无色谱体系信息特征； 2)无在线信息特征； 3)无统一前处理方法和仪器分析相偶联； 4)缺乏基质标准数据。 因此，在现有条件下，很难有效实现基于液质谱库技术的多种类残留快速筛查分 析。
技术实现思路
鉴于目前国内外在动物源食品多种类残留药物分析中存在的样品通用性前处理、 仪器快速分析和筛选方法验证等技术难点。本专利技术w建立动物源食品中高风险药物多种 类残留快速筛选检测体系为目的，通过采用多溶剂体系分段组合提取、建立样品高通量通 用性前处理技术、综合优化色谱体系实现多目标分析物宽极性范围液相色谱有效保留与分 离、并通过构建涵盖色谱-质谱多维信息的液相色谱-质谱/质谱数据库及依据法规要求 和检测实践进行筛选方法验证等关键
技术实现思路
的研发，突破多种类残留分析技术难关，建 立一个W多种类残留通用性前处理技术、快速分离体系和液质谱库为技术特征的开放性快 速分析平台和有效筛查检测技术体系。 本专利技术针对103种限量值在1. 0yg/kgW上高风险残留药物炬类残留物质）作 为检测目标，该组药物见表1， 表1.目标分析物化学信息【主权项】1. 一种检测动物源食品中高风险药物多种类残留的快速筛选液质谱库的构建方法，具 体包括如下步骤， (1) 标准工作溶液的制备； (2) 分析前处理，采用快速酶解释放结合态残留+快速固相萃取（SPE)的提取净化技术 进行待测样本分析前处理工作； (3) -次性进样色谱分析； (4) 构建液质谱库； 所述的动物源食品为动物肌肉类食品或奶类食品， 所述的高风险药物为限量值在I. 〇 μ g/kg以上高风险残留药物（B类残留物质)103种， 具体为： a. 雄性激素8种：群勃龙、甲基睾酮、诺龙、丙酸诺龙、苯丙酸诺龙、丙酸睾酮、去氢睾 酮、去氢甲睾酮； b. 孕激素6种：甲轻孕酮、甲轻孕酮乙酸醋、甲地孕酮、乙酸醋孕酮、美仑孕酮、乙酸醋 17 α -轻孕酮； c. 糖皮质激素6种：倍氯米松、氟氢可的松乙酸酯、氢化可的松、甲基泼尼松龙、泼尼 松、可的松； d. 硝基咪唑及代谢物5种：异丙硝唑、特硝唑、羟基甲硝哒唑、羟基二甲硝咪唑、羟基异 丙硝唑； e. 硝基呋喃代谢产物4种：呋喃西林代谢产物、呋喃妥因代谢产物、呋喃唑酮代谢产 物、呋喃他酮代谢产物； f. 氟喹诺酮类14种：沙拉沙星、恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、洛美沙星、 培氟沙星、司帕沙星、双氟沙星、达氟沙星、麻保沙星、奥比沙星、依诺沙星、氟甲喹； g. 喹诺酮类4种：吡哌酸、恶喹酸、吡咯酸、萘啶酸； h. β激动剂类8种：沙丁胺醇、叔丁喘宁、莱克多巴胺、沙美特罗、非诺特罗、甲氧酪胺、 氯丙那林、喷布洛尔； i. 磺胺类24种：磺胺嘧啶、磺胺-5-(对）甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺喹恶啉、磺胺 二甲氧嘧啶、磺胺-6-(间）甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲恶唑、磺胺噻唑、磺胺醋酰、磺 胺二甲恶挫、磺胺二甲异恶挫、磺胺甲噻二挫、磺胺氯哒嘆、磺胺二甲异喃啶、磺胺吡啶、磺 胺苯吡唑、磺胺氯吡嗪、磺胺甲基嘧啶、磺胺硝苯、磺胺苯酰、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺、磺胺 脒； j. 磺胺增效剂1种：甲氧苄啶； k. 大环内酯类11种：螺旋霉素、吉他霉素、替米考星、麦迪霉素、克拉霉素、阿奇霉素、 罗红霉素、交沙霉素、泰乐霉素、竹桃霉素、红霉素； l. 林可霉素； m. 四环素类4种：四环素、土霉素、金霉素、强力霉素； η.聚醚类5种：盐霉素、甲基盐霉素、莫能菌素、马杜霉素、拉沙洛菌素； 〇.染料类2种：孔雀石绿、隐色孔雀石绿。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1)所述的标准工作液的制备方法 为： a. 雄性激素类物质混合标准储备溶液（0.0 lg/L):包括群勃龙、甲基睾酮、诺龙、丙酸诺 龙、苯丙酸诺龙、丙酸睾酮、去氢睾酮、去氢甲睾酮，配制溶剂为乙腈； b. 孕激素类物质混合标准储备溶液（0.01g/L):包括甲羟孕酮、甲羟孕酮乙酸酯、甲地 孕酮、乙酸醋孕酮、美仑孕酮、乙酸醋17 α -轻孕酮，配制溶剂为乙腈； c. 糖皮质激素类物质混合标准储备溶液（〇.〇lg/L):包括倍氯米松、氟氢可的松乙酸 醋、氢化可的松、甲基泼尼松龙、泼尼松、可的松，配制溶剂为甲醇； d. 5-硝基咪唑类药物及其代谢产物混合标准储备溶液（0. 01g/L):包括异丙硝唑、特硝 唑、羟基甲硝哒唑、羟基二甲硝咪唑、羟基异丙硝唑，配制溶剂为乙腈； e. 硝基呋喃代谢产物以及2-硝基苯甲醛衍生化硝基呋喃代谢产物混合标准储备溶液 (0. 01g/L):呋喃西林代谢产物、呋喃妥因代谢产物、呋喃唑酮代谢产物、呋喃他酮代谢产物 及它们各自的2-硝基苯甲醛衍生化物，配制溶剂为乙腈； f. 氟喹诺酮类物质混合标准储备溶液（〇. 〇lg/L):包括沙拉沙星、恩诺沙星、环丙沙星、 氧氟沙星、诺氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、司帕沙星、双氟沙星、达氟沙星、麻保沙星、奥比 沙星、依诺沙星、氟甲喹，配制溶剂为乙腈； g. 喹诺酮类物质混合标准储备溶液（0. 〇lg/L):包括吡哌酸、恶喹酸、吡咯酸、萘啶酸， 配制溶剂为乙腈；h. β -受体激动剂类物质混合标本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测动物源食品中高风险药物多种类残留的快速筛选液质谱库的构建方法，具体包括如下步骤，（1）标准工作溶液的制备；（2）分析前处理，采用快速酶解释放结合态残留+快速固相萃取（SPE）的提取净化技术进行待测样本分析前处理工作；（3）一次性进样色谱分析；（4）构建液质谱库；所述的动物源食品为动物肌肉类食品或奶类食品，所述的高风险药物为限量值在1.0μg/kg以上高风险残留药物（B类残留物质）103种，具体为：a.雄性激素8种：群勃龙、甲基睾酮、诺龙、丙酸诺龙、苯丙酸诺龙、丙酸睾酮、去氢睾酮、去氢甲睾酮；b.孕激素6种：甲羟孕酮、甲羟孕酮乙酸酯、甲地孕酮、乙酸酯孕酮、美仑孕酮、乙酸酯17α‑羟孕酮；c.糖皮质激素6种：倍氯米松、氟氢可的松乙酸酯、氢化可的松、甲基泼尼松龙、泼尼松、可的松；d.硝基咪唑及代谢物5种：异丙硝唑、特硝唑、羟基甲硝哒唑、羟基二甲硝咪唑、羟基异丙硝唑；e.硝基呋喃代谢产物4种：呋喃西林代谢产物、呋喃妥因代谢产物、呋喃唑酮代谢产物、呋喃他酮代谢产物；f.氟喹诺酮类14种：沙拉沙星、恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、司帕沙星、双氟沙星、达氟沙星、麻保沙星、奥比沙星、依诺沙星、氟甲喹；g.喹诺酮类4种：吡哌酸、恶喹酸、吡咯酸、萘啶酸；h.β激动剂类8种：沙丁胺醇、叔丁喘宁、莱克多巴胺、沙美特罗、非诺特罗、甲氧酪胺、氯丙那林、喷布洛尔；i.磺胺类24种：磺胺嘧啶、磺胺‑5‑（对）甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺喹恶啉、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺‑6‑（间）甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲恶唑、磺胺噻唑、磺胺醋酰、磺胺二甲恶唑、磺胺二甲异恶唑、磺胺甲噻二唑、磺胺氯哒嗪、磺胺二甲异嘧啶、磺胺吡啶、磺胺苯吡唑、磺胺氯吡嗪、磺胺甲基嘧啶、磺胺硝苯、磺胺苯酰、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺、磺胺脒；j.磺胺增效剂1种：甲氧苄啶；k.大环内酯类11种：螺旋霉素、吉他霉素、替米考星、麦迪霉素、克拉霉素、阿奇霉素、罗红霉素、交沙霉素、泰乐霉素、竹桃霉素、红霉素；l.林可霉素；m.四环素类4种：四环素、土霉素、金霉素、强力霉素；n.聚醚类5种：盐霉素、甲基盐霉素、莫能菌素、马杜霉素、拉沙洛菌素；o.染料类2种：孔雀石绿、隐色孔雀石绿。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张鸿伟，张晓梅，梁成珠，
申请(专利权)人：山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：山东;37