一种PLA2R抗体定量检测试纸条及制作、检测方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及一种PLA2R抗体定量检测试纸条及制作、检测方法。该试纸条利用间接法测抗体的原理，分别将PLA2R包被在硝酸纤维素膜上，量子点偶联的抗人IgG抗体喷涂在结合物垫上，再将粘性PVC底板上依次搭接样本垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，并裁切成一定宽度的试纸条装成检测卡，可由荧光分析仪测出抗体浓度值，用于定量检测样本中的PLA2R抗体。利用量子点免疫层析法，可非创伤、低风险、安全、廉价、精确和快速的定量检测血清、血浆和全血中的PLA2R抗体含量，能为特发性膜性肾病的初筛和病情监测提供辅助作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，特别涉及一种PLA2R抗体定量检测试纸条及制作、检 测方法。
技术介绍
膜性肾病按发病原因可分为特发性和继发性膜性肾病，其诊断上要依靠临床表现 及肾脏穿刺术。肾脏穿刺术是一种侵入式的诊断方法，对病人有一定的伤害。国外研宄发 现约75%的特发性膜性肾病患者可以通过血清学检测检出抗PLA2R抗体，国内也有文献显 示在国人中检测阳性率更高，达到82%，而继发性膜性肾病及其他类型肾小球疾病患者的 检出率很低，健康人群均为阴性。血清学PLA2R抗体的定量检测可以为特发性膜性肾病的 初筛和病情监测提供辅助作用。因此，开发非创伤、低风险、安全、廉价、精确和快速的PLA2R 定量测定试剂盒有极其重要的意义。 免疫层析技术以多种膜材组合为固定相，作为液相的样品通过毛细流原理从加样 一端泳流至标记物垫上，与固定在标记物垫上的抗原或抗体标记物（如胶体金、荧光稀土 元素等）反应形成免疫复合物，该带有标记的免疫复合物继续通过涌流到达反应膜上固定 的检测线，与检测线上的抗原或抗体发生免疫反应从而被截留富集显色，达到快速检测的 目的。免疫层析技术最常见的标记物是胶体金，应用非常广泛，也非常成功。由于胶体金标 记是通过静电吸附的原理，在流体中不稳定，标记的分子容易脱落，且只有胶体金颗粒富集 到一定肉眼可见的量的时候才能判读，同时，胶体金免疫层析技术只可对被检物定性分析。 目前，通过胶体金免疫层析技术来快速检测磷脂酶A2受体（PLA2R)抗体的只有在公布号为 CN102159951A中国专利申请中提到，但如上所述，不能定量且胶体金稳定性差。【专利技术内容】 本专利技术的目的在于提供一种PLA2R抗体定量检测试纸条及制作、检测方法，能够 准确、快速、灵敏、定量的检测人血中的PLA2R抗体。 本专利技术解决其技术问题，所采用的技术方案是提供一种PLA2R抗体定量检测试纸 条及制作、检测方法。具体的，包括一个检测试剂盒，所述检测试剂盒包括PLA2R抗体检测 卡及样品缓冲液，PLA2R抗体检测卡内装有PLA2R抗体检测试纸条。检测卡可由荧光分析 仪测出PLA2R抗体浓度值。所述试纸条包括在粘性底板上依次搭接的样本垫、结合物垫、硝 酸纤维素膜和吸水纸；所述的结合物垫上喷涂有抗人IgG抗体偶联的量子点，所述的硝酸 纤维素膜上包被有PLA2R抗原作为检测线，硝酸纤维素膜上还包被有抗抗体作为质控线， 所述抗抗体为抗量子点偶联抗体的抗体。检测卡是以间接法模式检测PLA2R抗体。 所述PLA2R，可以是天然纯化的PLA2R，也可以是基因重组获得的PLA2R或PLA2R 片段；PLA2R抗体是由PLA2R免疫动物所得到的PLA2R抗体，可以是诸如兔源、羊源或其他 哺乳动物来源的多克隆抗体，也可以是鼠源单克隆抗体。 量子点偶联的抗人IgG抗体，可以是抗人不同IgG亚型的抗体，如鼠抗人IgG4抗 体。该抗人IgG抗体可以是诸如兔源、羊源或其他哺乳动物来源的多克隆抗体，也可以是鼠 源单克隆抗体。质控线上的抗抗体是抗量子点偶联抗体的抗体。例如若量子点偶联的抗体 是鼠抗人IgG4抗体，那么该抗抗体必须是抗鼠的抗体；又如若量子点偶联的抗体是羊抗人 IgG抗体，那么该抗抗体必须是抗羊的抗体； 所述量子点为包括IB、IIB、IIIA、IVA、VA、VIA族中的两种以上元素组成的单 个晶核结构，如CdS、CdSe、CdTe、ZnSe、InP、InAs、HgCdTe等，或是核壳结构，如CdSe/ZnS、 ZnCdS/ZnS、MnSe/ZnSe/ZnS、CuInZnS/ZnS等。 量子点由以上元素构成外，还具有表面修饰基团，如-C00H、-NH2、-SH、-CH0等基 团，可以通过一些化学试剂如戊二醛、碳二亚胺等偶联生物大分子，如蛋白质、核酸及其他 有机分子。 所述量子点的粒径范围为2~lOOOnm，激发光波长范围为200~600nm，发射光波 长为400~800nm。 一种PLA2R抗体检测试纸条的制作方法，包括以下步骤： a.用量子点偶联抗人IgG抗体得到量子点-抗人IgG抗体复合物，并将其喷涂在 结合物垫上；b.分别将PLA2R包被到硝酸纤维素膜上作为检测线，将抗抗体包被到硝酸纤维素 膜上作为质控线，检测线和质控线间的距离为3~10mm。c.在粘性底板上依次搭接样本垫、喷涂有量子点-抗人IgG抗体复合物的结合物 垫、设置有检测线和质控线的硝酸纤维素膜、吸水纸，并裁切成所需宽度即为PLA2R抗体检 测试纸条。 检测线和质控线的制备方法为：分别用0. 005-0. 2M，pH6. 0-pH9. 0的包被缓冲液 稀释PLA2R和抗抗体至0.l-5mg/ml，所述包被缓冲液为磷酸盐、硼砂、碳酸盐、可含糖、醇类 中的一种；用划膜仪或喷膜仪分别将PLA2R和抗抗体包被到硝酸纤维素膜上，包被浓度为 0. 4-2y1/cm;喷涂完毕后，放置在环境湿度为30%以下，温度在16°C_45°C的环境中，烘干 lh以上，封存。 抗人IgG抗体偶联量子点的方法：将抗人IgG抗体加入到量子点溶液中或是将量 子点加入到抗人IgG抗体溶液中偶联得到量子点-抗人IgG抗体复合物；所述量子点可在 适当的溶液中活化，活化试剂可以为EDC、NHS或戊二醛或其他交联剂等，将量子点与活化 剂结合即的量子点溶液。 结合物垫上喷涂量子点-抗人IgG抗体复合物的条件是：将量子点-抗人IgG抗 体复合物稀释稀释5-200倍，用喷膜仪按2-100y1/cm的量喷涂到结合物垫上，在环境湿度 小于30%，温度在35-37°C的环境下烘烤l_5h，干燥后封存。 所述PLA2R抗体检测卡，包括上壳体和下壳体，所述上壳体与下壳体间放置 有PLA2R抗体检测试纸条，所述上壳体上设置有加样孔、观察窗和信息区，所述加样孔与 PLA2R抗体检测试纸条上的样本垫对应，观察窗与硝酸纤维素膜上的检测线和质控线对应； 所述信息区上喷涂有用于识别病人ID的二维码、条形码或磁卡；所述PLA2R抗体检测卡同 样品缓冲液一起装在试剂盒内，试剂盒上设置有标定芯片。 本专利技术还提供了一种PLA2R抗体的检测方法：包括以下步骤： 1)先用试剂盒上的标定芯片标定荧光分析仪，保存标定数据； 2)取10微升血清或血浆样品，或15微升全血样品加入样品缓冲液，混合后10秒 钟，加入检测卡加样孔； 3)将检测卡插入荧光分析仪的检测孔，放置3-4分钟，荧光分析仪即可读出PLA2R 的浓度值。 有益效果：将量子点和免疫层析技术相结合，可使试纸条既具有稳定性高的优点， 同时，又可对PLA2R抗体进行定量检测，且检测又灵敏度高；该检测方法还具有检测时间 短，效率高的特点。相对于传统的胶体金和有机荧光染料，量子点具有稳定、可定量的优点， 因此，可以很好的检测出PLA2R抗体的存量。本专利技术利用量子点免疫层析法，非创伤、低风 险、安全、廉价、精确和快速的定量检测血清、血浆和全血中的PLA2R抗体含量，可以为特发 性膜性肾病的初筛和病情监测提供辅助作用。【具体实施方式】 -种检测试剂盒，所述检测试剂盒包括PLA2R抗体检测卡及样品缓冲液，PLA2R抗 体检测卡内装有PLA2R抗体检测试纸条。所述试纸条包括在粘性底板上依次搭接的样本 垫、结合物垫、硝酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种PLA2R抗体定量检测试纸条，包括在粘性底板上依次搭接的样本垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；其特征在于：所述的结合物垫上喷涂有抗人IgG抗体偶联的量子点，所述的硝酸纤维素膜上包被有PLA2R抗原作为检测线，硝酸纤维素膜上还包被有抗抗体作为质控线，所述抗抗体为抗量子点偶联抗体的抗体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张永顶，马伟民，马新民，张大准，
申请(专利权)人：深圳市伯劳特生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44