D-二聚体近红外荧光法检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种D-二聚体近红外荧光法检测试剂盒及其用途。本发明专利技术提供的一种D-二聚体近红外荧光法检测试剂盒，包括位于背板上的试剂条，试剂条从加样端开始依次为样品垫、标记有免疫荧光探针的玻璃纤维素膜、包被有抗D-二聚体抗体的硝酸纤维素膜和吸水纸。本发明专利技术所提供的检测试剂盒结合近红外荧光检测技术，可快速，准确的检测出人全血、血清或血浆中的D-二聚体。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术设及生物
，特别是设及一种D-二聚体近红外法巧光检测试剂盒 及其用途。
技术介绍
[000引D-二聚体是交联纤维特异性降解产物，也是继发性纤溶特有代谢产物。D-二聚 体是在各种病理或生理状态下，凝血系统激活导致凝血活酶将纤维蛋白原转化成纤维蛋白 体，并在活化因子XIII的作用下形成交联纤维蛋白。D-二聚体是交联纤维蛋白在纤溶酶讲 解过程中所释放碎片进一步降级产生的含有丫链的片段。受到病理因素影响，机体凝血及 纤溶动态平衡遭到破坏，凝血倾向不断增加，从而导致纤维蛋白降解产物增加。因此，D-二 聚体含量升高，表明机体内存在纤维蛋白血栓形成和纤溶发生，临床上也将D-二聚体含量 的变化作为机体高凝状态与纤溶亢进状态的分子标志物。D-二聚体的检测是临床对继发性纤溶灵敏度较高、特异性强的检验项目，是目前 判断机体高凝状态和鉴别原发性与继发性纤溶、观察溶栓治疗效果等方面有重要临床价值 的指标。D-二聚体的检测有重大的临床应用价值；可用于弥漫性血管内凝血值1C)的早期 诊断，深静脉血栓值VT)及肺栓塞的筛查，急性脑梗死的早期诊断、治疗和愈后观察，肝病 的治疗和诊断及对恶性肿瘤的疗效和愈后观察等。 因此，对D-二聚体的快速、全面、准确、特异检测显得尤为重要。
技术实现思路
鉴于W上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种D-二聚体近红外巧 光法检测试剂盒及其用途，用于建立高效可行的D-二聚体近红外巧光检测技术，解决现有 技术中的问题。本专利技术所提供的检测试剂盒结合近红外巧光检测技术，可快速，准确的检测 出人全血/血清/血浆中D-二聚体。 为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术采用W下技术方案： 本专利技术的第一方面提供一种D-二聚体近红外巧光法检测试剂盒，包括位于背板 上的试剂条，试剂条从加样端开始依次为样品垫、标记有免疫巧光探针的玻璃纤维素膜、包 被有抗D-二聚体单克隆抗体的硝酸纤维素膜和吸水纸。[000引优选的，所述免疫巧光探针为抗D-二聚体单克隆抗体包被的近红外巧光乳胶微 球颗粒。 优选的，硝酸纤维素膜上包被的抗D-二聚体单克隆抗体和所述近红外巧光乳胶 微球颗粒上包被的抗D-二聚体单克隆抗体可W为相同的抗D-二聚体单克隆抗体，也可W 为不同的抗D-二聚体单克隆抗体。 更优选的，所述硝酸纤维素膜上包被的抗D-二聚体单克隆抗体为Abeam嚴Anti-D-Dimer抗体巧D1]，所述近红外巧光乳胶微球颗粒上包被的抗D-二聚体单克 隆抗体为Abeam盛Anti-D-Dimer抗体巧D1]，或所述硝酸纤维素膜上包被的Abeam? Anti-D-Dimer抗体巧Dl]，所述近红外巧光乳胶微球颗粒上包被的抗D-二聚体单克隆抗体 为Abeam篡Anti-D-Dimer抗体I!孤2]。 更优选的，所述巧光乳胶微球颗粒的直径为140-160nm。[001引近红外光（NIR)，是介于可见光（VI巧和中红外光（MIR)之间的电磁波，ASTM定义NIR为波长在780nm-2526皿范围内的电磁波。在近红外光区，生物体自吸收或巧光强度很 小，可避免背景干扰。同时由于散射光强度与波长的四次方呈反比，近红外区的散射干扰大 为减少。 本专利技术的第二方面提供所述D-二聚体近红外巧光法检测试剂盒的制备方法，包 括如下步骤： 1)用缓冲液将巧光乳胶微粒离屯、清洗并将乳胶颗粒分散，在清洗好的乳胶颗粒分 散液中加入抗D-二聚体单克隆抗体；加入邸CA使抗体与颗粒偶联；再加入封闭液封闭乳 胶颗粒上多余的基团，制备获得探针溶液； 2)将含有抗D-二聚体单克隆抗体的缓冲溶液喷加到硝酸纤维素膜上，烘干备用；扣将步骤1)制备获得的探针溶液浸润玻璃纤维薄膜，干燥备用； 4)将步骤2)所得的硝酸纤维素膜、步骤3)所得的标记有免疫巧光探针的玻璃纤 维素膜、样品垫、吸水纸及背板组装制备成D-二聚体近红外巧光检测试剂盒。 优选的，所述步骤1)中，再加入封闭液封闭乳胶颗粒上多余的基团，并加入冠離， 制备获得探针溶液，所述冠離选自二环已基-18-冠-6、15-冠離-5、18-冠離-6中的一种 或多种的组合。 更优选的，步骤1)制备获得的探针溶液中冠離的浓度为0.l-20mg/ml，更优选为 4-8mg/ml。 优选的，所述步骤1)中，缓冲液为磯酸盐（PB巧缓冲液。[002U 更优选的，所述PBS缓冲液为0. 009-0.0 llmol/L，PH7. 25-7. 35的PBS缓冲液。 优选的，所述步骤1)中，巧光乳胶微粒的直径为140-160nm。 优选的，所述步骤1)中，乳胶颗粒、抗D-二聚体单克隆抗体、邸CA的重量比为 9-11 ;0. 9-1. 1 ;0. 9-1. 1。 在本专利技术一优选实施例中，乳胶颗粒、抗D-二聚体单克隆抗体、邸CA的投料量分 别为lmg、100ug、100ug。 优选的，所述封闭液为己醇胺，加入量为适量，本领域技术人员可根据实际情况调 整己醇胺的用量。 优选的，所述步骤2)中，所述缓冲溶液为PBS缓冲液。 本领域技术人员可选取适当浓度和抑的PBS缓冲液，更优选为0. 009-0.0 llmol/ L，PH7. 25-7. 35 的PBS缓冲液。[002引优选的，所述步骤2)中，含有抗D-二聚体单克隆抗体的缓冲溶液中还含有冠離， 所述冠離选自二环已基-18-冠-6、15-冠離-5、18-冠離-6中的一种或多种的组合。 更优选的，所述含有抗D-二聚体单克隆抗体的缓冲溶液中冠離的浓度为 0.l-20mg/ml，更优选为 4-8mg/ml。 优选的，所述步骤2)中，含有抗D-二聚体单克隆抗体的缓冲溶液中抗D-二聚体 单克隆抗体的浓度为1. 8-2. 2mg/ml。 优选的，所述步骤2)中，抗D-二聚体单克隆抗体的缓冲溶液的喷加量为 0. 9-1. lul/cm。 优选的，所述步骤2)中，烘干的具体条件为36-38°C烘箱烘干。 所述喷加过程利用微量蛋白点膜系统。 优选的，所述步骤1)中的抗D-二聚体单克隆抗体为Abeam恋Anti-D-Dimer抗体 曲)1]，所述步骤2)中的抗D-二聚体单克隆抗体为Abeam?Anti-D-Dimer抗体曲)1]，或 所述步骤1)中的抗D-二聚体单克隆抗体为Abeam?Anti-D-Dimer抗体巧D1]，所述步骤 2)中的抗D-二聚体单克隆抗体为Abeam嚴Anti-D-Dimer抗体脚)2]。 优选的，所述步骤3)中，干燥的具体条件为真空干燥机干燥。 本专利技术的第S方面提供了所述D-二聚体近红外巧光法检测试剂盒在D-二聚体检 测领域的用途。 所述用途具体为使用所述D-二聚体近红外巧光法检测试剂盒对样品中的D-二聚 体进行检测，所述样品选自人全血、血清或血浆中的一种或多种的组合。[003引本专利技术所提供的检测试剂盒W人全血/血清/血浆为检测样本，结合近红外巧光 检测技术，可快速，准确的检测出患者标本中的D-二聚体。所述试剂盒采用免疫巧光层析 法，其最小可测量可达2.Oug/l，检测方便、成本低，灵敏度高，特异性好，比同类定量诊断试 剂价格低20-30%，大大节约了社会医疗成本，检测过程中样品收集及处理简单，可快速准 确的获得结果，非常适合突发事件现场和基层使用，并可应用到临床检测中，为临床治疗提 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种D‑二聚体近红外荧光法检测试剂盒，包括位于背板上的试剂条，试剂条从加样端开始依次为样品垫、标记有免疫荧光探针的玻璃纤维素膜、包被有抗D‑二聚体单克隆抗体的硝酸纤维素膜和吸水纸，所述免疫荧光探针为抗D‑二聚体单克隆抗体包被的近红外荧光乳胶微球颗粒。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李林，
申请(专利权)人：上海凯创生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31