本发明专利技术涉及一种鲍曼不动杆菌A1S_1610蛋白以及包含蛋白的载体、工程菌、组合物或试剂盒，以及该蛋白的制备方法和应用。本发明专利技术的A1S_1610蛋白从未用于重组亚单位疫苗领域，本发明专利技术的A1S_1610蛋白能够有效激发机体引起保护性免疫应答，从而抵御鲍曼不动杆菌致死性感染。本发明专利技术还公开了构建所述重组蛋白的表达载体、转化宿主菌而制备该重组蛋白的方法，以及所述重组蛋白在制备抗鲍曼不动杆菌的亚单位疫苗以及相关检测试剂盒中的用途。本发明专利技术采用基因工程技术克隆表达此的保护性抗原成分A1S_1610蛋白，表达量高，便于分离纯化，高效安全。所述基因工程重组疫苗具有良好的抗鲍曼不动杆菌感染的免疫保护效果。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，涉及一种鲍曼不动杆菌A1S_1610蛋白及其在制备鲍 曼不动杆菌疫苗中的应用。
技术介绍
鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii)为非发酵革兰阴性杆菌，广泛存在于 自然界，属于条件致病菌。广泛存在于自然界的水及土壤、医院环境及人体皮肤、呼吸道、消 化道和泌尿生殖道中，为条件致病菌。科室分布以ICU最多，其次为呼吸内科患者。感染的 病人多是老年患者、危重疾病及机体抵抗力弱的患者，以及使用各种侵入性操作和长期使 用广谱抗生素治疗的患者。可引起肺炎、烧伤感染、伤口感染、脑膜炎、尿路感染、腹膜炎、心 内膜炎、骨髓炎、关节炎等，并可进一步发展为败血症。国内资料表明，鲍曼不动杆菌约占临 床分离的不动杆菌的70%以上。鲍曼不动杆菌对第三代和第四代头孢菌素的耐药率已达 63.0%~89. 9%。对四种氨基糖苷类（阿米卡星、庆大酶素、奈替米星、妥布霉素）和环丙 沙星的耐药率达96. 3%。我国目前的绝大多数菌株对亚胺培南、美罗培南、头孢鲍曼不动杆 菌派酮/舒巴坦和多黏菌素 B保持敏感，但在呼吸道感染的治疗中效果较差。 由于现有抗生素难以有效治疗鲍曼不动杆菌感染，且鲍曼不动杆菌引起的感染性 疾病也变得日益复杂，近年来医学界的相关的病原微生物研宄学习者也对鲍曼不动杆菌的 预防和治疗进行了相关研宄。西班牙Michael J. McCnnell等人利用急性脓血症小鼠模型 对鲍曼不动杆菌灭活全菌疫苗的主动免疫和被动免疫两个方面进行了评价；同时，Michael J. McCnnell等人在2011年对鲍曼不动杆菌的外膜蛋白疫苗进行了研宄，结果提示OMC可 以刺激T细胞分泌IFN- γ及活化Thl及Th2辅助B细胞分泌IgG抗体，均对小鼠具有良好 的免疫保护性。但是由于全菌疫苗为传统疫苗，其所含疫苗成分复杂，且具有一定的毒副作 用，因此安全性不高。外膜复合物疫苗成分复杂，同时含有大量的内毒素，对机体的毒副作 用较大，因此研发一种质量可控，安全有效的鲍曼不动杆菌疫苗是必然的趋势。
技术实现思路
本专利技术提供一种鲍曼不动杆菌A1S_1610蛋白或其变体，所述A1S_1610蛋白具有 如SEQ ID NO. 1、SEQ ID NO. 3或SEQ ID NO. 5所示的氨基酸序列；优选地，其氨基酸序列 如SEQ ID NO. 1、SEQ ID NO. 3或SEQ ID NO. 5所示。然而，本领域技术人员理解，可在SEQ ID N0:l、3或5中天然产生或人工引入突变或变异（包括但不限于，置换，缺失和/或添 加），而不影响A1S_1610的生物学特性。因此，在本专利技术中，术语"A1S_1610"意欲包括全 长A1S_1610蛋白、其成熟肽和其变体，包括SEQ ID NO: 1、3或5所示的多肽以及其天然或 人工的变体，所述变体保留了 A1S_1610的生物学特性，即，具有强免疫原性。并且，当描述 A1S_1610的序列片段时，其不仅包括SEQ ID NO: 1、3或5所示的多肽的序列片段，还包括该 多肽的天然或人工变体中的相应序列片段。 根据本专利技术，当在蛋白/多肽的背景中使用时，术语"变体"是指这样的蛋白，其氨 基酸序列与参照蛋白/多肽（例如，本专利技术的A1S_1610蛋白）的氨基酸序列具有一个或 多个（例如1-10个或1-5个或1-3个）氨基酸差异（例如，保守氨基酸置换），或者具有 至少 60%，80%，85%，90%，91%，92%，93%，94%，95%，96%，97%，98%，或 99% 的同一 性，并且其保留了参照蛋白/多肽的必要特性。在本专利技术中，蛋白/多肽（例如，本专利技术的 A1S_1610蛋白）的必要特性可以指，具有强免疫原性。 根据本专利技术，术语"同一性"用于指两个多肽之间或两个核酸之间序列的匹配情 况。当两个进行比较的序列中的某个位置都被相同的碱基或氨基酸单体亚单元占据时（例 如，两个DNA分子的每一个中的某个位置都被腺嘌呤占据，或两个多肽的每一个中的某个 位置都被赖氨酸占据），那么各分子在该位置上是同一的。两个序列之间的"百分数同一 性"是由这两个序列共有的匹配位置数目除以进行比较的位置数目XlOO的函数。例如， 如果两个序列的10个位置中有6个匹配，那么这两个序列具有60%的同一性。例如，DNA 序列CTGACT和CAGGTT共有50%的同一性（总共6个位置中有3个位置匹配）。通常，在 将两个序列比对以产生最大同一性时进行比较。这样的比对可通过使用，例如，可通过计 算机程序例如Align程序（DNAstar, Inc.)方便地进行的Needleman等人（1970) J. Mol. Biol. 48 :443-453的方法来实现。还可使用已整合入ALIGN程序（版本2.0)的E. Meyers 和 W. MiIler (Comput. Appl Biosci. ,4:11-17(1988))的算法，使用 PAM120 权重残基表 (weight residue table)、12的缺口长度罚分和4的缺口罚分来测定两个氨基酸序列之间 的百分数同一1性。此外，可使用已整合入GCG软件包（可在www. gcg. com上获得）的GAP 程序中的 Needleman 和 Wunsch (J MoI Biol. 48:444-453 (1970))算法，使用 Blossum62 矩 阵或 PAM250 矩阵以及 16、14、12、10、8、6 或 4 的缺口权重（gap weight)和 1、2、3、4、5 或 6 的长度权重来测定两个氨基酸序列之间的百分数同一性。 如本文中使用的，术语"保守置换"意指不会不利地影响或改变包含氨基酸序列 的蛋白/多肽的生物学活性的氨基酸置换。例如，可通过本领域内已知的标准技术例如定 点诱变和PCR介导的诱变引入保守置换。保守氨基酸置换包括用具有相似侧链的氨基酸 残基替代氨基酸残基的置换，例如用在物理学上或功能上与相应的氨基酸残基相似（例如 具有相似大小、形状、电荷、化学性质，包括形成共价键或氢键的能力等）的残基进行的置 换。已在本领域内定义了具有相似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有碱性侧 链（例如，赖氨酸、精氨酸和组氨酸）、酸性侧链（例如天冬氨酸、谷氨酸）、不带电荷的极 性侧链（例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸）、非 极性侧链（例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸）、β分支 侧链（例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸）和芳香族侧链（例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、 组氨酸）的氨基酸。因此，优选用来自相同侧链家族的另一个氨基酸残基替代相应的氨基 酸残基。鉴定氨基酸保守置换的方法在本领域内是熟知的（参见，例如，Brmiimell等人， Biochem. 32:1180-1187 (1993) ;Kobayashi 等人 Protein Eng. 12 (10) :879-884 (1999);和 Burks 等人 Proc. Natl Acad.Set USA94:412_417(1997)，其通过引用并入本文）。 根据本专利技术，AlS_1610蛋白与其他蛋白的连接可本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种鲍曼不动杆菌A1S_1610蛋白，其特征在于:该蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：曾浩，邹全明，冯强，石云，敬海明，赵莉群，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学，
类型：发明
国别省市：重庆;85
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