本发明专利技术涉及一种Hsa-miR-96的新用途。本发明专利技术通过针对小鼠肿瘤模型的solexa测序，筛选了若干表达差异明显的miRNA，随后分别检测了这些miRNA在人类NSCLC细胞系和NSCLC病例组织之中的表达情况，确认了其与人类肺癌的相关性。我们发现：miRNA的表达水平变化与肺癌分期有着一定的关联性。在肺癌组织中，miR-96的表达量较癌旁组织有所上升，这种上调同样在NSCLC病人血清中得到验证。miR-96在I期NSCLC病人血清中的表达量显著提高，能成为NSCLC早期检测的潜在血清标记。其中所公开的为Hsa-miR-96作为NSCLC病人血清循环miRNA标记的首次报导，该发明专利技术在临床上为肺癌检测提供了一定的应用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种Hsa-miR-96的新用途。
技术介绍
肺癌是最为常见、死亡率最高、对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。据 报道，近50年来很多国家的肺癌发病率和死亡率均明显增高，男性肺癌发病率和死亡率 均占所有恶性肿瘤的第一位，女性发病率占第二位，死亡率第一。肺癌可以分为小细胞肺 癌（small cell lung cancer, SCLC)和非小细胞肺癌（non small cell lung cancer, NSCLC)。据统计，约80%的肺癌为NSCLC，它是最为常见的肺癌，它主要包括腺癌、鳞状细胞 癌、大细胞未分化癌三大类。 治疗NSCLC需要根据肺癌的临床分析进行。在肿瘤发生的I、II、IIIA期，主要以 手术切除为主，对于淋巴转移严重的IV期肿瘤，通常于手术前辅以化疗或放疗。经研宄发 现，术后I期化疗者的生存周期与术后未化疗者的生存周期一致，这意味着术后I期化疗并 不发挥作用；对于II期和IIIA期患者，术后化疗对患者有所伤害，会明显缩短病人的生存 期。手术后，I期患者的5年生存率约70%、II期患者的5年生存率约50%，III期手术或化 放疗联合治疗者的5年生存率为15-30%。而对于IIIB期（已侵犯邻近重要脏器）和IV期 (已有远端转移）的患者将无法进行手术治疗，通常实行化学药物、放射线治疗或者中医中 药治疗，患者的5年生存率仅为7%。 对于NSCLC患者的及时治疗能够大大提高病人的生存率，改善病人的健康状况。 有效的早期诊断方法能够进行疾病管理，为高风险疾病患者尽早提供有效的治疗。肺癌的 早期诊断可以通过胸部X射线来了解肺内的异常情况。此外，进行血液常规检查以及痰液 病理细胞检测能够帮助肺癌的诊断。一系列深入的检查，包括支气管镜、纵隔镜、肺组织活 检和胸腔镜等技术也用于肺癌的检查诊断中。然而，NSCLC具有生长分裂缓慢、转移能力强 的特点，这为NSCLC的早期诊断带来了一定难度。在现有生理学诊断方法的基础上，我们需 要寻找其它辅助诊断方法，而生物分子标记是一个值得探索的领域。 微小 RNA (microRNA，miRNA)是一类长度约 20 个核苷酸（nucleotide, nt)的内 源性非编码RNA分子，它通过特异靶向信使RNA (messenger RNA，mRNA)，在转录后水平上 调控基因表达。miRNA在很多生物进程中起作用，例如控制发育，胚胎生成、细胞分化增殖及 凋亡，目前对多数miRNA的靶基因及功能研宄始终是RNA调控的研宄热点。研宄表明，很多 miRNA在不同肿瘤中异常表达，在肿瘤的发病机制中扮演着重要的角色。miRNA及其靶基因 的功能在肿瘤的发生发展中非常重要，一些miRNA甚至有望成为肿瘤治疗的基因靶点。而 miRNA的表达谱可能成为肿瘤诊断、预后、个性化治疗和疾病分类的潜在生物标记。肺癌中 的miRNA表达一直是研宄的热点之一。 越来越多的研宄证明，miRNA不仅在肿瘤组织中表达异常，它还存在于患者的唾 液、血浆、血清和福尔马林固定组织之中。因此，循环miRNA的研宄逐渐成为一个新型热点。 随着人体生理代谢活动的进行，人类血清中也检测出循环miRNA的存在。由于血清易于获 得，检测较为方便，且对病人的伤害较小，血清中miRNA诊断标记的研宄将会对肺癌病人的 诊断、预后、治疗等提供更为便捷的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供Hsa-miR-96在检测非小细胞癌中的应用。 本专利技术的目的之二在于提供Hsa-miR-96在检测人血清中非小细胞肺癌的应用。 miRNA的异常表达在肿瘤生理过程中扮演着重要的角色，大量miRNA被证实在 肿瘤病人的组织及血清中异常表达，从组织或血清中获得的miRNA能够作为肺癌(尤其是 NSCLC)的潜在诊断标记。本申请通过solexa测序发现，小鼠诱导肿瘤组织中大量miRNA存 在不同的表达情况，部分miRNA在肿瘤组织中表达上调，这在人类肺癌组织中也得到了验 证，这表明miRNA的表达谱可以用作肿瘤组织的诊断标记。 同时，本专利技术还发现，人类血清中有稳定存在的miRNA。血清miRNA的异常表达与 肿瘤的发展程度具有一定联系，因此，一些miRNA可以用作NSCLC病人的血清诊断标志物。 因此，本专利技术之一涉及Hsa-miR-96,该miRNA在小鼠诱导NSCLC组织、人类NSCLC 肿瘤组织、人类NSCLC血清样本及部分常见NSCLC细胞系中表达量发生显著提高，且与肿瘤 的分型和分期具有密切关系，因此可以作为NSCLC的诊断标志。 在一个优选实例中，发现Hsa-miR-96在人类NSCLC组织中表达异常。在另一个优 选实例中，发现Hsa-miR-96在NSCLC病人血清中表达量升高，而且其表达量变化与肿瘤分 期具有密切关系。 本专利技术另一涉及一种循环miRNA的抽提方法，该方法能够提高血清中miRNA的抽 提效率及抽提纯度。 在一优选实例中，该方法能够获得足够RNA样本，可用于qRT-PCR检测及其它实 验。 本专利技术再一涉及一种NSCLC病人血清中miRNA表达丰度的检测方法。 本专利技术还涉及Hsa-miR-96在筛选治疗和诊断试剂盒中的用途。 miR-96在I期NSCLC病人血清中的表达量显著提高，能成为NSCLC早期检测的潜 在血清标记。其中所公开的为Hsa-miR-96作为NSCLC病人血清循环miRNA标记的首次报 导，该专利技术在临床上为肺癌检测提供了一定的应用价值。【附图说明】 图1为Solexa测序结果。表中所列的是部分小鼠诱导NSCLC肿瘤模型中表达差 异的miRNA。 图2 诱导小鼠 NSCLC模型中Mmu-miR-96的表达差异。L822T1是基因型KRAS+/+ 的良性肿瘤，L703T2是基因型LKBryVKRASv+的恶性肿瘤，L903T1为P53 +/KRAS+/+的恶性 肿瘤。 图3人常见NSCLC细胞系中Hsa-miR-96的表达差异。其中Beas-2B为人类非肿 瘤性肺上皮细胞系，U6为内参，使用法计算相对表达量，图示为3个重复实验结果。 图4人类NSCLC组织中H当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种Hsa‑miR‑96在检测非小细胞肺癌中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：金由辛，马中良，张冰洁，王强，袁天蔚，李艳利，赵波涛，
申请(专利权)人：上海大学，
类型：发明
国别省市：上海;31
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