免疫调节性小细胞及使用方法技术

本公开涉及包含胆固醇依赖性细胞溶素蛋白的免疫调节性细菌小细胞和使用所述小细胞的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】 相关申请的交叉引用 本申请根据35U.S.C. § 119(e)要求2012年10月2日递交的美国临时申请第 61/709102号的优先权，其通过引用整体明确地并入本文中。 序列表引用 本申请连同电子形式的序列表一起递交。序列表提供为2013年10月2日生成、 大小20Kb、标题SEQLISTING. TXT的文件。电子形式序列表的信息通过引用整体并入本文 中。 专利技术背景
本申请涉及用于治疗疾病如膀胱癌和其他恶性肿瘤的免疫调节性真细菌小细胞 的组合物及制备、纯化、配制和使用方法。 相关领域的描沐 提供了本专利技术背景的以下描述以帮助理解本专利技术，但并非承认其描述或构成了本 专利技术的现有技术。本申请中提及或叙述的文章、专利和专利申请及所有其他文件和可电子 获取的信息的内容，均通过引用整体并入本文中，其程度就像明确和单独地指出通过引用 并入每个单独的出版物。申请人保留从任何这样的文章、专利、专利申请或其他文件实际并 入任何和所有材料和信息至本申请的权利。 已熟知免疫系统在预防癌症中起重要作用。越来越清楚免疫调节可能是癌 症治疗的具吸引力的治疗方式。使用最久的市售抗癌免疫调节治疗剂为牛分枝杆菌 (Mycobacterial bovis)、卡介苗（BCG)的活的减毒菌株，其被用作非肌肉侵入性膀胱癌治 疗的术后辅助治疗。其他非市售实验性抗癌免疫调节方法包括使用细菌的其他活的减毒物 种，如鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium)、双歧杆菌（Bifidobasterial)、单核细 胞增多性李斯特菌（Listeria monocytogenes)、酿胺链球菌（Streptococcus pyrogenes)、 粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens)、诺维氏梭菌（Clostridium novyi)、猪霍乱沙门氏 菌（Salmonella choleraesius)和霍乱弧菌（Vibrio cholera)。虽然在某种程度上有效， 使用的每种菌株受到感染风险、害怕活的减毒菌株遗传回复至致病性以及败血症的限制。 所有这些方法均出现了在最有效剂量或接近最有效剂量时发生的具毒性活细菌感染的极 大毒性回复。这造成了每种菌株类型的较窄的治疗指数。 为了解决活细菌作为免疫调节治疗的毒性问题，其他人已尝试使用不同的细菌组 分（与完整的活生物体相反）来产生相同的免疫效应。这种类型的实验性治疗剂包括：纯 化的细菌毒素、纯化的促炎性脂多糖（LPS)、纯化的磷壁酸（TCA)和其他细菌细胞壁制剂， 以及其他细菌亚细胞级分。这些方法改善了毒性特性，但在一些情况下伴随功效的损失。另 外，许多仅刺激极化免疫反应（Thl或Th2)，大多数刺激Th2 (产生抗体的）反应。有文献 合理而充分记载的是，Thl (细胞免疫反应）反应看起来对具有抗肿瘤免疫调节效应是优先 的。最后，这些制剂可能很难以支持市场需求的规模和质量制备，并且最终仅可生成不能产 生抗肿瘤效应的免疫反应子集。在用于治疗大多数癌症的蛋白毒素的情况下，蛋白毒素的 功效由于对正常组织具有毒性而明显受限。另外，有助于系统性暴露水平的药物代谢动力 学（PK)参数，通常不被且不能被完全优化以同时最大化抗肿瘤活性和最小化副作用，特别 是当相同的细胞靶标或机制负责抗肿瘤活性和正常组织毒性时。再次地，这引起对大多数 蛋白毒素共有的非常窄的治疗指数。 除了作为免疫调节"通用物"的活的细菌载体和细菌组分外，其他研宄者已尝试开 发不同的、特异性的Thl免疫调节性细胞因子和趋化因子作为抗癌治疗剂。实例包括但不 限于：干扰素 γ (IFN-Y)、干扰素 α (IFN-α)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GMCSF)、月中 瘤坏死因子a (TNF- α )、白介素-2 (IL-2)、白介素-12 (IL-12)和白介素-18 (IL-18)。这些 方法中的每种受限于预期不到的和严重的毒性，以及在单独给药时具有很少或没有免疫治 疗益处。在某种程度上已清楚，单种细胞因子或趋化因子试剂并不引起具有抗癌效应所需 的完整Thl免疫反应谱，并且这些因子可能以随时间变化的不同水平一起发挥作用。用多 重产物制剂（formulation)来重演（recapitulate)和协调（orchestrate)，这是近乎不可 能的免疫信号转导事件级联。大多数单种试剂细胞因子在临床上失败了，除了用于治疗慢 性肝炎C病毒感染的聚乙二醇化干扰素外。 基于观察到的这些开发免疫调节性抗癌治疗剂的方法的限制，人们需要免疫调节 性治疗，其能够模拟活细菌感染而不引入感染和感染相关毒性的风险，同时仍然引起足以 赋予抗癌活性的有效和不同的免疫反应。 专利技术概述 一些实施方案公开了细菌小细胞，其包含胆固醇依赖性细胞溶素蛋白，其中所述 小细胞不显示抗体或包含抗体的Fc区的其他分子。 在一些实施方案中，胆固醇依赖性细胞溶素蛋白选自：李斯特菌溶素0、李斯特 菌溶素0 L461T、李斯特菌溶素0 E247M、李斯特菌溶素0 D320K、李斯特菌溶素0 E247M、 李斯特菌溶素0 D320K、李斯特菌溶素0 L461T、链球菌溶素0、链球菌溶素0 c、链球菌 溶素〇 e、球菌溶素（sphaericolysin)、炭疽杆菌溶素0(anthrolysin 0)、赌状芽孢杆 菌溶素（cereolysin)、苏云金芽孢杆菌溶素0(thuringiensilysin 0)、韦氏芽孢杆菌 溶素（weihenstephanensiIysin)、蜂房类芽胞杆菌溶素（alveolysin)、短芽孢杆菌溶 素（brevilysin)、丁酸芽孢梭菌溶素（butyriculysin)、破伤风溶素0、诺维氏芽孢梭 菌溶素（novyilysin)、凝集素溶素（lectinolysin)、肺炎球菌溶素、缓症链球菌溶素 (mitilysin)、假肺炎球菌溶素、猪链球菌溶素、中间链球菌溶素（intermedilysin)、伊氏李 斯特菌溶素（ivanolysin)、斯氏李斯特菌溶素0(seeligeriolysin 0)、阴道加德纳菌溶素 (vaginolysin)和化脓隐秘杆菌溶素（pyolysin)。在一些实施方案中，胆固醇依赖性细胞 溶素蛋白为产气荚膜梭菌溶素〇(perfringolysin 0)。在一些实施方案中，胆固醇依赖性细 胞溶素蛋白包含SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列。 在一些实施方案中，小细胞还包含侵袭素。在一些实施方案中，小细胞不包含侵袭 素。 在一些实施方案中，小细胞还包含Thl细胞因子。在一些实施方案中，Thl细胞因 子选自：IL-2、GMCSF、IL-12p40、IL-12p70、IL-18、TNF-a 和 IFN-γ。 在一些实施方案中，小细胞还包含Th2细胞因子。在一些实施方案中，Th2细胞因 子选自：IL_1 α、IL-I β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-IO 和 IL-13。 在一些实施方案中，小细胞还包含磷脂酶。在一些实施方案中，磷脂酶为PC-PLC 或PI-PLC。 在一些实施方案中，小细胞包含蛋白毒素，其选自：白喉毒素的片段A/B、 白喉毒素的片段A、炭疽毒素 LF和EF、腺苷酸环化酶毒本文档来自技高网...

【技术保护点】
细菌小细胞，其包含胆固醇依赖性细胞溶素蛋白，其中所述小细胞不显示抗体或包含抗体的Fc区的其他分子。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：马修·J·贾卡洛内，
申请(专利权)人：瓦克星治疗有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国;US