一种用于急症腹痛疾病排查的免疫检测微流控芯片及其制备方法和检测方法技术

本发明专利技术公开了一种用于急症腹痛疾病排查的免疫检测微流控芯片，所述检测微流控芯片包括进样口、微流体通道、反应池、检测单元和出样口，所述进样口、反应池和出样口由微流体通道串行联接，所述检测单元分布于反应池中。本发明专利技术还公开了上述用于急症腹痛疾病排查的免疫检测微流控芯片的制备方法和检测方法。发明专利技术基于微流控芯片技术平台，集样品进样、免疫反应和光电检测于一体，极大地简化了操作流程，降低了样品和试剂消耗，并且不需要配备昂贵的仪器，极大地降低了使用成本，使现场即时检测成为可能，具有可预见的巨大的经济价值和社会价值。本发明专利技术具有检测便捷、样品消耗少、反应效率高、检测时间短、检测成本低等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微流控芯片
，提供了一种用于急症腹痛疾病排查的免疫检测 微流控芯片及其制备方法和检测方法。
技术介绍
急症腹痛（acute abdominal pain)是急诊患者最常见的病症之一。其就诊全年 均可出现，高峰分别是秋季（9~11月）和夏季（6~8月），就诊年龄集中在15~44岁 之间（占就诊总数的72. 7%)。常涉及内、外、儿、妇产甚至神经、精神各科的疾病。其主要 病因是腹腔内脏器官发生病变、结构机能失常、腹外邻近器官损伤和/或全身性疾病所致。 据统计，非创伤性急症腹痛疾病中急性胰腺炎的发病率最高，其次是急性胃肠炎、急性肠梗 阻、急性阑尾炎、急性胆管炎、溃疡急性穿孔等。该类疾病往往具有发病急、变化快、病情复 杂且严重等特点，加之，目前医院急诊科临床医生趋于年轻化，在急诊诊断方面经验不足， 容易诊断有误或治疗欠妥，这样可能造成不良后果，甚至死亡。因此，对急症腹痛的诊断要 求较高，能否及时做出明确的诊断，进行合理的治疗，将直接影响着疾病的治疗与预后。针 对此现象，本专利技术提出将血清中胰蛋白酶原_2(TPS II )、血清淀粉样蛋白A(SSA)、超敏C反 应蛋白（hs-CRP)、降钙素原（PCT)与抵抗素进行联合检测的急症腹痛排查方案，研制相应 的检测试剂盒，对急症腹痛常见的急性胰腺炎、急性阑尾炎、急性腹膜炎、急性胃肠炎与溃 疡性急性穿孔进行排除。 目前，国外在临床急症腹痛的检测方面，主要通过结合患者病史，进行体格检查、 实验室辅助检查，根据患者病情选择性地进行血糖、妊娠试验、血电解质、肝肾功能、腹部CT 检查、腹腔诊断性穿刺以及腹水分析等检查分析，然后综合考虑，提出相应的治疗方案。此 外，还采用对急症腹痛患者尿胰蛋白酶原-2的检测，进行急性胰腺炎的排查，但对于急症 腹痛相关的其他疾病的排查尚没有相关生物标记物的报道。在国内，对于急症腹痛的临床 检测与国外临床检测相似，但TPS II在国外临床诊断中的应用开展较早，而在国内是近两 年陆续才开始在三级甲等医院走入临床应用，它的临床应用价值依旧处于进一步的探索 中。本专利技术通过对急症腹痛患者血清中TPS II、SSA、hs-CRP、PCT与抵抗素进行联合检测， 结合现行的微流控技术，实现对急症腹痛常见疾病的简捷、快速排查，为临床医生做出及时 合理的诊断提供辅助工具。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术的第一个目的是提供一种用于急症腹痛疾病排查的免疫检测微 流控芯片。通过建立一种多指标联合检测的免疫分析方法，为急症腹痛的相关疾病的排查 提供一种灵敏度高、精确性好并且方便快速的微流控分析方法，帮助临床医生对急症腹痛 相关疾病做出及时诊断，也为病情评估或预后判断进行辅助判断。 本专利技术的第二个目的是提供了用于急症腹痛疾病排查的免疫检测微流控芯片的 制备方法。 本专利技术的第三个目的是提供了用于急症腹痛疾病排查的免疫检测微流控芯片的 检测方法。 技术方案：为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种用于急症腹痛疾病排查的 免疫检测微流控芯片，所述检测微流控芯片包括进样口、微流体通道、反应池、检测单元和 出样口，所述进样口、反应池和出样口由微流体通道串行联接，所述检测单元分布于反应池 中。 进一步地，所述检测单元包括五个检测单元，依次为胰蛋白酶原_2检测单元、超 敏C反应蛋白检测单元、血清淀粉样蛋白A检测单元、降钙素原检测单元及抵抗素检测单 J Ll 〇 进一步地，所述的微流控芯片由玻璃石英、聚二甲基硅氧烷（PDMS)、聚甲基丙烯酸 甲酯（PMM)、聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET)或聚酯（PC)材料中的一种或几种加工而成。 进一步地，所述芯片的形状为圆柱状，胰蛋白酶原_2(TPS II )检测单元、超敏C反 应蛋白（hs-CRP)检测单元、血清淀粉样蛋白A(SSA)检测单元、降钙素原（PCT)检测单元及 抵抗素（resistin)检测单元依次平均分布于该检测芯片的反应池中。 进一步地，所述各个检测单元预先固定有各个检测指标发生免疫反应所需的抗 体，固定方式是物理吸附、化学交联、溶胶-凝胶包埋、微珠固定中的一种或几种。 进一步地，所述的反应池其容积大于反应体系所需的各种溶液体积的最大值，以 保证能够完全容纳所需添加的试剂。 进一步地，所述的反应池和微流体通道具有避光特性。所述的避光特性是指构成 反应池和微流体通道的材料对波长600~800nm的可见光具有全吸收的性质，即该波长特 征的光无法通过芯片材料直接照射到样品溶液上。 检测过程中被测样品依次全部通过各个检测单元，保证了检测结果的准确性与可 靠性。所述的检测单元中间带有小孔，以保证抗体的固定，防止各个检测指标之间的交叉污 染及检测过程中抗原抗体的充分反应。 上述的用于急症腹痛疾病排查的免疫检测微流控芯片的制备方法，该微流控芯片 是利用ELISA双抗夹心法，利用连接于固相载体上的抗体和标记抗体分别与样品中被检测 抗原分子上两个抗原决定簇结合，形成固相抗体-抗原-标记抗体免疫复合物。 具体包括以下步骤：1)芯片氧化；2)包被抗体；3)封闭；4)加抗原；5)加标记抗 体。 上述的用于急症腹痛疾病排查的免疫检测微流控芯片的检测方法，包括以下步 骤：待检测血样品溶液借助外接的泵阀系统或其他的控流系统依次经由进样口和微流体通 道进入反应池，并在反应池中与各个检测单元内固定的荧光或酶标记的抗体进行抗原抗体 特异性反应，产生特定的信号；最后采集反应产物产生的信号强度并进行分析，从而实现待 测样品中的抗原含量的检测，然后结合制定的急症腹痛疾病的筛查方案，实现对急症腹痛 疾病的排查。 有益效果：本专利技术基于微流控芯片技术平台，集样品进样、免疫反应和光电检测于 一体，极大地简化了操作流程，降低了样品和试剂消耗，并且不需要配备昂贵的仪器，极大 地降低了使用成本，使现场即时检测成为可能，具有可预见的巨大的经济价值和社会价值。【附图说明】 图1 一种用于单样品的急症腹痛疾病排查的免疫检测微流控芯片示意图，（a)为 该芯片的侧视平面图，（b)为该芯片的检测单元的俯视图，（c)为该芯片的检测单元侧视 图；其中：1为进样口，2为微流体通道，3为反应池，4为出样口，5为检测单元，A为TPS II 检测单元，B为SSA检测单元，C为hs-CRP检测单元，D为PCT检测单元，E为抵抗素检测单 元； 图2急症腹痛疾病排查的免疫检测微流控芯片检测原理图。【具体实施方式】 为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照 附图，对本专利技术进一步详细说明。 实施例1 : 一种检测微流控芯片，依次包括进样口 1、微流体通道2、反应池3、检测单元5和出 样口 4,所述进样口 1、反应池3和出样口 4由微流体通道2串行联接，所述检测单元5分布 于反应池3中。反应池3中包括五个检测单元，依次为胰蛋白酶原-2检测单元、超敏C反 应蛋白检测单元、血清淀粉样蛋白A检测单元、降钙素原检测单元及抵抗素检测单元。微流 控芯片由玻璃石英、聚二甲基硅氧烷（PDMS)加工而成。 芯片的形状为圆柱状，胰蛋白酶原-2(TPS II )检测单元、超敏C反应蛋白 (hs-CRP)检测单元、血清淀粉样蛋白当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于急症腹痛疾病排查的免疫检测微流控芯片，其特征在于，所述检测微流控芯片包括进样口（1）、微流体通道（2）、反应池（3）、检测单元（5）和出样口（4），所述进样口（1）、反应池（3）和出样口（4）由微流体通道（2）串行联接，所述检测单元（5）分布于反应池（3）中。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：许佩佩，
申请(专利权)人：南京闻智生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32